鸡血清蛋黄肝中维生素A和维生素E含量的荧光测定法探讨_

1、 粘膜上皮细胞坏死、粘膜基部淋巴细胞浸润、固有层水肿图3腺胃组织病理学变化图4肾组织病理学变化3小结和讨论3.1哈尔滨市某鸡场发生的一种以生长阻滞、极度消瘦、腹泻为主要症状,以腺胃粘膜水肿、乳头部分消失为主要病理变化的病死鸡腺胃中首次分离到腺胃病变型IBV 2Hu98株,为该地区IB 的防制提供了科学依据。3.2IBV 2Hu98株人工感染SPF 鸡胚尿囊液,经负染电镜观察仅可见典型冠状病毒粒子,未见非目的病毒。IBV 2Hu98株经SPF 鸡胚传代,可见鸡胚具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,经部分理化特性测定,证实IBV 2Hu98株符合IBV 特性。3.3IBV 2Hu98株病毒液不能直接

2、凝集10mL/L 鸡红细胞,用10g/L 胰酶37处理3h ,可凝集鸡红细胞,凝集价2627。3.4IBV 2Hu98株在SPF 鸡胚上连续传5代,EID 50为10-6.40/0.2mL 。用IBV 2Hu98F 5感染1日龄SPF 鸡,死亡率为60%(3/5;用IBV 2Hu98J 1F 2感染1日龄SPF 鸡死亡率为100%(5/5;用IBV 2Hu98株感染SPF 鸡的临床症状和病理学、组织学变化,与从辽宁省大连市某鸡场分离的IBV 2D971株基本相似2。3.5我国自1995年在江苏省部分鸡场发现腺胃病变型IB 以来,目前已蔓延至全国19个省(市、区,给养鸡业造成巨大经济损失。由于呼

3、吸型和肾型IB 疫苗对腺胃型IB 无交互免疫保护作用,因而对IB 的预防免疫增加了困难,应引起有关部门的广泛重视,深入开展对IB 组织嗜性与血清型相互关系的研究。参考文献:1王永坤,朱国强,田慧芳,等.鸡传染性腺胃病的研究J .江苏农学院学报,1996,17(1:5253.2荣骏弓,康丽娟,谷守林,等.腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定J .中国预防兽医学报,1999,21(2:124127.鸡血清蛋黄肝中维生素A 和维生素E 含量的荧光测定法探讨项光华1,贾振全1,肖金玉1,郝正里1,刘晓静2(1.甘肃农业大学,甘肃兰州730070;2.甘肃省动物营养研究所,甘肃兰州730030摘要:

4、用改良荧光法对鸡血清、蛋黄和肝中的维生素A 和维生素E 进行了检测。通过测定维生素A 和维生素E 的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及不同浓度的维生素A 对维生素E 测定结果的影响等,证明用这一方法同步检测动物血清、蛋黄中的维生素A 和维生素E ,具有成本低廉、操作简便、结果可靠、易于推广等优点。同时证实了荧光测定中高浓度维生素A 对维生素E 的严重干扰现象。关键词:荧光法;维生素A ;维生素E ;血清;蛋黄;肝中图分类号:S 815.5文献标识码:B 文章编号:1000-6419(200006-0025-03维生素A 和维生素E 的测定,目前已有多种方法18。随着先进分析仪器的问世,分析测试

5、技术不断改进与更新,测定的收稿日期:1999-11-26;修回日期:2000-05-09作者简介:项光华(1951,女,山西省神池县人,高级实验师。准确度大为提高,但有些方法所用仪器设备昂贵、分析成本偏高,应用推广受到限制。在生产实践中,需要随时监测动物体内维生素A 和维生素E 水平,以便科学地调整其添加量,故选择一种操作简便、经济快速、能用一个抽提液同时测定维生素A和维生素E 的方法实属必要。笔者力图在前人工作基础上,选52中国兽医科技第30卷第6期2000年择最简单的前处理方式、最快捷的测试方法和较普通的测试仪器,准确地测定动物样品中的维生素A和维生素E含量。1材料与方法1.1仪器日本岛津

6、RF2540荧光分光光度计。1.2试剂维生素A标准品:RETINOL,All trans,SIGMA公司出品。维生素E标准品:(+2a2TOCOPHEROL,Mixed Iso2 mers,SIGMA公司出品。其它化学试剂均用国产分析纯试剂。试验用水为去离子水,电阻值>200万。1.3样品鸡的血清、蛋黄和肝。1.4测试方法2.50、5.00IU/mL(或g/mL,按蛋黄、肝测定法分别进行处理,比较测定值的差异;同时,将2种标准液按上述相同浓度混合,同法处理(平行3份,进行检测。2.0、1.0、0.5IU/mL(或g/mL,各进行36个平行,按相应测定法分别处理、测定,检测各种样品中维生素

