胃癌和胃溃疡组织中ERβ与hPOT1基因单核苷酸多态性相关性(崔)

1、我的意见：乱！没有条理，不如拆开了，写成两篇，一篇写雌激素受体，一篇写Hp0T1。胃癌和胃溃疡组织中ER与hPOT1基因单核苷酸多态性相关性胃癌组织中ER-b和hP0T1基因多态性的研究钱春野1杨留才1 周娟1 宋署21盐城卫生职业技术学院 2盐城市第一人民医院（江苏 盐城224006）*基金项目2008年盐城市医学科技发展计划项目（项目编号2008121）摘要目的：研究胃癌和胃溃疡组织中ER与hPOT1基因单核苷酸多态性相关性。方法：以100例原发性胃癌为实验组，90例胃溃疡为对照组，如果胃溃疡为对照组，这个文章的研究对象就是胃癌，题目到内容全部得改。免疫组织化学SP法检测ER-b和hPOT

2、1蛋白，RT-PCR法检测ERCA重复序列多态性和G1082A多态性这个方法不是单核苷酸多态性，后面hPOT1用的是单核苷酸多态性。以及hPOT1基因单核苷酸多态性。结果： ER-b在实验组和对照组的阳性表达率分别依次为68.0%和23.3%，差异明显(P<0.01)。而POT1的阳性率分别为86.0%和1.1%,，差异均具有显著性明显(P<0.01)。其中分化程度低、浸润深的、有淋巴结转移和五年死亡者ER和POT1阳性率分别高于分化程度高、浸润浅的、无淋巴结转移和五年生存者，且临床分期处于、期者ER阳性率显著低于期者(P<0.01/0.05)。而ER和POT1的阳性表达与初

3、复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关（P>0.05），并随着基因表达阳性率增加，患者发生远处转移危险度增加(P<0.001)，患者5年存活率下降(P<0.05)。ER基因CA重复序列对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，两组基因型SS、SL、LL分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组等位基因S、L频率的比较差异亦无统计学意义(P>0.05)，提示ER基因的CA重复序列多态性表达与胃癌发病无关联。ERG1082A多态性中， Rsa多态性分析：实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P&g

4、t;0.05)。两组基因型rr、Rr、RR分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组等位基因r、R频率的比较差异亦无统计学意义(P>0.05)；ERAlu多态性分析：实验组和对照组均符合H-W遗传平衡定律（P>0.05)，实验组Aa、aa基因型频率与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，而AA基因型和两组等位基因a、A频率的比较，差异无统计学意义(P>0.05)。POT1 IVS13-98多态性分析：实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡定律(P>0.05)，试验组GG基因型频率与对照组相比，差异显著（P<0.

5、05）, 试验组等位基因G、T频率与对照组相比亦有差异（P<0.05）。而GT、TT分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)。ER中Genotype in G1082A polymorphism基因型与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）；Genotype in hPOT1 IVS13-98G/T与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）；

6、而ER的CA repeat polymorphism与胃癌的所有临床特征无关。等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关（P<0.01），其余均与肿瘤无关。结论：ER和POT1均与胃癌、分化程度、浸润深度、转移及五年存活率密切相关，并且ER的Aa、aa基因型及POT1的GG型及等位基因G/T关系极大。关键词 胃癌，临床特征，ER，hPOT1，基因多态性 The Expression and Correlation of ER , hPOT1 Gene in Gastric Cancer and Gastric Ulcer Tissue in eastern ChinaQia

7、n Chunye1 Yang Liucai1,Zhou Juan1,Song Su2 (1 Yancheng Health Vocational and Technical College; 2 Yancheng NO.1 People's Hospital, 224006, China)AbstractObjective: To explore the polymorphisms and correlation of ER , hPOT1 gene in gastric cancer and gastric ulcer tissue.Methods: 100 cases of pri

8、mary gastric cancer as the test group, 90 cases gastric ulcer as the control group, immunohistochemical SP method was used to detect ER and hPOT1 protein, RT - PCR method to detect the polymorphisms of ER CA repeat sequence, G1082A as well as hPOT1 genes SNPS.Results:1. Positive rates of ER were res

9、pectively 68.0% and 23.3% in the test group and the control group, with significant difference (P < 0.01). While those of POT1 were respectively 86.0% and 1.1%, with significant difference (P < 0.01); And the positive rates of the subjects with low differentiation degree, high invasion depth,

