PCR技术及其应用考试试卷2014年

1、PCR技术及其应用课程考试试卷（硕士研究生）班级： 硕士12班 学号： 20141100043 姓名 戴鹏辉 得分 ： 一、下页试题为单项选择题，请将每题的正确答案填在试卷首页的答题栏内（共50题，每题1.8分，总分90分）题号12345678910答案题号11121314151617181920答案题号21222324252627282930答案题号31323334353637383940答案题号41424344454647484950答案二、简述RACE的原理和技术(10分)1、PCR反应的五个要素是：（ ）引物 dNTP Mg离子 模板 水 TaqDNA聚合酶水请选择A、B、C、D、2、

2、PCR产物鉴定常用的方法是：（ ）A、凝胶电泳法B、杂交法C、免疫法3、PCR反应中随着复性温度升高，扩增的特异性：（ ）A、 升高B、 下降C、 不变4、原位PCR技术中对组织和细胞进行固定的目的是：（ ）A、 维持细胞形态B、 创造一个既便于试剂进入细胞，又能减少产物渗出的内环境C、 防止操作中的细胞移动5、增效PCR包括（ ）轮PCR扩增A、1B、2C、3D、越多越好6、增效PCR第一轮扩增的目的是（ ）增加引物量增加模板量延长作用时间，降低聚合酶作用速度，以提高忠实性阻止过多引物间的作用的二聚体的形成，提高特异性A、B、C、D、7、增效PCR第二轮扩增的目的是（ ）增加模板量提高特异性

3、延长非特异性条带增加特异靶序列产量A、B、C、D、8增效PCR第一轮扩增时要求引物的量比通常其它PCR方法（ ）A、 高B、 一样C、 低D、 无所谓9增效PCR反应总的循环次数比其它PCR方法多的原因是（ ）A、 为了得到更大量的产物B、 为了提高特异性C、 为了提高敏感性D、 虽然引物总量未变，但由于分两次加入，使每次反应浓度降低了，为了得到相同的扩增产物必须增加循环次数10、膜结合PCR之所以可以对很少的模板或污染比较严重的样品进行扩增，其主要依据是：A、 模板与膜固定后可以作彻底漂洗B、 模板与膜结合后可以提高PCR扩增效率C、 模板与膜结合后，可用不同引物先后对不同区段进入扩增D、

4、薄膜可以吸附其它杂质从而消除污染物的影响提高信噪比11、对模板进行固定以前首先应使样品变性，其原因是：（ ）A、 为PCR反应作准备B、 使样品中的杂质变性后除去C、 薄膜结合单链DNA的能力强D、 提高Taq聚合酶的活力12、膜结合PCR的扩增效率比液相扩增法为：（ ）A、 低B、 高C、 相同D、 不一定13、膜结合PCR必须（ 0A、 适当减少循环次数B、 适当减少引物用量C、 适当延长延伸反应时间D、 适当增加循环次数14、膜结合PCR不能减轻下列（ ）样品的污染：A、 蛋白质和肽类B、 核酸C、 脂类物质D、 小分子代谢产物15、反向PCR扩增到的序列与通常PCR的差别在于：（ 0A

5、、 反向PCR扩增的是已知序列之间的未知，而通常PCR反应扩增的是已知序列两侧的已知序列。B、 反向PCR扩增的是已知序列两侧的未知序列，而通常PCR反应扩增的是已知序列之间的序列。C、 反向PCR扩增的是未知序列两侧的已知序列，而通常PCR扩增的是已知序列两侧的已知序列。D、 反向PCR扩增的是已知序列，而常规PCR扩增的是未知序列。16、反向PCR之所以能扩增未知序列的原因在于：（ ）A、 通过限制性酶切然后环化改变了序列的拓扑关系B、 通过控制反应条件改变了聚合酶的聚合方向C、 通过限制性酶切然后环化，改变了序列的内外关系D、 设计的特殊引物改变了延伸反应方向17、反向PCR中为何要将环

6、化的DNA分子切成结状（ ） A、 环状双链DNA分子易于形成超螺旋结构不利于进行PCR反应B、 DNA聚合酶不能有效结合环状分子C、 环状双链分子使扩增的非特异性太强D、 环状双链无法解链，也就无法与引物结合18、将环状DNA分子切成线性分子时要求限制性内切酶位点位于：（ ）A、 已知序列外侧B、 未知序列内侧C、 已知序列内侧D、 不易判断19、可在成环的DNA分子中引入切割的方法有：（ ）煮沸法限制性酶切法EDTA-寡核苷酸介导的特异裂解法机械剪切法A、B、C、D、20、重组PCR的重组过程实质上发生在：（ ）A、 体外B、 体内C、 体外体内都有关D、 不易判断21、重组PCR能实现重

7、组的原因在于：（ ）A、 将要重组的核酸分子共同转化细胞，细胞自身就具有使其发生重组的功能B、 将要重组的分子酶切后以人工方式拼接到一起实现重组C、 在要重组的两个扩增产物端部设计上同源序列以实现同源重组D、 重组实质上是一种随机交换DNA的过程，无法人为控制22、用重组PCR进行定点诱变时，通常将错配位点设计在引物的（ ）A、3端B、5端C、中部D、无法人为控制23、用重组PCR进行定点诱变时，突变位点的局限性在于：（ ）A、 只能位于序列中部B、 只能位于序列的两侧C、 只能引入单个突变碱基D、 只能引入两个突变碱基24、重叠延伸法不能（ 0A、 将突变引入序列中部B、 实现基因拼接C、