7、A、E的回收率。2试验结果2.3蛋黄和肝样的检测结果200多份蛋黄和20份肝样的测试值与报道的结果一致。肝中维生素A的含量越高维生素E 含量越低(甚至为负值,与饲料中的添加量呈负相关。2.5回收试验血清中维生素A和维生素E的回收率分别为98%102%和98%103%;蛋黄、肝中维生素A和维生素E的回收率分别为95%103%和98%102%。2.6精密度试验测定结果见表1。表1精密度测定结果样品维生素测定次数CV(%血清A6 4.6血清E6 2.9肝A15 4.4蛋黄A3×3 5.5蛋黄E3×3 6.82.7维生素A对维生素E测定的干扰结果见表2。表2荧光测定液中维生素A对维

8、生素E测定的干扰管号123456789维生素A添加量(g 2.0 2.0 2.020 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0维生素E注:1为3个平行测定的平均值由表2可见,当测定液中维生素A大于1.0IU时,维生素E值开始下降,大于2.0IU后,显著下降,大于10.0IU后,几乎无法进行维生素E的测定。3讨论本法测定动物血清中的维生素A和维生素E含量极为方62Chinese Journal of Veterinary Science and TechnologyVol.30No.62000 便,不用皂化也无需其它处理,且测定值均在最佳线性范围内,结果可靠。蛋黄的测定方法也较为方便,重复及回收率

9、均较满意;肝中维生素A 的测定、重复、回收结果都很好。但由于肝是维生素A 的主要贮存器官,维生素A 含量较高,使维生素E 的测定受到严重干扰。在血清皂化试样测定中也发现,当维生素A 和维生素E 共同存在时,随维生素A 浓度升高而维生素E 测定值下降。通过2种标准液混合测定,充分证实维生素A 浓度高时对维生素E 的测定有严重干扰现象。已有报道2当给动物饲喂高水平维生素A 时,其血浆和肝中维生素E 含量下降,许多人均从动物机体内找原因,或认为是维生素A 干扰了维生素E 在肠道中的吸收,或认为是维生素加强了维生素E 在消化道的氧化。笔者认为,必须排除测定中维生素A 对维生素E 的干扰,准确测定出样品

10、中、尤其是维生素A 含量较高的样品中维生素E 的含量,才能正确地分析体内2种维生素的相互影响。Pudelkiewicz (1964用色谱法测定也出现高浓度维生素A 干扰维生素E 的现象,对维生素E 羟基化可消除此干扰。综上所述,用本试验方法测定动物血液、禽蛋中的维生素A 和维生素E 是可行的,操作简便、成本低廉、结果可靠,也易于推广应用。但对维生素A 含量较高的样品,维生素E 实测值不能代表检样中的真实含量,还有待进一步探讨。参考文献:1方国桢,吴明君.维生素E 的分光光度和荧光分析进展J .中国药学杂志,1994,29(7:390393.2黄俊纯,何胜才,王述容,等.不同维生素A 添加量对肉

11、用仔鸡的生长发育及血浆、肝脏中V E 含量的影响J .中国动物营养学报,1989,1(1:4450.3宁开桂.实用饲料分析手册M .北京:中国农业科技出版社,1993.128129.4文杰,王和民.种母鸡生长、产蛋和产蛋后期对2生育酚的利用J .畜牧兽医学报,1990,21(4:289294.5吴毅,陈晋,中海莲.同步荧光法测定血清维生素EJ .临床检验杂志,1995,13(3:120121.6周正本.实用卫生检验技术大全M .北京:科学出版社,1992.620621.7周捷,李培成.血清维生素A 和E 的微量荧光测定法J .中华医学检验杂志,1989,12(6:346347.8Michael

12、 W S ,Edward C N.Vitamin profiles of eggs as Indi 2catons of nutritional status in the laying hen :vitamin A study J .Poultry Sci ,1993,72:154164.鸡用天然缓释免疫增强剂的研究天然缓释免疫增强剂对IBD 等4种疫苗的免疫增效试验王超英,柳纪省,白银梅,方玉萍,李宝玉(中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃兰州730046关键词:雏鸡;天然缓释免疫增强剂;抗体效价;保护率中图分类号:S 859.53文献标识码:B 文章编号:1000-6419(200006-

13、0027-03动物机体免疫功能直接影响其抗病能力及接种疫苗后的免疫效果。目前一些传染病由于疫苗本身的缺陷或机体免疫功能低下等原因,致使免疫效果不理想,甚至导致免疫失败,因此免疫增强剂的研究已引起国内外学者的重视。现已证明,具有免疫增强作用的物质有数十种之多,如弗氏佐剂、左旋咪唑、细胞因子等1。然而市售免疫增强剂制备复杂、价格昂贵,有的还有一定的毒副作用。大量研究资料表明,许多中草药能全面启动机体的免疫系统,增强机体的免疫功能,而且中草药资源丰富、价格低廉、毒副作用小。我们利用筛选出的天然药物配方研制收稿日期:1999-09-21作者简介:王超英(1958,男,山东省梁山县人,副研究员。出鸡用天然缓释免疫增强剂,进行了对鸡的释放期、安全性及效力试验2。本试验的目的是研究该免疫增强剂对IBD 、ND 、IB 弱毒疫苗及ND 油乳剂灭活苗的免疫增效作用,评价对雏鸡特异性免疫应答