养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的

1、养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的影响<    【摘要】   目的：探讨养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆固醇结石成石率和血浆胆囊收缩素含量的影响。方法：80只豚鼠随机分为正常组、模型组、养肝利胆颗粒组和熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid, UDCA）组。除正常组外，采用高胆固醇致石食饵诱发法建立豚鼠胆结石动物模型，并于造模当天开始灌胃 治疗 ，养肝利胆颗粒组予养肝利胆颗粒1.81 g/(kg·d)，UDCA组予UDCA 30.12 mg /(kg·d)，模型组和正常对照组灌胃等容量的

2、生理盐水，连续7周。疗程结束后观察各组豚鼠一般情况变化和胆囊成石率，并用放射免疫法检测血浆胆囊收缩素（cholecystokinin, CCK）的含量。结果：养肝利胆颗粒能明显改善胆结石豚鼠的一般情况及行为学体征，但不能恢复到正常水平。模型组豚鼠成石率（82.35）明显高于正常对照组（5.26）（P<0.01)，养肝利胆颗粒组和UDCA组豚鼠成石率分别为27.78%和38.89%，均明显低于模型组（P<0.05）。模型组血浆CCK含量较正常对照组明显降低（P<0.01），养肝利胆颗粒组和UDCA组血浆CCK含量虽低于正常对照组，但均高于模型组，差异有 统计 学意义（P<

3、0.01）。养肝利胆颗粒组和UDCA组血浆CCK含量比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：养肝利胆颗粒能显著降低豚鼠胆结石的成石率, 其作用机制可能与养肝利胆颗粒能提高豚鼠血浆CCK含量有关。 【关键词】   复方; 养肝; 利胆; 胆石症; 胆囊收缩素; 豚鼠Objective: To explore the effects of Yanggan Lidan Granule (YGLDG), a compound traditional Chinese herbal medicine for nourishing liver and improving choleres

4、is, on the rate of gallstone formation and content of plasma cholecystokinin in guinea pigs with induced cholesterol gallstones.Methods: Ei ghty guinea pigs were randomly divided into 4 groups, which were normal control group, untreated group, YGLDGtreated group and ursodeoxycholic acid (UDCA)treate

5、d group (n=20). Except the normal control group, gallstones were induced by highcholesterol diet in the guinea pigs. YGLDG (1.81 g/kg daily) and UDCA (30.12 mg/kg daily) were given orally to guinea pigs in the corresponding group respectively for seven weeks; however, the guinea pigs of normal contr

6、ol group and untreated group were administered with normal saline. The physical signs of the guinea pigs and the rates of gallstone formation were examined, and the content of cholecystokinin (CCK) in the plasma was detected by radioimmunoassay.Results: YGLDG could obviously improve the ethological

7、signs of the guinea pigs. Gallstone formation rate of the untreated group (82.35%) was significantly increased as compared with that of the normal control group (5.26%) (P<0.01), while the gallstone formation rates of the YGLDGtreated group (27.28%) and UDCAtreated group (38.89%) were lower than

8、that of the untreated group (P<0.05). The content of CCK in plasma of the untreated group was significantly lower than that of the normal control group (P<0.01), while CCK content of the YGLDGtreated group and UDCAtreated group was lower than that of the normal control group, but both of them

9、were significantly higher than that of the untreated group (P<0.01). The difference of CCK levels between YGLDGtreated group and UDCAtreated group had no statistical significance (P>0.05).Conclusion: YGLDG can significantly decrease the rate of gallstone formation in guinea pigs. It may be rel

10、ated to elevating the content of CCK in the plasma.Keywords: compounds (TCD); nourishing liver; choleresis; cholelithiasis; cholecystokinin; guinea pig    胆石病是一种世界范围内的多发性、难治性疾病。我国胆石病呈较快的上升趋势，部分地区患病率达10%1，已接近世界发达国家胆石病10%15%的发病水平2。胆石病仍是我国良性胆道疾患中致死、致残的重要原因。前期研究 工作 表明，养肝利胆颗粒（Yanggan Lidan

11、 Granule, YGLDG）对胆石病具有一定的 临床 疗效3, 4。本实验以高胆固醇饮食诱发豚鼠胆结石，通过对胆结石豚鼠血浆胆囊收缩素（cholecystokinin, CCK）含量的研究，探讨养肝柔肝中药防治胆囊结石形成的作用机制。1  材料与方法 1.1  实验动物 选用白色、红目豚鼠共80只，雌雄各半，清洁级，体质量（220±20）g，由上海中医药大学实验动物中心提供。实验动物合格证号：scxk (20020011)。1.2  主要试剂、药物与仪器Fluo3, AM荧光染料，美国Molecular Probes公司产品；养肝柔肝中药采

