磁流体与长春新碱对系统血液免疫功能影响的实验研究

1、磁流体与长春新碱对系统血液免疫功能影响的实验研究         09-08-04 08:40:00     编辑：studa20                         作者：王莉莉 钱宝华 郭峰 花美仙【摘要】  目的

2、：用体外自然实验体系对纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物长春新碱（VCR）体外对系统血液免疫功能的影 响进行分子水平的探讨。方法：采用免疫荧光标记流式细胞仪分析方法，检测血细胞表面相关免疫分子的变化情况。结果：使用纳米级 Fe3O4 磁流体和抗癌药物 VCR 以后，自然实验组 CD4 细胞阳性率（38.87±6.37）% 较自然对照组（35.52±6.76）%明显增高（P < 0.01），自然实验组白细胞 CD55 阳性细胞平均荧光强度（68.79±8.98）% 较自然对照组（74.78±18.60）%明显降低（P < 0.05）。与自然对

3、照组相比 CD4 分子均表现出一定程度的上调，CD8 分子均表现出一定程度的下调。结论：VCR（0.2 g/mL）和纳米级 Fe3O4 磁流体对血细胞的免疫功能都没有不良影响，甚至磁流体还可以提高血液免疫反应中白细胞的免疫功能，为红细胞包载磁流体和抗癌药物治疗肿瘤提供实验依据，为抗癌药红细胞载体靶向抗肿瘤免疫提供新的治疗途径。 【关键词】  红细胞；磁流体；长春新碱；靶向；CD4；CD8；CD55；CD59    Abstract    Objective     To  r

4、esearch  the  molecular  level  effects  of  Fe3O4  nano-magnetic  ferrofluid  and anticancer  drug  vincristine  (VCR)  on  systemic  hematogenic  immunologic  function  by  means  of  natural&#

5、160; experimental  system  in  vitro.    Methods     The  expression  of  correlated  moleculars  on  the  surface  of  blood  cells  were  detected  and  compared  using 

6、; flow  cytometry  assay.    Results     The  level  of  CD4  on  T  cells  (38.87±6.37)%  in  natural   experimental  group  was  significantly  increased  than  th

7、at  of  natural  control  group  (35.52±6.76)%  (P  <  0.01),   while  the  mean  fluorescence  intensity  of  CD55  in  natural  experimental  group  (68.79±8.98)%  was  m

8、uch  lower  than  that  of  natural  control  group  (74.78±18.60)%  (P  <  0.05).  Compared  to  natural  control  group,  the  expression    of  CD4  was  up-regulated

9、60; in  some  degree  while  CD8  was  down-regulated  in  experimental  group.    Conclusion   VCR  (0.2  g/mL)  and  Fe3O4  nano-magnetic  ferrofluid  have  no  harmful  effects&

10、#160; to  hematogenic  immunologic   function.  Magnatic  ferrofluid  can  even  elevate  the  function  of  leucocytes.  The  results  can  supply  experimental foundation  for  erythrocytes  to

11、  capsulate  both  magnetic  ferrofluid  and  anticancer  drug,  and  also  can  provide   treatment  pathway  for  anticancer  drug  erythrocyte  carrier  targeting  antitum or  immunity.&#

12、160;   Key  Words    Erythrocytes;  Magnetic  ferrofluid;  Vincristine;  Targeting;  CD4;  CD8;  CD55;  CD59    纳米级 Fe3O4 磁流体（magnetic ferrofluid, MF）是目前国内外靶向给药和医用高分子材料研究领域的热门方向之一。磁流体因具有独特的性质（流动性、磁响应性、靶向可控性）而应用广泛，与现

13、代科学技术相结合使用则更加显示其优越性。长春新碱（VCR）是临床常用的抗肿瘤药物，抗肿瘤谱广。有关研究资料已经证明，红细胞作为 VCR 载体可减少用药量和提高疗效1，但其靶向性差，还有待于深入研究。我们设想用红细胞双载 VCR 和磁流体，借助于外加磁场以解决 VCR 红细胞载体的靶向问题。此前首先要弄清磁流体对机体生理功能的影响，特别是对免疫功能是否有负面影响。我们想利用现代系统免疫学理论与方法2研究磁流体和 VCR 联合应用对系统血液免疫功能是否有正负影响，目前尚未见到这种报道，现将有关资料报道如下。    1    材料与方法&#

14、160;   1.1    材料    酸性枸橼酸钠葡萄糖溶液（acid citrate dextrose, ACD）抗凝的健康成人新鲜全血由中国人民解放军上海血站提供，其中男 2 例，女 9 例，中位年龄 30 岁。鼠抗人 CD55-FITC、CD59-PE、CD3/4、CD3/8 等直接法荧光单克隆抗体购自美国 BD 公司。注射用硫酸长春新碱粉针剂（国药准字 H44021772，批号 0609V1）购自深圳万乐药业有限公司，以 0.9% 生理盐水配制成浓度为 0.2 g/mL 待用。纳米级 Fe3O4 磁流体含

15、超顺磁性氧化铁（SPIO）氨基硅烷 Fe3O4 纳米颗粒，直径 812 nm由上海交通大学纳米科学与技术工程中心惠赠，样品使用前均以超声波处理 1015 min，使 Fe3O4 粒子分布更均匀。流式细胞仪（BD FACS Calibur, USA），分析软件为 Cell Quest。    1.2    方法    试管 1：0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL VCR + 0.1 mL MF（自然体系实验 1 组）。    试管 2：0.3

16、mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL MF + 0.1mL NS（自然体系实验 2 组）。    试管 3：0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.1 mL VCR + 0.1 mL NS（自然体系实验 3 组）。    试管 4：0.3 mL 血浆 + 0.2 mL 全血细胞悬液 + 0.2 mL Ns（自然体系对照组）。    将上述试管混匀后置于 37水浴箱中温育 1 h，加盖防止水蒸气进入。中间轻轻摇匀 2 次，使反应充分进行；取出后 2 500 r/m

17、in，离心 5 min；小心取出上清液，将沉淀物用 2 mL PBS 重悬，2 500 r/min，离心 5 min，弃上清，加入 200    L PBS 使其体积为 200    L。    白细胞表面分子 CD55、CD59、CD4、CD8 检测：取待测样品 50    L，每管加入红细胞裂解液 1 mL，室温避光反应 10 min，1 000 r/min，离心 5 min，弃上清，加入 CD55-FITC、CD59-PE 抗体各 4   L，CD3

18、/4、CD3/8 抗体各 3   L，充分混匀后室温避光 20 min；抗体结合后，再加入 2 mL PBS 液，1 000 r/min，离心 5 min，弃上清，加入 400   L PBS，立即上流式细胞仪检测。    1.3    统计学处理    实验数据以 x±s 表示，统计学处理采用 t 检验。    2    结    果    2.1    磁流体（MF）对系统血液免疫功能的影响    自然体系实验 2 组白细胞CD55 阳性细胞平均荧光强度低于自然体系对照组（P < 0.05）。与自