每日一菌之分枝杆菌

1、每日一菌之分枝杆菌小编正式开启每日奉献一菌的编辑模式，不要离开，总 有一株菌是您希望了解的 哦，对了，据说法国生物梅里埃 公司有一款小型仪器适用于分枝杆菌抗酸染色与荧光染色， 嘘，小编也只是听说啦 分枝杆菌分枝杆菌属是一类细长或 略带弯曲、为数众多（包括 54 个种）呈分支状生长的需氧 杆菌。因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。本属细菌的 主要特点是细胞壁含有大量脂类， 可占其干重的 60% ，这与 其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。一般不易着色，若 经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗 3% 盐酸酒精的脱 色作用，故又称抗酸杆菌。需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚 膜。引起的疾病均为慢性，有肉芽

2、肿病变的炎症特点。分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝 杆菌和麻风分枝杆菌。 一、结核分枝杆菌结核分枝杆菌简称结核杆菌，是引起人和动物结核病的 病原菌。目前已知在我国引起人类结核病的主要有人型和牛 型结核分枝杆菌。（一）生物学特性1. 形态与染色： 结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌， 其大小约（14）卩mx 0.4卩m在培养基中可呈球状或丝状， 陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。抗酸染色时 菌体呈红色。显微镜下常堆积成团、成束，排列无序，也有 呈链状、索状者。革兰染色阳性，既往在组织中曾发现革兰 阳性的非抗酸颗粒，接种动物可产生典型的结核病变，后被 称为 Much 颗粒。

3、金胺“ 0”等染色，在荧光显微镜下菌体可发 生荧光。2. 培养特性：本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%10%C02环境中可刺激其生长。烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大，3540 °C 均可生长，最适温度为 3537C。最适pH为6.56.8。兼 性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生 存于巨噬细胞内。生长时还需适当的湿度。本菌生长缓慢， 最快的分裂速度为 18h 一代。在固体培养基上，一般需 2 6 周才能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状， 形似菜花。在液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜， 且

4、干燥易碎而沉于管底。此种特性与菌体的疏水性有关。有 毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。结核分枝杆菌营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃 薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基（罗氏培养基）上 才能生长。但经多次传代或长期保存的菌种，也能在营养较 简单的培养基中生长。据报道少量铁质可促进结核分枝杆菌生长，铁质可使细 菌产生分枝杆菌生长素。选择培养基加有抗微生物药物，以 抑制标本中杂菌、真菌等污染菌的生长。常用的选择剂有结 晶紫、孔雀绿、青霉素、萘啶酸、林可霉素、多粘菌素 B 等。3. 生化反应：各型结核杆菌均不发酵糖类，能产生过氧 化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯 -80 水解试

5、验和耐热磷酸 酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。人型结 核分枝杆菌烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性， 借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。4. 抵抗力：对酒精敏感。5. 变异性：形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变 异。毒力变异：卡介苗（ BCG ）将有毒的牛型结核分枝 杆菌培养于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经 13 年传 种 230 代，获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获 得免疫力。用于预防结核病。（二）临床意义1. 致病性：该菌不产生内毒素和外毒素和侵袭性酶。可 在细胞内、 外生长与大量繁殖， 致病物质主要是荚膜、 脂质、 蛋白质。结核分枝杆菌主要通过呼吸道、

6、消化道和受损伤的 皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通 过呼吸道引起的肺结核最多见。肺部感染可分为原发性感染 和继发性感染。 肺外感染可发生在脑、 肾、肠、及腹膜等处。 机体对菌体成分和其代谢产物引起免疫损伤以及变态反应， 从而导致一系列组织学上的病理变化。 （机理）2. Koch 现象：机体对结核分枝杆菌的特异性免疫和迟发 型超敏反应同时存在。结核的特异性免疫是通过结核分枝杆 菌感染后所产生，试验证明，将有毒结核分枝杆菌纯培养物 初次接种于健康豚鼠，不产生速发型过敏反应，而经1014d , 局部逐渐形成肿块，继而坏死，溃疡，直至动物死亡。若在 8 12 周之前给动物接种减毒或