10、lymph node metastasis and five years death respectively were higher than those with high differentiation degree, shallow invasion depth, without lymph node metastasis and five years survival, and the clinical stages,were lower significantly than stage (P < 0.01/0.05). And ER and the positive expr

11、ession of ER and POT1 has nothing to do with onset recurrence, age, tumor size, and histological types (P > 0.05) . When the positive rate of the gene expression increases, patients have more risk to suffer distant metastases (P < 0.001), and five-year survival rate is also dropped (P < 0.0

12、5).2. Genotype distribution accords with the Hardy-Weinberg(H-W) genetic balance in ER CA repeat sequence (P>0.05); Comparative genotype SS,SL,LL differences werent statistically significant (P>0.05)，and allele frequency S, L werent statistically significant, either(P>0.05). This points out

13、 polymorphism of CA repeat sequence expressions of ER gene were unrelated with gastric cancer. 3. In ERG1082A polymorphism，analysis of Rsapolymorphism: Two groups accord with the H-W genetic balance (P>0.05); Comparative genotype rr, Rr, RR differences werent statistically significant (P>0.05)

14、; Genotype frequency r, R werent statistically significant, either(P>0.05)；analysis of Alupolymorphism in ER : Two groups accord with the H-W genetic balance (P>0.05); Genotype Aa, aa in the test group was higher than that in the control group (P<0.05)，but genotype AA and allele frequency S

15、, L werent statistically significant P>0.05).4. Analysis of POT1 IVS13-98 polymorphism: Two groups accord with the H-W genetic balance (P>0.05); Genotype GG in the test group was higher than that in the control group (P<0.05); Genotype frequency G, T were statistically significant (P<0.0

16、5), and allele frequency G, T were statistically significant, too, but GT, TT distribution frequency werent statistically significant (P>0.05).5. Genotype in G1082A polymorphism of ER was closely related to clinical stages, differentiation degree, infiltration depth, metastases situation and the

17、five-year survival condition： 与息息相关（P<0.05）, and it wasnt related to onset recurrence, age, tumor size and histological types（P>0.05）；It was the same in Genotype in hPOT1 IVS13-98G/T；But CA repeat polymorphism of ER wasnt related to every clinical feature of gastric cancer. In allele frequency

18、, only a/A was closely related to differentiation degree and infiltration depth（P<0.01）, but the others werent.Conclusion: ER and POT1 polymorphism was closely related to clinical stages, differentiation degree, infiltration depth, metastases situation and the five-year survival condition in gast

19、ric cancer. And genotypes Aa, aa in ER, GG-type and alleles G / T in POT1are related to each other.Key Words gastric cancer, clinical features, ER , hPOT1, gene polymorphism胃癌是长江中下游地区高发的消化道肿瘤，其与性激素的关系在前期研究1,10参考文献按顺序来，1后面是2，而不是10，这句话得给出参考文献。中已有报道。而雌激素是其中重要的激素之一，其与雌激素受体（ER）结合而起作用，ER是一种特异蛋白，有两种亚型：ER和E

20、R1；人类端粒保护蛋白(human protection of telomeres 1,hPOT1)是端粒单链结合蛋白，可能在细胞分裂、染色体维持、末端保护和端粒长度调控等方面起着广泛的作用，DNA损伤反应导致端粒功能失活，限制了转化细胞的生长能力，是肿瘤组织具有无限增殖能力的基础24。然而，关于hPOT1和 ER在胃癌和胃溃疡组织中中的表达及其相关性未见报道。本研究旨在以胃溃疡为对照组，检测胃癌的ER和POT1基因的表达及相关性，探讨与胃癌发生、发展的关系。1.材料和方法1.1研究对象2000年1月至2008年2月100例胃癌需要这四家医院收集这么多年？就附医，我想2-3年就有100例了吧。

21、，实验组为100例原发性胃癌患者，来自盐城市第一、二、三人民医院和扬州大学附属医院，年龄3274，中位年龄56岁，男64例，女36例。患者术前未接受任何放疗或化疗。按临床分期：I 期32例， II期56例，III-期12例；初发肿瘤56例，复发肿瘤44例；按分化程度：高分化41例，中分化33例，低分化26例；按年龄：60岁61例，>60岁39例；按胃癌肿瘤大小（直径cm），2为41例，>2为59例；按组织学类型：腺癌68例、印戒细胞癌20例、其它12例；按转移情况：无转移42例，转移58例；按五年生存情况：生存36例，死亡64例。对照组为胃溃疡切除者90人，中位年龄55岁。实验组和

