间充质干细胞治疗类风湿关节炎的基础研究进展

1、综述间充质干细胞治疗类风湿关节炎的基础研究进展蒋志琼唐中袁国华谭竟类风湿关节炎（，）是以慢性、进行性、对称性多关节炎为主要临床表现的异质性、系统性疾病。在我国的发病率为畅畅，同时还是造成我国人民劳动力丧失和致残的主要病因之一。发病涉及遗传因素、环境因素、机体的自身免疫异常以及性激素，但是具体的病因及发病机制目前尚不清楚，亦无特异的治疗，越来越多的研究认为细胞的免疫异常介导了疾病的发生与发展。间充质干细胞（，）除在组织重建中具有重要作用外，还具有独特的免疫调节作用，而其调节作用又以细胞为主。在混合淋巴细胞反应中能抑制细胞的增殖，并改变其细胞因子的分泌格局，以抑制炎性反应为主。那么，在细胞介导的中

2、，是否存在异常，还能否通过发挥免疫负调节作用从而达到对异常细胞的抑制？本文就治疗的基础研究结果做一综述。一、的生物学特性及其对细胞的免疫调节作用因其独特的生物学特性引起了广泛的研究。目前已经能够从骨，体外培养增殖迅速，经适当的诱导可向中胚层的骨细胞、软骨细胞和脂肪髓、骨外膜、肌肉、滑膜、滑液、肝脏、外周血、脐带血以及脂肪等组织中分离获得化唱细胞转化唱，同时还能向内胚层和外胚层的神经细胞、肝细胞、内皮细胞分，作为组织工程研究的细胞来源。体外研究发现与异基因外周血单个核细胞或同种异体淋巴细胞共培养不能引起同种异体细胞的增殖反应，提示具有弱免疫原性，这可能与表达极低水平的唱类抗原，不表达唱类抗原及，

3、也不表达唱、唱、及等细胞活化所需的共刺激分子有关。但大量的研究结果显示，对非特异性和特异性细胞增殖均具有明显的调节作用，而且不受主要组织相容性复合物的限制，无作者单位：四川南充，川北医学院附属医院风湿免疫研究所（蒋志琼、唐中、袁国华）；川北医学院附属医院风湿血液内科（谭竟），检验科（唐中）通讯作者：唐中，：论来自供体、受体或第三者的均具有抑制细胞增殖的作用，且这种抑制作用呈剂量依赖性。对其机制的研究发现，是通过抑制细胞周期蛋白、的表达和、的活化，使细胞停留在期从而达到抑制细胞的克隆扩增，并导致活化细胞的存活时间延长。另外，经唱刺激活化后能表达吲哚氨，唱过氧化酶（），是一种能降解必需氨基酸色氨酸

4、的胞内酶，通过耗竭色氨酸抑制异体细胞增殖。此外，还能抑制细胞分泌唱、唱，促进细胞分泌唱、唱。唱能诱导向唱转化，唱能诱导向转化。唱是细胞分泌的一种免疫负调节因子，能够抑制细胞分泌唱、唱等因子，起诱导免疫耐受的作用。最终引起细胞因子的产生比例失衡，以抑制炎症反应为主。二、的免疫学发病机制具体的病因和发病机制目前尚未完全明了，随着对淋巴细胞亚群及辅助性细胞的深入研究表明，细胞及其分泌细胞因子的水平失衡与的发生和发展密切相关。现代普遍观点认为，慢性炎症主要由自身抗原对细胞的长期刺激，以及不依赖细胞直接对滑膜细胞的活化而产生，而后者提示可能存在细菌、病毒或局部的免疫复合物长期炎症刺激，也包括在无明显免疫

5、启动因素时细胞功能的紊乱与肿瘤样生长。细胞的活化作用被认为是研究发病的里程碑。研究发现存在抑制性细胞减少，细胞相对增加，且细胞功能相对亢进，细胞活化不足使免疫调节失衡，引起细胞介导的免疫损伤，同时存在细胞功能亢进，促使未成熟的细胞分化，产生过量的免疫球蛋白。但是，应用因子（唱）以及抗细胞治疗疗效远不及巨噬细胞来源产物如唱可溶性受体，唱受体拮抗剂或唱嵌合抗体，说明滑膜炎症是一个复杂的过程，除了细胞的免疫失衡，还涉及巨噬细胞和成纤维细胞因子网络。目前所采用的慢作用药物或细胞因子治疗手段还不能真正阻止疾病病程，并且停药后疾病会复发。随着对发病机制认识的深入，也带来了治疗的发展。三、与畅患者的为了解患

6、者的是否存在异常，等收集了例活动期患者和例年龄与性别相匹配健康者的骨髓，体外分离培养得到，两者每一代的都表达、，不表达、表面抗原。经诱导都能转化成为骨、软骨、脂肪细胞，通过测定和唱、和、和唱的表达证明健康者与患者血单个核细胞的数目是相等的，而且形成成纤维细胞集落生成单位（唱）的数目也是相同的，但是在传代培养之后，从到代形成唱的能力明显低于对照，与此相一致的是采用法检测的增殖能力也是低于对照的，而且无论患者是否使用细胞毒或免疫抑制药及细胞因子抑制药，患者的形成唱的数目和增殖能力都是降低的，而且这种能力的降低并不是因为凋亡加速所致，所需的倍增时间明显长于健康对照。患者与健康者分泌的唱和唱、培养上清

