花生遗传育种与栽培生理研究进展

1、“花生遗传育种与栽培生理”泰山学者岗位研究进展一、岗位工作目标1 、利用现代高新技术与常规技术相结合的手段，开展花生高产优质的分子遗传研究，重点进行高产、优质、抗病有益基因的挖掘和利用，筛选相关的分子标记，解决花生育种品质难以提高、产量徘徊不前的瓶颈问题。五年内建立起花生分子育种技术体系。2 、通过重点实验室、工程中心及测试中心等研究平台建设，使团队具备开展国家“ 863 ”、“ 973 ”、支撑计划、国家自然基金委等高新技术研究项目的条件，满足从事基因克隆、分子标记、转基因、生理生化等研究工作的需求，研究手段达到国内一流研究水平。3 、在专用型花生新品种培育、良种良法栽培技术、行业标准、发明

2、和实用新型专利、新品种保护等方面出一批大成果，达到国内领先水平。4 、发表一批高水平的研究论文，撰写学术专著。论文学术水平达到国内一流，专著水平在国际同行中有较大影响。二、岗位工作内容1 、 培养硕士研究生 10 名，指导博士后 3-4 名。2 、 培养 10-12 名在本学科领域某一研究方向上有一定影响的学术骨干。团队平均年龄 40 岁以下，博士占团队人数的 40% 左右，硕士占 50% 左右。高级职称成员 50% 以上。3 、 建成国家花生工程技术研究中心、国家花生创新基地、国家花生种质改良中心、山东省花生重点实验室等研究平台。4 、作为第一完成人， 获得省科技进步一等奖或国家科技进步二等

3、奖以上成果 1 项。获得发明专利 2 项，实用新型专利 2 项；培育审（鉴定）各类专用花生新品种 8 个。5 、作为第一作者或通讯作者， 发表高水平研究论文 20 篇以上（其中 SCI 或 EI 收录论文 6 篇），撰写出版中国花生品种及系谱专著一部，科普书籍一部。6 、主持申报国家级科研项目（包括自然科学基金、 “ 863 ” 、科技支撑计划、国家重大条件建设项目等）及国际合作项目 8-10 项，省级科研项目 8-10 项，到位科研总经费在 3000 万元以上。三、研究进展1 花生新品种培育1.1.1 花育25号该品种系山东省花生研究所用鲁花14号为母本，花选1号为父本杂交，后代采用系谱法选

4、育而成。2007年通过山东省农作物品种审定委员会审定定名。在山东省花生新品种大粒组区域试验中，2004-2005年，平均亩产荚果319.79公斤，籽仁232.49公斤，分别比对照鲁花11号增产7.28%和9.43%，在山东省花生新品种大粒组生产试验中，2006年平均亩产荚果327.6公斤，籽仁240.9公斤，分别比对照鲁花11号增产10.9%和12.2%。该品种属早熟直立大花生，生育期129天左右。主茎高46.5厘米，株型直立，分枝数78条左右，叶色绿，结果集中。荚果网纹明显，近普通型，籽仁无裂纹，种皮粉红色，百果重239克，百仁重98克，公斤果数571个，公斤仁数1234个，出米率73.5，

5、脂肪含量48.6%，蛋白质含量25.2%，油酸/亚油酸比值1.09。抗旱性强，较抗多种叶部病害和条纹病毒病，该品种后期绿叶保持时间长、不早衰。1.1.2 花育26号该品种系山东省花生研究所用R1为母本，ICGS11为父本杂交，采用系谱法选育而成。2007年通过山东省农作物品种审定委员会审定定名。该品种属疏枝型直立小花生，主茎高52.5厘米，侧枝长57厘米，总分枝8条，单株结果数21个，单株生产力18克，荚果普通形，公斤果数905个，公斤仁数1911个，百果重151克，百仁重621.1克，出米率73 %；子仁粗脂肪含量51.8%，蛋白质含量23.5%，油酸51.2，亚油酸30.4，O/L值1.6

6、8。该品系出苗整齐，植株直立，分枝少，生长稳健，种子休眠性强，较抗叶斑病和网斑病，生育期132天。主要优点是产量高，品质优，抗病性强。该品种2004-2005年参加山东省花生品种区域试验，两年10个点次平均亩产荚果297.92公斤，比对照鲁花12号的254.09公斤亩增43.83公斤，增产17.25 %；平均亩产子仁215.95公斤，比对照鲁花12号的185.26公斤亩增30.69公斤，增产16.57 %，均达极显著水平，两年均为参试品种的第一位。2006年参加山东省花生品种生产试验中，平均亩产荚果303.5公斤，籽仁227.8公斤，分别比对照鲁花12号增产21.4%和23.9%，居第一位。1