22、对照组年龄差异无统计学意义（P>0.05）,具可比性，且病例组、对照组、病例组与对照组之间均无血缘关系，两组均征得患者同意，所有受试者均签署知情同意书。新鲜组织离体后取部分组织迅速置于-70冰箱内保存，以备RT-PCR检测。同时作组织病理学研究，分别取材、固定、石蜡包埋、切片，采用免疫组化染色法检测ER和hPOT1。1. 2试剂和仪器 即用型SP免疫组化试剂盒由天津博科生物技术有限公司提供，PCR主要试剂北京百泰克生物技术有限公司提供、DNA片段长度标准(PCR Markers)、Alu I和Rsa I限制性内切酶均为TaKaRa宝生物工程(大连)有限公司产品；琼脂糖(Promega公司

23、)。DYY-8C型电泳仪(北京六一仪器厂)，紫外线电泳图像分析仪(L3270255型，UVP公司)。1.3方法1.3.1免疫组化：ER：采用Anna 6法；hPOT1：羊抗hPOT1单克隆抗体购自美国SantaCruz公司，过氧化物酶标记的链霉卵白素(Streptavidin/Peroxidase)染色试剂盒购自上海晶天生物科技有限公司，二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)显色试剂盒购自海瑞齐生物科技有限公司，Tris-EDTA抗原修复液(110,pH:9.0)购自北京天津市翔天科技有限公司，采用Kondo 7链霉卵白素-生物素(SP)免疫组织化学染色法，以PBS代替一抗作为阴性对照。1.3.2免疫组

24、化结果判断：ER阳性：定位于细胞核，按文献6方法将染色结果分为阳性表达：切片内阳性细胞10%，阴性表达:切片内阳性细胞<10%或无阳性细胞。hPOT1阳性：hPOT1蛋白表达的判定:hPOT1以细胞核染呈蓝色至蓝黑色为阳性细胞,无着色为阴性。采用半定量积分法7计算免疫组化染色，显微镜下观察，仅细胞浆内着红色为阴性，细胞核呈蓝色为阳性，每个样本所见的阳性细胞10%为阳性，<10%或无阳性细胞为阴性。1.3.3 RT-PCR 用Trizol一步法提取组织总RNA，-70备用，按DNA抽提方法提取基因组DNA，所有DNA和RNA样本的OD260/OD280在1.69-2.01之间，均值为

25、1.82±0.15，说明样本纯度符合要求。ERCA重复序列多态性的检测-引物序列由作者设计，上海生工合成。上、下游：5'-TACCCAGGTGTGTGCTGCG-3和5-CGTGCCTGGCCTAAAGAAGA-3。反应体系为50l，其中模板DNA100ng，10×PCR缓冲液5l，TaqDNA聚合酶2.5U，10mmol/L三磷酸脱氧核苷(dNTPs)4l，25 mmol/LMgCl23l，25 pmol/L上、下游引物各1l。PCR反应条件：95预变性3 min，然后9520 s，5720 s，7230 s， 30个循环后，72延伸5 min。PCR扩增产物长度

26、182 bp。最后取PCR产物1l在含溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶上电泳,鉴定其纯度及完整性,紫外灯下观察并照相；根据文献报道，以重复序列平均数22次为界，将重复序列基因分为短基因(<22)和长基因(22)，分别以S和L表示。两等位基因均为S或均为L或一个等位基因为S而另一个等位基因为L，则基因型分别表示为SS、SL和LL5。ER G1082A多态性的检测-上、下游引物序列分别为: 5-TCTTGCTTTCCCCAGGCTTT-3, 5-ACCTGTCCAGAACAAGATCT-3。反应体系为50l，其中模板DNA 100 ng，10×PCR缓冲液5l，Taq DNA聚合酶2.5

27、U，10 mmol/L dNTPs 4l,25 mmol/LMgCl23l，25 pmol/L,上、下游引物各1l。PCR反应条件：95预变性3 min，然后95 20 s,60 20 s,72 30 s, 30个循环后，72延伸5 min,最后产物冷却至4保存。PCR扩增产物长度为156 bp。PCR产物经限制性内切酶Rsa(NEW ENGLAND BioLabs)37反应1 h，酶切产物于含EB的2%的琼脂糖凝胶电泳确定基因型。hPOT1基因单核苷酸多态性检测：SNP位点选择从/SNP网站公布的hPOT135个SNP位点中，选择其中等位基

