浅谈金针菇多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用

1、浅谈金针菇多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用摘要： 目的 探讨金针菇多糖(Polysaccharides of Flammulinavelutipes, FVP)对CCI4诱导的急性肝损伤的保护作用。方法小鼠腹腔注射CCI4橄榄油溶液(,5 mL kg-1)12、24、48、72 h后测定血清ALT,确定CCl4 急性肝损伤造模最佳时间为24 ho FVP(75,150,300 mg- kg-1)连续口服给药8 d,第7天采用CCl4制备小鼠急性化学性肝损伤模型，24 h后测定FVP对血清 ALT AST活性，肝匀浆SOD舌性、MDA含量的影响。结果FVP能显著降低CCl4 致急性肝损伤小鼠血清

2、ALT AST活性，提高肝匀浆SOD勺活性，降低MDA勺含量。 结论金针菇多糖对CCl4诱发的小鼠应激性肝损伤有一定的保护作用。关键词：金针菇多糖(FVP);肝损伤;CCl4;ALT;AST;MDA;SOD金针菇(Flammuli na veluti pes)属担子菌亚门、金钱菌属，是一种食药兼用菌，含有多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、朴菇素等多种生物活性物质，具有较高 的药用价值2,3。金针菇功能蛋白性蛋白诸如核糖体失活蛋白(robosome in actitati ngp rotei ns,RI P)具有抗肿瘤、抗病毒、抗虫、抗真菌以及抗人免疫缺陷病毒(HIV)等活性；真菌免疫调节蛋白(fun g

3、al immu no modulatory proteins,FIP)具有抗癌、抗过敏、抗增殖、刺激免疫细胞产生多种细胞因子和免疫调节功能；金针菇毒素(flammutoxin,FTX)具有引起哺乳动物红细胞裂解，使肿瘤细胞溶胀破裂，改变肠上皮细胞的渗透性，促进药物吸收等作用4-8 o近年来，金针菇中另一种重要的生物活性物质即金针菇多糖(po lysaccharidesof Flammulina velutipes,FVP)也引起人们的关注。研究发现，金针菇多糖有抗 肿瘤9-11、免疫调节12,13和一定的保肝作用14，15 o CCl4是一种常见的 环境污染源和肝脏毒性物质，CCl4肝损伤是经

4、典的急性化学性肝损伤动物模型， 也是目前肝病研究的重要模型之一。本实验通过建立CCl4小鼠急性肝损伤模型， 进一步探讨金针菇多糖对肝损伤的保护作用。1材料与方法药物与试剂金针菇多糖(FVP)提取物由广州农业科学院提供；联苯双酯滴 丸(BDP),广州星群药业股份有限公司，生产批号：EF40131;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)考马斯亮蓝蛋白测定 试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号分别为：20XX0713 20XX071320XX0513 20XX0513动物 昆明种小鼠，雄性,体质量(20 ± 2) g,由南方医科大学动物中

5、心提供， 合格证号：SCXK（粤）约XX 20XX ,饲养温度（23 ± 2） C，饲养1周后进行实验。仪器318K型台式高速离心机（Sartorius,Germany）;MK3 型酶标仪（Labsystem,Hels in ki,Fi nian d）;BS210S电子分析天平（Scirtorius, G Llingon, G or many） 861型漩涡混合器（太仓市科教器材 厂）；ljHy 25型酸度计（上海伟业仪器厂）；LTTK.' TL.KKAX T呂型组织匀浆机（IKA LaboncdiniL SLauren, Ciormaiiy） 861型漩涡混合器（太仓市科教

6、器材厂）。方法CCl4急性肝损伤的造模时间 将小鼠随机分成5组，每组10只,分别为： 正常对照组、急性肝损伤组1（造模时间为12 h）、急性肝损伤组2（造模时间为 24 h）、急性肝损伤组3（造模时间为48 h）、急性肝损伤组4（造模时间为72 h）。 各急性肝损伤组均腹腔注射CCl4橄榄油溶液（,5 mL kg-1），并分别于造模后 12 h、24 h、48 h、72 h乙醚麻醉并心脏取血。正常对照组则腹腔注射等体积 的橄榄油后乙醚麻醉取血。用赖氏法测定血浆ALT水平，对比各时间点ALT值随 时间的变化关系以确定最佳造模时间。小鼠急性肝损伤模型的建立 将小鼠随机分成6组，每组10只：正常对照

7、 组、模型组、阳性药组（联苯双酯150 mg - kg-1）、低剂量组（75 mg kg-1）、中 剂量组（150 mg- kg-1）、高剂量组（300 mg- kg-1）。除空白对照组外，其余各组 均每日灌胃1次，连续8 d，第7天下午模型组和给药组腹腔注射 CCl4橄榄油 溶液（%,5 mL- kg-1），正常对照组则灌胃给同等体积蒸馏水和腹腔注射同等体积 橄榄油。在造模期间，所有小鼠禁食不禁水。24 h后乙醚麻醉小鼠心脏取血和剥离肝脏。血浆ALT和AST活性的测定 小鼠全血置于肝素处理过的离心管中，以5000 r/min离心5 min分离血浆。采用赖氏法16,按照ALT试剂盒说明书中的