7、中促生长的血管内皮细胞生长因子和基质转化生长因子以及抑制炎性反应的唱、唱、唱、唱都没有明显的区别。但是与患者关节周围成骨细胞端粒缩短相一致的是，两者与年龄相关的端粒缩短是不一致的，患者的有与年龄不相匹配的端粒变短，这种不成熟端粒的缺失至少可以部分解释传代培养克隆形成和增殖潜能的缺陷。患者的存在克隆形成和增殖潜能的异常，其免疫调节作用是否也存在异常？等也成功分离出例患者的骨髓，其分化的软骨细胞（唱，唱）单独培养后依然表达型胶原（），表明分化的软骨细胞具有软骨细胞的特性。来源于患者外周血和滑液中的细胞对都有反应。和唱与细胞共培养没有观察到细胞的明显增殖，表明细胞没有识别与分化的软骨细胞。用刺激，与

8、唱和细胞的比例达时，细胞增殖受到了明显的抑制。当其比例降到畅到畅时，此抑制作用明显减弱。与唱不能刺激细胞增加活化抗原和的表达，进一步表明其能逃脱活化细胞的识别。在用与不用刺激的与唱的培养上清中都检测不到唱、唱、唱、唱。与唱不能刺激细胞分泌促炎性细胞因子唱、唱，但却能明显抑制引起的细胞对促炎性反应因子唱、唱的分泌，抑制引起唱分泌的降低，唱的分泌无论用刺激与否，与唱都能促进其分泌。细胞增殖和活化的抑制并不是因为细胞凋亡增加所致，而是由唱介导的。例患者的和唱用刺激都分泌相同数量的唱，向培养体系中加入唱依然能够抑制细胞的增殖活化以及唱、唱的分泌，促进唱的分泌，恢复唱分泌的降低。加入唱唱单克隆抗体后可部

9、分阻止和唱引起的抑制作用。即患者的及其分化的软骨细胞对细胞的调节作用并无异常。畅治疗的实验研究为观察治疗的疗效，等采用完全弗氏佐剂乳化的免的诱导分化能力是相同的。采用有限稀释测定法观察到两者占外周疫小鼠造出的模型，其中一部分在造模的同时就经腹腔内注入同种异体小鼠的骨髓，结果给予的小鼠，其的发生率及严重性明显低于未给予者。为了解其对发病机制已经建立的小鼠是否有治疗作用，在造模的第天（此时小鼠已经具备的临床表现如关节的红肿）经腹腔内注射，结果显示依然能够阻止小鼠疾病的进展，只小鼠中有只出现了的表现，病情评分明显低于未给予者。同时研究者还证明了并不会影响抗原特异的细胞的活化，给予的小鼠细胞在体外能够

10、增殖，经、刺激能够增殖，但较未给予者呈低反应性。处理者血清唱并无明显改变，但是唱、唱、唱却明显降低。他们还追踪了在受者器官内的存活情况，结果发现第周定居于腹膜，之后可能通过血流循环，最后停留在脾脏，但是到了第天，腹膜以及脾脏内都检测不到的存在。那么在体内发挥的免疫抑制作用是不是通过其他类型细胞的活化来完成的？结果发现给予小鼠的细胞占全部脾细胞的（畅±畅），而未给予者只占（畅±畅），所有小鼠脾细胞在细胞的表达都明显高于细胞，而给予的小鼠细胞其的表达明显高于未给予者，相反，未给予的小鼠其细胞的表达明显高于给予小鼠的细胞。给予处理小鼠体内的细胞是抗原特异性的，能够抑制活化的淋巴细

11、胞增殖，来自于处理小鼠体内的细胞在体外变成了特异性的，活化的淋巴细胞增殖不能够被细胞阻断，但却明显受到了抑制。最近唱等又分离了人类脂肪来源的（），并将其与患者的细胞共培养，发现可抑制患者抗原特异的细胞反应，抑制胶原活化的和细胞的增殖反应和炎性细胞因子的产生。在处理的情况下，分泌唱的细胞和单核细胞的数目明显增加。最终，下调了患者的炎性反应和滑膜细胞对基质降解酶的产生。同时实验者还将用于治疗实验性关节炎小鼠，发现其能明显减少实验性关节炎的发生率和严重性。可降低各种炎性因子和趋化因子的产生，降低抗原特异的细胞比例，诱导淋巴结和关节中抗炎性因子唱的产生，同样还能抑制自身反应性效应细胞反应的细胞的产生，

12、发挥对的治疗作用。但是也有研究者将与肿瘤细胞同时经皮下或者通过颅腔植入裸鼠体内，结果可以增加肿瘤细胞在体内的活力，同时还能诱导凋亡细胞死亡的减少而利于肿瘤在裸鼠体内的生长。因此有必要进行临床应用的长期安全性研究。四、小结发病机制复杂，目前尚未完全明确，细胞异常在的发生与发展中具有重要的作用。细胞受体与类抗原唱提呈的抗原肽或超抗原结合，激活自身反应性细胞，引起对自身抗原的免疫反应，导致细胞因子的释放及其他免疫细胞的活化，免疫球蛋白、趋化因子、氧自由基及白三烯等炎症介质产生增多，进而引起血管炎、滑膜增生、软骨及骨破坏等的特征性病理变化。除了能抑制细胞增殖和炎性因子的分泌外，还能分化成为软骨细胞、骨细胞进行组织修复。动物实验研究证实的早期应用可以减少的发病率，发病后应用可