28、因频率大于5%且有酶切位点的SNP位点hPOT1 IVS13-98G/T(ID：rs10250202)；引物参照数据库中SNP位点周围的序列，由作者设计，上海生工合成。引物序列为：F-5-GAGAATAGTCAGCCTCATTGTTTTT-3，R-5-TCTGATGCTGGAATCTGGAAG-3，片段大小312 bp。PCR扩增反应体系总体积25 L，DNA模板300 ng、引物各1L(10 mol/L)、2×Taq PCR MasterMix 12.5L(包括0.1 u Taq DNA聚合酶、每个500mol/L dNTP、20 mmol/L Tris-HCl、pH8.3、20

29、mmol/L KCl、3 mmol/L MgCl2、其他稳定剂和增强剂)，加双蒸水补充至25L。扩增条件：94 预变性3 min，94 30 s，58 30 s，72 1 min，共30个循环，最后72延伸7 min。PCR扩增完成后，取8 L PCR扩增产物，20 g/L琼脂糖凝胶电泳(溴化乙锭染色)观察扩增情况，若出现312 bp清晰条带，则进行Mbo 内切酶酶切分析。酶切反应体系10 L，取8 L PCR扩增产物、10×Buffer 1.0 L、BSA 0.1 L、限制性内切酶Mbo1.0 L(10单位)，于37 温浴3 h，30 g/L琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物。由大连宝生物

30、公司经双脱氧链终止法测序。1.4 统计学处理：应用SPSS13.0统计软件处理。各组之间ER和hPOT1蛋白免疫组化以染色积分表示,采用X2检验进行显著性检验。采用X2检验比较ER和hPOT1 IVS13-98G/T试验组和对照组的基因型分布和等位基因频率；用Hardy-weinberg平衡检验两位点基因型和等位基因频率分布是否具有群体代表性。以P<0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1免疫组化结果100例胃癌中， ER实验组阳性表达为68例(68.0%,68/100)；而胃溃疡中，阳性表达率为23.3%(21/90)，差异具有统计学意义(cx2= 37.95，P= 0.000000

31、)。POT1实验组阳性率为86.0%（86/100）；对照组阳性率为1.1%（1/90），差异也有统计学意义（cx2= 137.51，P= 0.000001）。ER和POT1表达与胃癌临床特征的关系见表1所示，分化程度低、浸润深的、有淋巴结转移和五年死亡者ER和POT1阳性率分别高于分化程度高、浸润浅的、无淋巴结转移和五年生存者，且临床分期处于、期者ER阳性率显著低于期者(P<0.01/0.05)。而ER和POT1的阳性表达与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关（P>0.05）。X2检验显示,随着基因表达阳性率增加，患者发生远处转移危险度增加(P<0.001)，患者5年存活

32、率下降(P<0.05)。2.2实验组和对照组中ER和POT1基因mRNA的表达。2.2.1 ER：CA重复序列多态性：通过ER基因CA重复序列测序图，检测到170, 172, 174, 178, 180, 182, 184及186共8种(CA)n等位基因，以重复序列次数来表示则分别为18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25次重复8个等位基因。结果见表2，对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡(P>0.05)，两组基因型SS、SL、LL分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组等位基因S、L频率的比较差异亦无统计学意义

33、(P>0.05)，提示ER基因的CA重复序列多态性表达与胃癌发病无关联。Figure1. ER gene CA repeat sequence analyzed. This figure shows CA repeat 19 timesFigure2. ER gene CA repeat sequence Alleles distributionER基因G1082A多态性使用Rsa酶切可区分出3种基因型：rr型(156 bp 1条条带)，RR型(125 bp、31 bp两条条带)，Rr型(156 bp、125 bp、31 bp 3条条带)，见图3。两组ERRsa多态性分析：胃癌组和对照组

