抗生素类药物含量测定

1、药品检验技术课程单元教学设计情境：抗生素类药物的分析(11) 任务：抗生素类药物含量测定(04) 教学目标设计序号5上课地点理实一体化教室授课形式讲授、学生操作练习教 学 目 标技能目标知识目标能够利用高效液相色谱法测定阿莫西林的含量掌握抗生素类药物含量测定及方法教 学 重 点-内酰胺类抗生素的含量测定、氨基糖苷类抗生素的含量测定。教 学 难 点同学们能够利用高效液相色谱法测定阿莫西林的含量能力训练任务及案例同学们通过操作高效液相色谱对阿莫西林的含量进行测定，锻炼了同学们的动手操作能力加固了对基础知识的掌握。教学进程设计（下面各格均可合并）步骤教学内容教学方法教学手段学生活动时间分配基础知识讲

2、解抗生素类药物含量测定方法教师举例、点评、归纳概括引出知识点。任务引导做好课堂笔记，掌握课堂重点20分钟案例分析例如：阿莫西林含量的测定同学利用高效液相色谱法测定阿莫西林的含量25分钟-内酰胺类抗生素的含量测定近年来随着抗生素的进展，化学或物理化学测定法正逐步成为抗生素药物测定的方法主流，尤其是高效液相法在抗生素的测定中的应用越来越广。中国药典（2010年版）收载的此类药物的含量测定方法有高效液相色谱法、紫外-可见分光光度法、滴定分析法、碘量法等。1高效液相色谱法HPLC法是近年来发展最快的方法，它能较好地分离供试品中可能存在的降解产物、未除尽的原料及中间体等杂质而准确定量。适用于本类药物的原

3、料、各种制剂及生物样本的分析测定。例5：阿莫西林的含量测定 （1）色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用2mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至5.0）-乙腈（97.5:2.5）为流动相；检测波长为254nm。取阿莫西林系统适用性对照品约25mg，置50mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20L注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。（2）测定法 取本品约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相溶解并定量稀释至刻度，摇匀，精密量取20L注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿莫西林对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，

4、即得。2紫外-可见分光光度法青霉素类药物的降解产物青霉烯酸具有紫外吸收性质，在320nm360nm处有强烈吸收，但此水解产物不稳定，可加入Cu2+或Hg2+等与其生成稳定的配位化合物，再进行紫外分光光度法测定。（1）酸水解法（铜盐法） 青霉素族分子的-内酰胺环无紫外吸收，而其在弱酸性下的降解产物青霉烯酸在320360nm处有强烈吸收，但此水解产物不稳定，加入Cu2+，与青霉稀酸形成较稳定的螯合物，在320nm波长处有最大吸收。例6：氨苄西林的含量测定取供试品及氨苄西林标准品约100mg，精密称定，加水溶解并使成100mL，作为供试原液和标准原液。再精密量取供试原液和标准原液各2mL，加硫酸铜-

5、枸橼酸试液使成100mL，作为供试溶液和标准溶液。准确量取供试溶液和标准溶液各10mL，置具塞试管中，盖上试管塞，在75的水中加热30min后，立刻冷却至室温。分别以不加热的两溶液作为对照液，在320nm波长处测定供试溶液和标准溶液的吸收度AT和AS。 （13-1）（2）硫酸汞盐法 青霉素族抗生素在咪唑的催化下与氯化高汞能定量反应生成相应的青霉烯酸硫醇汞盐，该盐在324345nm波长范围内有最大吸收。例7：氯唑西林钠胶囊的含量测定精密称取适量（约相当于氯唑西林60mg），置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液5mL，置另100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，

6、再精密量取滤液5mL，置25mL量瓶中，加咪唑溶液（取经苯精制后咪唑8.25g，加水60mL溶解后，加6mol/L盐溶液8.3mL，在搅拌下滴加0.27二氯化汞溶液10mL调节pH6.8±0.05，用水稀释至100mL，滤过）至刻度，摇匀，置60水浴中，加热30min，取出，冷却，照分光光度法，在346nm的波长测定吸收度；另取氯唑西林对照品，同法测定，计算含量的百分比。 （13-2）式中，AX供试品吸收度；AR对照品吸收度；1.0521g氯唑西林相当于氯唑西林钠的克数；D供试品稀释倍数；CR对照品浓度，mg/mL；W供试品取量，mg。3滴定分析法青霉素或头孢菌素的b-内酰胺环可被稀

7、碱定量水解，可用于含量测定。如苯唑西林钠的含量测定可以采用酸碱滴定法，其原理是苯唑西林钠在水溶液中加过量的氢氧化钠滴定液水解，产生的青霉噻唑酸被中和，再以盐酸滴定剩余的氢氧化钠，以氢氧化钠滴定液的消耗量计算苯唑西林钠的含量。4碘量法青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，其降解产物消耗碘。如青霉素经水解生成的青霉噻唑酸可与碘作用，根据消耗的碘量计算青霉素的含量。青霉素的降解产物等杂质亦可消耗碘而影响测定结果，可以用未经水解的样品液作空白试验进行校正。一般认为碘与青霉噻唑酸的作用以pH为4.5，温度为2426为最佳。由于青霉素能吸收较多的碘（1mol青霉素能消耗8mol碘），故本法灵敏度较高。碘量法是青霉素类的经典测定方法，头孢菌素族也可经碱水解，b-内酰胺开环后与碘发生氧化还原反应，根据消耗的碘量计算含量。氨基糖苷类抗生素的含量测定目前各国药典仍采用抗生素微生物检定法测定氨基糖苷类抗生素