细菌数量测定

1、细菌数量测定 一、物理计数 1计数器测定法即用血细胞计数器举行计数。取一定体积的样品细菌悬液置于细胞计数器的计数室内，用显微镜观看计数。因为计数室的容积是一定的（0.1 mm3)，因而可按照计数器刻度内的细菌数计算样品中的细菌数量。本法简便易行，可立刻得出结果。 2电子计数器计数法电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变幻，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻显然增强，形成一个脉冲，白动记录在电子记录装置上。该法测定结果较精确，但只识别颗粒大小，而不能区别是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何其他碎片。 3比浊法比浊法是按照菌悬液的透光度间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓

2、度在一定范围内与透光度成反比，与吸光度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用吸光度表示样品中菌液浓度。此法简便快捷，能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目。 4测定细胞分量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法是指单位体积培养物经离心后将湿菌体举行称重；干重法是指单位体积培养物经离心后，以清水洗净放入干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用办法。 二、生物计数 生物计数法即活细胞计数法。常用的有平板菌落计数法，是按照每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液与溶化好的培养基举行

3、平板倾注培养，按照培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法敏捷度高，是目前国际上所采纳的检测活菌数的常用办法。生物计数法广泛应用于尿液、水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验。 注重事项如下。 普通选取菌落数在330。之间的平板举行计数，过多或过少均不精确。 为了防止菌落扩散而影响计数，可在培养基中加入0.0012,3,5-（ttc)。 本法限用于形成菌落的微生物。 1菌落总数菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度后与培养基举行混合，在一定培养条件下，每个细菌都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数就是指

4、在一定条件下（如需氧状况、养分条件、ph值、培养温度和时光等）每克（每毫升）检样所生长出来的菌落总数。如在需氧状况下，37培养48 h，能在一般养分琼脂平板上生长的菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特别养分要求的以及非嗜中温的细菌，因为现有条件不能满足其生理需求，故难以生长繁殖。因此，菌落总数并不表示实际中的全部细菌总数，另外，菌落总数并不能区别其中细菌的种类，所以也称为杂菌数或需氧菌数等。菌落总数测定常用于判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标记着食品卫生质量的优劣。 2检验办法菌落总数的测定

5、，普通将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分离取出1 ml置于灭菌平皿中与养分琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时光后（普通为48 h)，记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每毫升）原始样品中所含细菌菌落总数。 3倾注培养检验办法 (1)操作办法：按照标准要求或对标本状况举行估量举行相宜比例的稀释，用吸管吸取1 ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。将凉至46的养分琼脂培养基注入平皿约15 ml，并转动平皿混合匀称。同时将养分琼脂培养基倾入已加1 ml无菌生理盐水的灭菌平皿内作对比。待琼脂凝固后，翻转平板，置35孵箱内培养1824 h，计算平板内菌落数目，再乘以稀释倍数，即得出每毫升（每克）样品所含细菌的数量。 (2)注重事项：倾注用培养基应在46水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感触较热而不烫为宜。倾注培养基的量规定不一，从1220 ml不等，普通以15 ml较为相宜，平板过厚可影响观看，太薄又易千裂。倾注时培基底部如有沉淀物，应将其弃去，以免与菌落混淆而影响计数观看。为使菌落能在平板上匀称分布，标本加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正、反两个方向旋转，标本从开头稀释到倾注最后一个平皿所用时光不宜超过20 min，以防止细菌死亡或