12、用养肝利胆颗粒（何首乌、枸杞子、白芍、陈皮、甘草等），8 g/包（每克含生药4.5 g），由上海中医药大学龙华 医院 制剂室提供；熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid, UDCA）片，上海三维长江生化制药厂产品，批号为200304005，10 mg/片；CCK放射免疫试剂盒，由第二军医大学神经生物学教研室提供。Mgna FTIR750型红外光谱仪，美国Thermo Nicolet公司产品；LG10低温高速离心机，北京医用离心机厂产品；Facscalibour流式细胞仪，美国Becton Dickinson公司产品。1.3  动物分组、造模及药物处理 所有豚鼠

13、饲养于上海中医药大学实验动物中心动物室，室温（23±3），适应性喂养1周，无怀孕及不良反应、饮食和饮水正常者，即可纳入实验。实验豚鼠随机分为正常对照组、模型组、UDCA治疗组和养肝利胆颗粒治疗组，每组各20只。采用高胆固醇致石食饵诱发法建立豚鼠胆囊胆固醇结石动物模型5，正常对照组喂正常饲料及青菜适量，模型组喂以致石饲料及少量青菜，各治疗组在喂以相当于模型组的致石饲料及青菜的同时给以药物灌胃。药物以成人用药剂量（60 kg体质量，养肝利胆颗粒18 g/d、UDCA 300 mg/d）按体型系数换算6，养肝利胆颗粒组给以养肝利胆颗粒1.81 g/(kg·d)，UDCA组给以UD

14、CA 30.12 mg /(kg·d)灌胃，模型组和正常对照组豚鼠灌胃等容量的生理盐水，1次/d，连续7周。1.4  标本采集与处理 各组动物均于第7周末取材。以15乌拉坦腹腔注射麻醉，活体下肉眼观察胆囊中成石情况，完整切除胆囊后，再仔细观察胆囊内成石情况，收集胆结石；从豚鼠心脏采血2 ml，注入预冷的、加有20 l 1%肝素抗凝剂和1 000 U胰蛋白酶抑制剂的指行管，混匀，迅速置冰浴中，30 min内离心，取血浆置20 冰箱待测。1.5  胆石红外光谱定性 参照 文献 7采用溴化钾压片法测定胆结石样品红外光谱。1.6  放射免疫法

15、检测血浆CCK的含量 随机抽取保存的豚鼠血浆，每组10份，测定血浆CCK含量。（1）采用顺序饱和加样程序，操作步骤参照试剂盒说明书；（2）标准曲线的绘制和样本含量的 计算 ：本法分离沉淀计数为结合（B）的每分钟循环数（cpm）。计算标准管与最大结合（B0）的比值（B/B0）×100%，以不同浓度的对数值为横坐标，B/B0的比为纵坐标，在半对数纸上找到所测样本抗原（神经肽）的含量，再换算成每亳升血浆神经肽的含量。1.7  统计学方法 计量资料用x±s表示，组间比较采用方差分析。计数资料采用率或构成比表示，采用2检验方法。所有运算程序均在 计算机

16、上运用SPSS 11.0统计 软件 包进行。2  结  果 2.1  豚鼠一般情况 正常对照组豚鼠表现为体质量 自然 增加，反应灵活，活动敏捷，被毛密集而有光泽，紧贴皮肤，鼻、唇湿润清洁，眼睛明亮，大便正常，在饲养过程中无死亡。模型组动物表现饮食减少，生长缓慢，被毛干枯、蓬松且易脱落，活动迟缓，反应迟钝，眼睛、鼻、唇、耳、尾部色淡少泽。UDCA组和养肝利胆颗粒组豚鼠行为学表现、体质量和营养状况等方面与模型组比较有明显改善，但不能恢复到正常对照组水平。模型组豚鼠在造模30 d后有3只动物死亡，经解剖胆囊发现有2只豚鼠胆囊发生结石。养肝利胆颗粒组和UDCA组各有2只动物死亡，这两组死亡豚鼠经解剖胆囊均未发现明显结石生成。由于上述3组共计7只豚鼠死时未达造模的时间要求，所以没有计入成石率的结果，也未作为标本采集的来源。2.2  胆石红外光谱定性 肉眼见胆囊内有块状及絮状沉淀物，经红外光谱检测分析