34、均符合H-W遗传平衡定律(P>0.05),具有群体代表性。两组基因型rr、Rr、RR分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组等位基因r、R频率的比较差异亦无统计学意义(P>0.05)，见表3，提示ER基因的Rsa多态性表达与胃癌发病无关联。使用Alu酶切亦可区分出3种基因型：aa型(307 bp 1条条带)，AA型(240 bp、67 bp两条条带)，Aa型(307 bp、240 bp、67 bp 3条条带) ，见图4。两组ERAlu多态性分析：胃癌组和对照组均符合H-W遗传平衡定律（P>0.05)，具有群体代表性。胃癌组Aa、aa基因型频率与对照组相比，差异有

35、统计学意义(P<0.05)，而AA基因型和两组等位基因a、A频率的比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。说明ER基因的Alu中的Aa、aa基因型与胃癌的发生密切相关，而与AA基因型及各种等位基因频率无关。Figure4. The electrophoretogram of PCR products and genetypes of gene ER-b in primerFigure3.The electrophoretogram of PCR products and genotypes of gene ER-b in primer2.2.2 POT1 IVS13-98：

36、hPOT1 IVS13-98G/T位点，经Mbo酶切分为3种基因型，GG型（312bp1条条带）、GT(312、187、125bp三条条带)和TT型（187、125 bp两条条带），图6；多态性分析：胃癌组和对照组均符合Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡定律(P>0.05),具有群体代表性。试验组GG基因型频率与对照组相比，差异显著（P<0.05）, 试验组等位基因G、T频率与对照组相比亦有差异（P<0.05）。而GT、TT分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表5，提示hPOT1 IVS13-98G/T位点的Mbo多态性中GG基因型及等位基因G/T

37、与胃癌发病有关联。图6 The electrophoretogram of hPOT1 IVS13-98G/T Enzyme cutting site by Mbo1:Marker 4,6:GG 2,7:GT 3,5:TT2.3 ER and POT-1基因型与胃癌临床特征的相关性ERand POT-1基因型及等位基因与胃癌临床特征的相关性见表6所示， ER中Genotype in G1082A polymorphism与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）；Genoty

38、pe in hPOT1 IVS13-98G/T与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）；而ER的CA repeat polymorphism与胃癌的所有临床特征无关。等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关（P<0.01），其余均与肿瘤无关。3 讨论胃癌是长江中下游地区发生率最高的消化道肿瘤，其死亡率排在恶性肿瘤的第三位，近年来，发病率逐步增加，严重危害人们的健康，其与性激素的关系在前期研究1,10中已有报道，而雌激素是其中重要的激素之一，雌激素与雌激

39、素受体（ER）结合而起作用， ER是一种特定的糖蛋白，有2个亚型：和。人ER基因位于14号染色体。其基因多态性与激素依赖性疾病的关系逐渐被关注，其中微卫星(Microsatellite，MS)或短串联重复序列(Shorttandem repeat，STR)多态性(此处表现为CA重复序列)作为第二代遗传标记，也引起许多学者兴趣。Slattery11等人研究证明ER2基因长CA重复序列患者得结肠癌风险更高，并且认为ER2比ER1在结直肠癌病因中起更重要作用。Beleza-Meireles12通过对60个男孩尿道下裂病人研究发现，ER2基因长CA重复序列更易患尿道下裂。Anghel13认为雄激素基因

40、长CAG、ER1基因短TA、ER2基因短CA重复序列与乳腺癌有关。Takeo14认为ER2基因CA重复次数与绝经和绝经后症状有关。但国内外尚无其与VD的关系研究。而G1082A多态性是位于ESR2基因第5外显子配体结合区的一个沉默突变，不能导致氨基酸的变换。本例中，ER实验组和对照组阳性率分别为68.0%和23.3%，差异明显(P<0.01)，这与杨蕾等15以组化法测得胃癌ER阳性率为23%，Naugler WE16以DCC法测得ER阳性率高达61.9%，国内以免疫组化法测得ER阳性率为35.7-46.9%17有所差异，说明方法不同，测得的结果有差异。而在胃癌中，分化程度低、浸润深的、有

41、淋巴结转移和五年死亡者ER阳性率分别高于分化程度高、浸润浅的、无淋巴结转移和五年生存者，且临床分期处于、期者ER阳性率显著低于期者(P<0.01/0.05)，说明随着基因表达阳性率增加，患者发生远处转移危险度增加(P<0.001)，患者5年存活率下降(P<0.05)，可能是因为ER基因是在胚胎期去阻遏而异常表达有关。而ER的阳性表达与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关（P>0.05）。ER基因CA重复序列对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，两组基因型SS、SL、LL分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两