8、引入多个突变碱基D、 扩增未知序列并引入突变25、一般来说巢式PCR分为（ ）扩增循环。A、1个 B、2个 C、3个 D、多个26、巢式PCR之所以要用两对引物分别进行扩增，原因是（ 0提高扩增效率节约试剂用量保证反应的高特异性简化常规PCR操作A、B、C、D、27、有关巢式一步PCR的说法中正确的是：（ ）第一轮PCR引物较第二轮PCR引物短第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度高第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度低第一轮PCR引物较第二轮PCR引物长A、B、C、D、28、固着PCR是：（ ）A、 将模板与固相的琼脂糖珠相连B、 将引物与薄膜固定C、 将DNA聚合酶用耦联剂固定到

9、琼脂糖珠上D、 将引物用耦联剂固定到琼脂糖珠上29、固着PCR的主要优点在于（ ）A、 扩增产物处于溶液中易于分离纯化B、 便于聚合酶在高忠实性条件下进行扩增C、 扩增产物与固定化的琼脂糖珠相连，便于分离D、 因为引物与琼脂糖珠相连，所以可以容易把扩增产物同引物分开30、与膜结合PCR相比，固着PCR的不同点在于（ 0膜结合PCR将膜板结合到膜上，而固着PCR使引物固相化膜结合PCR便于纯化样品，而固着PCR便于纯化分离扩增产物膜结合PCR所用引物无特殊要求，而固着PCR所用引物应能与固相底质发生耦联两种PCR对聚合酶有不同要求A、B、C、D、31、单一特异引物PCR的通用引物可与（ ）配对结

10、合。A、 载体中的特定序列B、 插入片段的特异序列C、 载体中的非特异序列D、 插入片段的非特异序列32、单一特异引物PCR的特异引物可与（ ）配对结合。A、载体中的特定序列B、插入片段的特异序列C、载体中的非特异序列D、插入片段的非特异序列33、单一特异引物PCR的特异性扩增体现在（ ）A、通用引物可与载体中的特定序列特异结合B、通用引物可与插入片段的特异序列特异结合C、特异引物可与载体中的特异序列特异结合D、特异引物可与插入片段的特异序列特异结合34、重复DNA序列引物扩增法对重复序列的要求是（ ）A、 序列为低度重复B、 序列为串边重复C、 序列为散布重复D、 序列为高度重复35、重复D

11、NA序列引物扩增法得到的产物是（ ）A、 均一的B、 不均一的C、 不特异的D、 难以判断36、下列关于逆转录PCR的说法中不正确的是（ ）A、 样品中混有少量DNA对扩增结果无影响B、 需要将RNA逆转录成cDNA才能进行PCRC、 逆转录PCR方法比其它许多RNA研究方法的灵敏度高D、 逆转录PCR要求RNA比较完善37、逆转录PCR对RNA样品的要求是（ ）RNA分子完整 不含DNA 不含蛋白质和其它杂质 RNA的来源有限制A、B、C、D、38、逆转录PCR反应中合成cDNA需要的引物种类有（ ）随机六聚体下游引物寡聚（dT）寡聚（dA）A、B、C、D、39、有关引物设计中哪一个不正确（

12、 ）A、 引物的跨度以180-500KB为宜B、 5和3无回文结构C、 引物最好跨越一个内含子D、 上下引物的Tm值应有较大差异40、一步逆转录扩增法所依据的是（ ）A、 新一代Taq聚合酶既具有聚合酶活性也有逆转录酶活性B、 适当控制反应条件C、 特殊的离子浓度D、 特殊的扩增对象41、常规PCR存在的问题是（ ）A、 加热太慢，反应不能恰开始B、 PCR反应前升温过程中聚合酶产生非特异性扩增C、 缓慢的升温过程使聚合本科活力不能有效出现D、 加热过程破坏了引物和靶序列的结合影响聚合反应42、热启动PCR克服常规PCR问题的办法是（ ）高温时加入必须的反应成份加快加热过程加入无活性的酶然后高

13、温激活改变扩增对象A、B、C、D、43、在提取核酸过程中，除去大量蛋白质的操作是（ ）A、 煮沸 B、蛋白酶K C、酚/氯仿抽提 D、乙醇沉淀44、RNA应保存于：（ ）A、 水中B、 TE缓冲液C、 DEPC处理的离子水中D、 冻干保存45、如何监制PCR实验的污染情况？（ ） 设立阴性和阳性对照重复实验合成新引物消毒试剂A、B、C、D、46、下列说法不正确的是：（ ）A、 放射线不会造成核酸分子结构的破坏B、 多数放射性核素半衰期较短，必须随标随用C、 放射性核素与相应的元素具有完全相同的化学性质D、 放射性核素的检测具有极高的特异性47、PCR进行DNA的生物素标记错误的是（ ）A、 反应中生物素化dUTP浓度不能太高B、 以重组质粒为模板，模板DNA量不能太多C、 一般标记生物素化探针长度小于500bpD、 琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，标记的DNA较未标记的产物泳动快48、欲减少成套寡核苷酸筛选cDNA文库的杂交阳性克隆总数应（ ）A、 采用杂交溶剂如氯化四甲铵B、 设计较短的寡核苷酸C、 改变探针G+C含量D、 增加简并性49、体外转录生成的RNA探针