高效液相色谱仪期间核查操作规程

1、高效液相色谱仪期间核查操作规程文件编码：版本号：02 项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期分发范围及分发号分 发 号目 录一、目的1二、适用范围1三、内容1四、附件5五、变更历史5高效液相色谱仪期间核查操作规程02页码：4/5一、 目的为了使高效液相色谱仪保持良好的运行状态，企业内部定期对仪器进行校准；本规程规定了公司高效液相色谱仪期间核查的项目、方法及周期，使质量部校准小组有章可循。二、 适用范围本规程适用于公司高效液相色谱仪的期间核查工作。三、 内容1. 制定依据1.1. 中国药典2010年版二部1.2. 高效液相色谱法操作规程（C08-0128）1.3. 液相色谱仪检

2、定规程（JJG705-2002）1.4. 药品生产验证指南（国家食品药品监督管理局）2003年版2. 通用技术要求2.1. 仪器外观仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号等标牌。2.2. 仪器电路系统仪器电源线、信号线插接紧密，各开关、按键、旋钮等功能正常，指示灯灵敏，显示器正常。3. 计量器具控制3.1. 校准条件3.1.1. 环境条件a. 校准室应清洁无尘、无易燃、易爆、腐蚀性气体，通风良好；b. 室温在15-30，校准过程中温度变化不超过3（对示差折光检测器温度变化不超过2，室内湿度在10%-75%RH范围内；c. 仪器应平稳放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接

3、地良好；d. 电源电压为（220±22）V。3.1.2. 校准设备a. 秒表：分度值不大于0.1s；b. 分析天平：最大载荷应大于220g，最小分度值应小于0.01mg；c. 容量瓶：10ml 9个。以上计量器具需经检定合格3.1.3. 标准物质1×10-4、1×10-7萘/甲醇溶液1×10-3丙三醇/水溶液大豆油对照品（中检所）4. 校准项目、接受标准及周期（表1）表1 期间核查项目、接受标准及周期期间核查项目企业接受标准校准周期外观检查应符合规定6个月泵流量设定值误差（%）2泵流量稳定性误差（%）2检测器紫外、二极管阵列检测器示差折光检测器蒸发光散射

4、检测器基线噪声5×10-4（AU）5×10-4（AU）5×10-3（AU）基线漂移5×10-3（AU/h）5×10-3（AU/h）1×10-2（AU/h）波长准确度±2（nm）/最小检测浓度1×10-7（萘g/ml）5×10-6(丙三醇/水g/ml)1×10-6（大豆油g/ml）定量重复性（%）2.02.02.0定性重复性（%）1.51.51.55. 期间核查方法5.1. 外观检查按2.1、2.2条的要求，用目视、手动检查5.2. 输液系统检查5.2.1. 泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S

5、R检查按下表2的要求以纯化水为流动相，启动仪器，设定流量，待压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表2规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2）、式（3）计算Ss和SRFm=(W2-W1)/r·t 式(1)SS=F-FS/FS × 100% 式(2)SR=(Fmax-F min) /F × 100% 式(3)式中: Fm:流量实测值，ml/min ; W2:容量瓶+流动相的质量，g; W1:容量瓶的质量，g; r:实验温度下流动相的密度，g/cm3 ;FS:流量设定值，ml/min; T:收集流动相的时

6、间，min; Fmax:同一组测量中流量最大值，ml/min; Fmin:同一组测量中流量最小值，ml/min ;F: 同一组测量的算术平均值，ml/min；表2 泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的技术要求流量设定值（ml/min）0.5 1.02.0测量次数3 33流动相相收集时间(min）1055允许误差SS3% 2%2% SR2% 2%2%5.3. 检测器5.3.1. 紫外检测器、二极管阵列检测器a. 基线噪声和基线漂移将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，柱温35，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线

7、30分钟，计算基线漂移和噪声。b. 波长准确度通过仪器诊断软件的波长校准功能进行测试，待测试通过后，在诊断软件界面打印校准报告。报告中线/656nm处校准的真实值与656nm之间的偏差即为波长校准偏差。注：波长校准需要大约3.5min，在灯打开后的开始10min不能做，应为初始漂移将干扰测量。此方法适用于agilent系列仪器c. 最小检测浓度在（5.3.1中a）色谱条件下，注入20ul 1×10-7g/ml萘/甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度CtCt=3·HN .C/H 式（4）式中：Ct:最小检测浓度（g/ml）HN:噪声峰高（

8、m AU）C:样品浓度（g/ml）H:样品峰高（m AU）d. 定量重复性和定性重复性将1×104g/ml 萘的甲醇溶液，注入高效液相色谱仪中，检测波长254nm，流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min，柱温35，进样量20ul。重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。5.3.2. 示差折光检测器a. 基线噪声和基线漂移采用C18色谱柱，将仪器各部分连接号，以HPLC用水为流动相，流速1ml/min，参比池充满流动相，灵敏度选择在最灵敏挡，接通电源，待仪器稳定后记录基线30min，计算基线漂移和噪声。（试验中应特别注意，室温的波动不超过2）b. 最小检测浓度在（5.3.2中a

9、）色谱条件下，注入20ul 1×10-5g/ml丙三醇水溶液，记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度Ctc. 定量重复性和定性重复性在（5.3.2中a）色谱条件下，将1×10-3g/ml丙三醇水溶液注入高效液相色谱仪中，进样量20ul。重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。5.3.3. 蒸发光散射检测器a. 基线噪声和基线漂移将仪器的各部分连接好，蒸发光漂移管温度为70，载气流速：2.6L/min流动相为正己烷:异丙醇：冰乙酸（98.9：1:0.1），流速为0.9ml/min，开机，待系统平衡后，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声。b.

10、 最小检测浓度在（5.3.3中a）色谱条件下，注入10ul 1×10-6g/ml大豆油对照品溶液（流动相溶解），记录色谱图，由色谱峰高和基线噪声峰高，按式（4）计算最小检测浓度Ctc. 定量重复性和定性重复性在（5.3.3中a）色谱条件下，注入10ul 1×10-4g/ml大豆油对照品溶液（流动相溶解），重复进样6次，计算相对标准偏差（RSD）。6. 期间核查后的评估与放行6.1. 期间核查结果应经过审核或评估，只有期间核查结果满足接受标准的仪器才能放行使用。6.2. 当期间核查没有在规定的日期前完成，或期间核查结果不合格时，仪器应放置“停用”标识。6.3. 当有下列情况发生时，应及时通知质量部QA经理根据公司的偏差处理程序进行偏差调查，并对使用该仪器所产生的实验数据进行相应评估：6.3.1. 定期期间核查结果超出接受标准；6.3.2. 超出期间核查期的仪器被使用时。