7、小量结核分枝杆菌，第二次 接种时则局部反应提前，于 2 3d 内发生红肿硬结，后有溃 疡但很快趋于痊愈。此现象为 Koch 在 1891 年观察到的， 故称为 Koch 现象。免疫性和迟发型超敏反应由不同的 T 细 胞亚群介导。3. 结核菌素试验：利用W型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。本实验对婴幼儿结核病的诊断有意义。（三）微生物学检验1. 标本采集：根据感染部位的不同，可采集不同标本。 结核患者各感染部位的标本中大多都混有其他细菌，为此应 采取能抑制污染菌的方法。若作分离培养，必须使用灭菌容 器，患者应停药 1 2 天后再采集标本。可采集痰、尿、粪 便、胃液、胸水、腹水、脑脊液

8、、关节液、脓液等。2. 检验方法（1）涂片检查直接涂片包括：1 ）薄涂片：挑取痰或其他处理过的标本约0.01ml ，涂沫于载玻片上，用萋 -尼（热染法）或 Kinyoun （冷染法）抗 酸染色，油镜镜检，报告方法： -：全视野（或 100 个视野） 未找到抗酸菌；+ :全视野发现39个；+ :全视野发现 1099个；+ :每视野发现19个；+ :每视野发现 10 个以上（全视野发现 1 2 个时报告抗酸菌的个数） 。2 ）厚涂片:取标本 0.1ml ，涂片，抗酸染色、镜检，报 告方法同上。3 ）集菌涂片:主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。4 ）荧光显微镜检查法：制片同前。用金铵“O'染

9、色，在荧光显微镜下分枝杆菌可发出荧光。（2 ）分离培养1 ）固体培养法:结核分枝杆菌的分离培养对于结核病 的诊断、疗效观察及抗结核药物的研究均具有重要意义。培 养前针对标本应做适当的前处理，如痰可做 4%H2S04 或 4%NaOH处理2030min，除去杂菌再接种于罗氏培养基， 37C 5%10%C02培养，定时观察，至 48周。此方法可 准确诊断结核杆菌。2）液体培养法: Bactec-460 半自动培养方法， Bact ，Vitck-3D ，全自动快速培养系统。3）噬菌体法。（ 3）基因快速诊断： PCR 反向膜探针杂交， DNA 探针， 16s rRNA 基因序列测定，高效液相色谱（

10、HPLC ）监测分枝 菌酸。简便快速、灵敏度高、特异性强。但需注意实验器材 的污染问题，以免出现假阳性。（4）耐药性： 结核杆菌对多种抗结核药物产生耐药性， 对利福平耐药是由 rpoB 的基因突变，链霉素耐药是和编码 核糖体 S12 蛋白的 rpsl 基因发生突变以及编码 16SrRNA 的 rrs 基因发生突变， 异烟肼的耐药与过氧化氢酶和过氧化物酶 的失活有关。（四）治疗原则 利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素为第一线药物。利 福平与异烟肼合用可以减少耐药的产生。对于严重感染，可 用吡嗪酰胺与利福平及异烟肼联合使用。 二、非典型（非 结核）分枝杆菌分枝杆菌属中除结核杆菌和麻风杆菌以外，均称为

11、非结 核分枝杆菌或非典型分枝杆菌。因其染色性同样具有抗酸性 亦称非结核抗酸菌，其中有1417个非典菌种能使人致病， 可侵犯全身脏器和组织，以肺最常见，其临床症状、 X 线所 见很难与肺结核病区别，而大多数非典菌对主要抗结核药耐 药，故该菌的感染和发病已成为流行病学和临床上的主要课 题，与发达国家一样，我国近年来发现率也有增高趋势。以第川群鸟-胞内分枝杆菌和第W群偶发分枝杆菌及龟分枝杆 菌为多。 三、麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌( M Leprae )简称麻风杆菌，是麻风病的 病原菌。首先由 Han-senl937 年从麻风病人组织中发现。麻 风分枝杆菌亦为抗酸杆菌，但较结核杆菌短而粗。抗酸染色 着色均匀，呈束状或团状排列。为典型的胞内寄生菌，该菌 所在的细胞胞质呈泡沫状称麻风细胞。用药后细菌可断裂为 颗粒状，链状等，着色不均匀，叫不完整染色菌。革兰阳性 无动力、无荚膜和芽胞。麻风分枝杆菌是麻风的病原菌，麻风是一种慢性传染病， 早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢，晚期可侵犯深部组织 和器官，此菌尚未人工