人类白细胞抗原等位基因与HBV宫内感染关系

1、人类白细胞抗原等位基因与HBV宫内感染关系    【关键词】  乙型肝炎病毒；宫内感染；人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)摘要： 目的   研究人类白细胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因与乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)宫内感染的关系，探讨HBV宫内感染的遗传易感性，确定HBV宫内感染的易感基因和保护基因。方法   采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例外周静脉血血块中HLA-DR3、DR

2、7、DRl3、DR53等位基因型分布及频率。结果   (1)宫内感染组孕妇HLA-DR3基因频率为2414(729)，显著高于非宫内感染组孕妇的633(10158)(P=0007)。其余各表型比较，差异无统计学意义(P>005)。(2)宫内感染组新生儿HLA-DR3基因频率为1724(529)，显著高于非宫内感染组新生儿的506(8158)(P=0033)。其余各表型比较，差异无统计学意义(P>005)。(3)母婴HLA-DR3同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比较差异有统计学意义(P=0049)；母婴HLA-DR7、DR13、DR53同阳性在宫内感染组与宫内未

3、感染组间比较，差异无统计学意义(P>005)。结论   HBsAg阳性孕妇及其胎儿同时或任一携带HLA-DR3，易导致HBV宫内感染；HLA-DR3是HBV宫内感染的易感基因。关键词： 乙型肝炎病毒；宫内感染；人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)Association between HLA-DR alleles and HBV intrauterine infection   Abstract： Objective   To study the association between HLA-DR3,DR7,DR13,D

4、R53 and HBV intrauterine infection to probe into the susceptibility to intrauterine infection of hepatitis B virus and to find its predisposing genes and protecting genes.Methods   HLA-DR3,DR7,DR13,DR53 were detected by the technique of polymerase chain reaction-sequence specific primers(P

5、CR-SSP) in maternal and neonatal blood clot.Results   (1) The frequency of HLA-DR was 24.14% in women with intrauterine infection,which was higher than that (6.33%) in women without intrauterine infection(P=0.007).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in pregnant wome

6、n and HBV intrauterine infection(P>0.05).(2) The frequeney of HLA-R of newborns was 17.24% in women with intrauterine infection,which is higher that (5.06%) in women withotll infection(P=0.033).There was no association between HLA-DR7,DR13,DR53 positive in newborns and HBV intrauterine infection(

7、P>0.05).(3)There was significant association between HLA-DR3 concordance and HBVintrauterine infection(P=0.049).There was no association between DR7,DR13,DR53 concordance and HBV intrauterine infection(P>0.05).Conclusion   HLA-DR3 carriers of pregnant women and their newborns have su

8、sceptibility to HBV intrauterine infection.HLA-DR3 is the predisposing gene of HBV intrauterine infection.Key words： HBV；intrauterine infection；HLA-DR antigen      肝炎是一种严重危害人类健康的世界性传染病，我国是乙肝高发区，乙肝病毒的母婴传播不仅造成人群中众多的HBsAg携带者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多数学者认为，人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-

9、DR)与乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相关，而HLA-DR等位基因与HBV宫内感染的关系争议较多。本文通过研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53与HBV宫内感染的关系，探讨HBV宫内感染的遗传易感性，为防制HBV宫内感染提供理论依据。1   对象与方法11   对象   以2003年6月2004年11月太原市省各市级医院筛检，并在太原市传染病院妇产科进行产前检查及分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例作为研究对象。并根据新生儿有无宫内感染，分为宫内感染组(29例)和宫内未感染组(158例)，2组在年龄分布、文化程度、职业

10、构成等均衡可比。12   方法   121   标本采集及处理   收集孕妇肘静脉血及新生儿出生24h内且未注射高效价免疫球蛋白(HBIG，hepatitis B immune globulin)的股静脉血各2ml，4冰箱保存，6h内以4000r/min4离心15min，分离血清与血块，-20保存备检。122   乙肝血清标志物检测   采用酶联免疫吸附(ELISA)法，试剂盒（上海科华实业总公司）。123   HBV DNA检测  

11、(1)HBV DNA提取：参考文献1，采用异硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBV DNA的扩增：采用巢式聚合酶链反应(nPCR)。124   HLA-DR等位基因检测   (1)人类基因组DNA的提取十二烷基磺酸钠（SDS）蛋自酶K法提取血块基因组DNA。(2)HLA-DR等位基因扩增：参考文献2的引物设计采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测孕妇及其新生儿外周静脉血血块中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及频率。(3)PCR产物的检测：取扩增产物510l，按5：1(V：V)与溴酚兰混匀，加样于15琼脂糖凝胶(含0

12、5gml溴化乙锭)板，在60Vcm电压下泳动50min，紫外灯下观察结果。125   新生儿HBV宫内感染诊断标准   新生儿外周血血清HBsAg和/或HBV DNA阳性，即诊断为HBV宫内感染。13   统计分析   资料输入SPSS115软件进行统计分析；计算各指标的阳性率，四格表2、Fisher确切概率、OR值及OR95%CI。2   结果21   HBsAg阳性孕妇及其新生儿HLA-DR扩增图谱   提取的血块DNA经PCR扩增后呈现明显条带，与标

13、准分子标记物（Marker）条带比较，确定HLA-DR基因型（图1，2，3，4）。DR3+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阳性扩增产物，扩增产物片断长度为151bp;DR3-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阴性扩增产物；M：标准分子标记物(Marker)图1   HLA-DR3等位基因的PCR扩增产物电泳结果（略）DR7+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR7阳性扩增产物，扩增产物片断长度为232bp；DRT-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR7阴性扩增产物；M：标准分子标记物(Marker)图2   HLA-DR7等位基因的PCR扩增产物电泳结果

14、（略）DR13+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR13阳性扩增产物，扩增产物片断长度为130bp；DR13-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR13阴性扩增产物；M：标准分子标记物(Marker)图3   HLA-DR13等位基因的PCR扩增产物电泳结果（略）DR53+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR53阳性扩增产物，扩增产物片断长度为213bp；DR53-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR53阴性扩增产物；C：内对照注：DR53引物与内对照引物可能发生了引物间的错配等，故分管同时扩增图4   HLA-DR53等位基因的PCR扩增产物电泳结果（略）22&

15、#160;  HLA-DR与HBV宫内感染的关系   221   孕妇HLA-DR等位基因分布及频率比较（表1）   宫内感染组孕妇HLA-DR3基因频率明显高于宫内未感染组，经检验，差异有统计学意义（OR=4709,P=0007）；HLA-DR7、DR13、DR53基因频率在宫内感染组与宫内未感染组孕妇比较，经检验，差异无统计学意义（P>005）。表1   宫内感染组与宫内未感染组孕妇HLA-DR基因分布及频率比较（略）注：*为fisher确切概率法计算结果222   新生儿HLA