T-SPOT的临床意义

1、T-spot 的临床意义结核病目前仍是全球公共卫生的主要问题。丫干扰素释放试验通过结核分枝 杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞释放的丫干扰素，明确有无结核分枝杆菌感染，不会与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌感染产生交叉反应， 特异度优于结 核菌素皮试。目前有两种商业化的试剂盒用于体外检测丫 干扰素，一种是基于酶联免疫吸 附试验法，检测全血丫干扰素浓度；另一种是基于酶联免疫斑点方法检测结核分 枝杆菌特异性效应栽细胞斑点数，如结核感染栽细胞斑点实验（ T-SPOT ），其 敏感度优于 ILISA 方法。病原学检查是目前结核病诊断的金标准， 但儿童痰标本不易获得， 且常合并 肺外结核，因此儿童痰细菌学检

2、查阳性的肺结核患病率仅为12310万。目前PPD试验作为潜伏结核感染诊断的主要工具，在成人结核病患者的检出率仅为 0. 39%。BCG接种后PPD常呈阳性反应，目前尚无可靠标准区别出自然结核杆 菌感染与卡介苗接种后的结素反应；同时机体对PPD的反应程度受机体免疫系统 状态的影响。以结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6和CFP一 10抗原为基础的ELIS POT试验方法敏感性高、特异性强。国外的大量研究数据表明，ELISPOT试验检 测结核感染的特异性达95%以上，敏感性达75%97%,尤其适用于免疫抑制人 群、潜伏结核感染者的诊断。北京儿童医院孙琳、赵顺英报道 ：活动性结核病组中，21例患儿存在

3、活动性结核病症状，其PPD试验阳性，随 后行ELISPOT试验阳性19例，临床可以确诊结核病；另6例患儿PPD试验阴性， 而ELISPOT试验阳性5例，其中4例患儿临床诊断血行播散性重症结核病，CD4水平低于正常，推测4例患儿PPD试验阴性可能由于机体免疫功能低下， 机体迟发型免疫应答减弱所致； 这一实验结果也进一步验证了 ELISPOT 方法受机 体免疫功能状态影响小， 尤其是年幼儿在免疫功能低下或重症患儿使用免疫抑制 剂时仍具有较 理想的敏感性。 该结果为临床诊断提供了有力证据， 尤其是可以为免疫力降低的 PPD阴性结核病重症患者的临床诊断提供诊断依据。国外研究指出，ELISPOT试验受机

4、体免疫状态影响较小，只有当外周血 CIM 数小于100细胞/ L时，其敏感性才会降低。但同时，在我们研究结果中也发现， 在27例活动性结核病患儿中有3例为ELISPOT试验阴性，考虑为ELISPOT假阴性 结果（取血量少造成细胞数量少、实验操作误差等 ），此时应该结合临床资料综合 分析做出临床诊断。需要指出的是，病原学检测均阴性的 27例活动性结核病患者中 889 ELISPOT阳性，提示该实验对于肺外结核或者难以获取痰标本的儿童结核病患者 具有较高的诊断价值，但仍需要进一步扩大样本量进行验证。非结核性肺疾病组中，8例患儿PPD阳性临床考虑结核感染，进一步应用 ELISPOT方法检测后，仅有1

5、例患儿为阳性，ELISPOT阴性的7例患儿均有卡介苗 接种史，且为中等强度反应。因此7例PPD阳性患儿临床应首先考虑为卡介苗接 种后的交叉反应，并定期随访排除潜伏结核感染。1例ELISPOT阳性患儿应结合临床考虑结核感染的诊断。该试验结果与国外研究结果一致，证明了 ELISPOT 试验具有较高的特异性， 是当前健康人群筛查潜伏结核的较有潜力的新方法。 但 由于ELIS POT试验存在操作技术要求高，费用昂贵等缺点，限制了其在经济发展水平低的发展中国家的应用本研究认为，当I临床医师不能准确判断结核分枝杆菌自然感染和卡介苗接 种的PPD阳性结果时，或当患儿PPD试验阴性，临床结合病史、影像学检查等

6、综 合分析不能除外结核病存在时，ELISPOT试验可以作为一个重要的辅助诊断工 具。因此，在临床实际应用中将ELISPOT和PPD相结合应是我国目前较为合理、 经济的诊断流程。其他情况也可以引起T-SPOT阳性：(1) 自身免疫疾病引起的机体免疫紊乱，导致 T淋巴细胞中非特异性IFN- 丫释 放增多；(2) 重症脓毒症患者机体 T 淋巴细胞处于高度活化状态，导致 T 淋巴细胞中非 特异性IFN- 丫释放增多；(3) 胞内病毒或胞内细菌严重感染时， T 淋巴细胞处于活化状态，也会导致 T 淋 巴细胞中的非特异性INF- 丫释放增多。可能影响 T-SPOT 检测的各项影响因素发现T-SPOT结果与性别、年龄、卡介苗接种史、结核病接触史、机体免疫 状态和感染部位均无关，与孙琳等的报道符合，说明T-SPOT在儿童结核病及结 核分枝杆菌潜伏感染的临床诊断中具有重