8、步骤进行操作测定血浆ALT活性。肝脏SOD舌性的测定 小鼠肝组织的5规理盐水匀浆液在4 C条件下以 10 000 r/min离心10 min,取上清液稀释成体积分数为2%f以考马斯亮蓝蛋白 试剂盒测定蛋白含量。采用黄嘌呤氧化酶法17，按照SOD式剂盒说明书中的步 骤进行操作以测定小鼠肝匀浆中 SOD勺活性。肝组织MDA含量的测定 小鼠肝组织的5%生理盐水匀浆液在4 C条件下以 10 000 r/min 离心10 min,取上清液稀释成体积分数为2%后以考马斯亮蓝蛋白 试剂盒测定蛋白含量。采用 TBARS：匕色法18,按照MDA试剂盒说明书中的步骤 进行操作以测定小鼠肝组织匀浆中 MDA勺含量。

9、统计学处理 实验数据以（± s）表示，采用SPSS软件，利用ANOVA检验进 行统计学处理，PV 0. 05有统计学意义。2结果CCI4急性肝损伤的造模时间 如表1所示，与正常对照组ALT( ±) U-L-1 相比，小鼠腹腔注射CCI4橄榄油溶液后，血浆ALT值随造模时间的变化而变化 (12 h、24 h、48 h、72 h)，其中造模 24 h 后 ALT达最高值(±)U L-l，而 12 h和48 h ( ± , ±) U-L-1相对正常组有升高，但比24 h低，72 h后ALT(±) U-L-1 趋近正常小鼠血清ALT。金针菇多

10、糖对急性肝损伤小鼠血浆 ALT和AST的影响 如表2所示，与正 常对照组相比，模型组小鼠血浆 ALT和AST水平显著升高(P< )，表明CCI4成功 诱导了小鼠急性肝损伤。阳性药组和 FVP各剂量组较模型组相比均有显著降低(P< )，且呈剂量依赖性关系。金针菇多糖对急性肝损伤小鼠肝组织中 SOD舌性的影响 如表3所示，与 正常对照组相比，模型组小鼠肝匀浆中SOD舌性显著降低(P< )。与模型组相比， 阳性药组和FVP各剂量组肝匀浆中SOD舌性显著升高。金针菇多糖对急性肝损伤小鼠肝组织中 MDA含量的影响 如表3所示，与 正常对照组相比，MDA含量显著增加(PV)。与模型组相比

11、，阳性药组和 FVP各 剂量组肝匀浆中MDA含量显著降低(P< )，且呈剂量依赖性关系。表1 CCI4造模 后血清ALT在不同时间点的变化表2 FVP对急性肝损伤小鼠血浆ALT和AST的影 响与正常对照组比较：#P<与模型组比较：*PV, *Pv表3 FVP对急性肝损伤小 鼠肝组织SOD舌性和MDA含量的影响与正常对照组比较：#Pv；与模型组比 较:* PV3讨论实验结果表明，小鼠腹腔注射 CCI4 24 h后，血清ALT值达到峰值，因此 本实验在研究金针菇多糖对 CCI4急性肝损伤时选择造模时间为24 ho CCI4肝损 伤是经典的急性化学性肝损伤动物模型，也是目前肝病研究的重要

12、模型之一。 相关研究表明，CCI4诱导小鼠急性肝损伤的机制为 CCI4经肝微粒体CytP450激活 后产生了自由基(CCI3 或CCI3OO )，这些自由基不仅攻击膜上的磷脂分子引 起脂质过氧化反应产生MDA等脂质过氧化产物，而且会与肝微粒体脂质和蛋白质 发生共价结合，破坏肝脏细胞膜的结构，导致细胞内的转氨酶如ALT AST等释放进入血液。此外，它们还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使钙离子内流增加，造成肝细胞脂质过氧化反应19 o本实验中，模型组小鼠血清ALT AST 的活性显著升高，作为肝组织自由基清除剂的SOD舌性显著降低，而肝组织 MDA含量明显增多，表明CCI4诱导小鼠急性肝损伤

13、模型建立。实验结果表明，金针菇多糖对CCl4所致的小鼠血浆ALT和AST活性升高有 显著的降低作用，并明显升高肝脏SOD勺活性，显著降低脂质过氧化产物MDA的含量，作用呈明显的量效关系。其作用机制可能为：金针菇多糖能提高抗氧化 酶SOD等的活性，从提高自由基清除能力，减少自由基对细胞膜的损害，防止脂 质过氧化反应，可能通过诱导肝药物代谢酶的活性，使肝脏清除自由基的能力加强。最近研究表明，金针菇多糖具有一定的免疫调节作用，通过抑制Kuffer细胞和中性粒细胞的活性以降低炎症损伤20，抑制F K B、KSI 1等细胞因 子的活性，以抑制炎症介质和白细胞的黏附和迁移，防止肝损伤加重21。其确切作用机

14、理还有待于进一步探索。【参考文献】柯丽霞,杨晓彤.金针菇菌丝体糖蛋白(FMGP的提取及理化性质J.中 国食用菌，1998,17(4): 427.曾庆田.金针菇多糖的抗肿瘤作用J.中国食用菌,1991,10(2):11-13.张尔贤.多糖类物质对O2和OH的清除作用J.中国生化药物杂 志,1995,16(1): 9-11.于海,王雪鹏,常维山.核糖体失活蛋白体内外抗病毒的实验研究J.微 生物学通报,20XX,32 (5): 107-113.恥;G II X, KG T PlanTOl in: u. novel ribo some iacti vati ng proteinfrom fruit i

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