42、组等位基因S、L频率的比较差异亦无统计学意义(P>0.05)，提示ER基因的CA重复序列多态性表达与胃癌发病无关联。ERG1082A多态性中，Rsa多态性分析：实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05)。两组基因型rr、Rr、RR分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)，两组等位基因r、R频率的比较差异亦无统计学意义(P>0.05)；ERAlu多态性分析：实验组和对照组均符合H-W遗传平衡定律（P>0.05)，实验组Aa、aa基因型频率与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，而AA基因型和两组等位基因a、A频率的比

43、较，差异无统计学意义(P>0.05)。说明ER中G1082A 多态性基因型与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05）而ER的CA 重复多态性与胃癌的所有临床特征无关。等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关（P<0.01），其余均与肿瘤无关。分析认为：胃癌组织中ER的存在反映肿瘤组织对雌激素有应答反应，因为ER是相应的雌激素发挥生物效应的特异结合蛋白，具有生物活性。ER在细胞内，雌激素为脂溶性的小分子非极性甾类激素，可通过细胞膜扩散进入靶细胞到达细

44、胞质内，与特异性受体分子（ER）结合形成复合物，产生对染色质的亲合性，进入细胞核内，在一定位点上与染色质结合，有选择地激活特定的基因，诱导特定的mRNA转录，则雌激素可能通过与其受体结合，介导某些直接、间接机制加强致癌因素，即雌激素有促进胃肿瘤细胞增殖的作用，从而参与胃癌的发生、发展18,19。由于雌激素对胃肿瘤细胞的增殖作用，胃癌有可能是雌激素依赖性肿瘤18,20。目前对胃癌组织中ER的表达机制尚不明确，推测可能是由于肿瘤细胞在癌变过程中启动了ER蛋白的合成基因，使其出现阳性表达。雌激素通过ER可造成致癌因素加强，对肿瘤生长及控制进程可能发挥一定作用，测定癌组织中的ER对胃癌诊断及配合内分泌

45、方面的治疗有一定的意义22-24。端粒是染色体末端的保护性结构，能预防对染色体DNA的损伤和非正常重组,维持染色体的稳定；它由DNA和多种端粒结合蛋白组成，而端粒结合蛋白主除POT1外，还有TRF1(telemeric repeat binding factor1)和 TRF2等， POT1通过POT1PTOP/PIP1TIN2TFR1途径,形成TRF1复合物，调控端粒长度, 以往的研究表明，POT1是一种端粒酶依赖的端粒长度的阳性调节因子，其功能需要联合TRF1和TRF2。因此POT1与端粒复合物中其他组分的作用机制也是近年来研究的热点问题25。研究表明POT1丢失可以导致染色体DNA不稳定

46、和细胞凋亡，且大多研究表明POT1必须在端粒酶阳性的细胞内才能发挥作用25。本例中，POT1在实验组和对照组阳性率分别为86.0%和1.1%,，差异明显(P<0.01)，其中分化程度低、浸润深的、有淋巴结转移和五年死亡者POT1阳性率分别高于分化程度高、浸润浅的、无淋巴结转移和五年生存者，且临床分期处于、期者ER阳性率显著低于期者(P<0.01/0.05)，说明POT1亦可作为胃癌发生发展的一个重要的临床指标。而POT1的阳性表达与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关（P>0.05），并随着基因表达阳性率增加，患者发生远处转移危险度增加(P<0.001)，患者5年存活

47、率下降(P<0.05)。POT1 IVS13-98多态性分析：实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡定律(P>0.05)，试验组GG基因型频率与对照组相比，差异显著（P<0.05）, 试验组等位基因G、T频率与对照组相比亦有差异（P<0.05）。而GT、TT分布的比较差异无统计学意义(P>0.05)。Genotype in hPOT1 IVS13-98G/T与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、五年生存情况密切相关（P<0.05）,与初复发肿瘤、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P>0.05），说明GG基因型和等

48、位基因G、T可作为胃癌发生发展的一项重要指标。 参考文献1 Yang LC,Li YH,L SH,etc. Correlation of Sex hormones concentration, ER receptor and the polymorphism of ER gene with development of young gastric adenocarcinomaJ.Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2010,30(3):399-4042Serru V.Dessen P.Boucheix C,et al.Seqence and expre

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