7、.1.3 花育28号山东省花生研究所于用鲁花12号为母本，超早1号为父本杂交，后代采用系谱法选育而成。2008年4月通过山东省农作物品种审定委员会审定定名。产量性状：该品种在2005-2006年山东省花生新品种小粒组区域试验中，平均亩产荚果311.38公斤，籽仁233.45公斤，分别比对照鲁花12号分别增产12.9%和15.8%，居第一位。2007年参加生产试验，平均亩产荚果288.1公斤，籽仁207.8公斤，分别比对照鲁花12号增产26.4%和26.7%，居第一位。特征特性：该品种属疏枝型早熟小花生品种，春播生育期约115天。连续开花，株形直立，主茎高37.7cm ，侧枝长41.5 cm，总

8、分枝数8个，单株结果15个，叶片形状长椭圆形，叶片大小中，叶片颜色浓绿色。荚果斧头形，网纹明显，果嘴微钝，荚果大小中等，粒仁形状三角形，无裂纹，种皮色粉红色, 结果集中。百果重192g ，百仁重80.1g ，公斤果数700个，公斤仁数1493个，出米率74.7%。蛋白质26.2%，粗脂肪52.4%，油酸42.9%，亚油酸36.7%，O/L比值1.17。1.2 申请植物新品种权一项花育28，申请国家新品种保护，申请编号为20070306.4，申请单位山东省花生研究所, 现已通过初步审查。1.3 提供了一批花生新品系参加省或全国区域试验经过2006-2007两年区试，有2个花生品系被选拔出参加省生

9、产试验，有望明年通过审定；另外还提供了8个花生优良品系参加山东省和北方区域试验，其中花生新品系E1油酸亚油酸比值达12.3。1.4 花生种子无损伤测定技术的应用与种质创新多个花生种子无损伤测定技术已建立，利用建立的花生种子无损伤测定技术一对500多份育种中间材料进行分析，包括杂种、F1、F2和较高世代的材料，通过测定较早筛选出符合育种目标的材料；二对通过化学诱变、航天辐照等创造的种质材料进行筛选，获得一批具优质性状的花生新种质，其中高油酸材料3份，高含油量材料2份，高蛋白1份。另外创制超大果1份，高抗根结线虫病2份。2 花生优质高产配套栽培技术的研究主要进行了施肥、土壤水分、遮光、温度等栽培措

10、施对花生生长发育、产量和品质形成、需肥耗水等方面影响的研究，为建立使其花生遗传潜力充分稳定表达的高产优质配套栽培技术提供理论支撑。研究组织培养愈伤组织PEG 胁迫临界浓度，鉴定细胞水平的抗性，与田间鉴定结果对照，建立实验室快速抗旱鉴定筛选的技术平台。建设应用了田间水分试验的栽培池、遮雨棚和控制装置，建立田间抗旱鉴定的技术体系。3 花生组织培养和转基因技术研究分析了高温处理和碳源种类对花药愈伤组织诱导的影响。HY20热激处理（35）1和2天的愈伤组织诱导率分别为88.14%，96.10%, 比对照（0天）分别提高5.95%、13.91%。因此，高温热激有效促进花药愈伤组织的诱导。以花育20 （H

11、Y20）及其F1（HY20YY200）为材料，研究了浓度为10的蔗糖、葡萄糖和麦芽糖等三种碳源对花药愈伤组织诱导的影响。结果表明，麦芽糖的诱导效果最好，其次是蔗糖。3.2 花生种子消毒对组织培养的影响将花生种子分两组进行实验：预处理组为无菌水浸泡7h 后消毒，对照组不浸泡。每组再分三组进行，分别以0.1%HgCl2、2%NaClO和10%H2O 2为消毒剂。具体步骤如下：将种子置于无菌三角瓶中，先浸于75%的酒精60s ，再用消毒剂分别消毒4 min、6 min、8 min、10 min、12 min、15 min，无菌水冲洗34次后, 种于培养基上，每种消毒剂每个时间处理为60粒种子，20天

12、后记录观察结果，计算预处理组和对照组中各消毒剂的平均污染率、平均发芽率以及每种消毒剂每个时间处理的污染率、发芽率。预处理对三种消毒剂消毒效果的影响消毒效果以污染率低而发芽率高为好。由表1可知，在使用三种消毒剂前进行预处理， 0.1%HgCl2的平均污染率没有变化，仍为0，其余两种的平均污染率分别由71.1%、66.1%降为63.9%、65.6%；平均发芽率则是三种消毒剂均有明显下降，0.1%HgCl2由76.7%下降为30.6% 、2%NaClO由7.2%下降为0、10%H2O 2由100%下降为68.3%。预处理虽然使得花生种子的污染减少但发芽率却显著下降，因此选择不做预处理。表1 预处理对

13、三种消毒剂消毒效果的影响 不同消毒剂消毒效果的比较由表2可见，不同消毒剂的消毒效果有较大差异。2%NaClO各消毒时间处理的平均污染率最高而平均发芽率最低，消毒效果最差；10%H2O 2虽然各消毒时间处理的平均发芽率为100%，但其平均污染率也高达66.1%，消毒效果并不理想；0.1%HgCl2各消毒时间处理的平均污染率为0，平均发芽率为76.7%，消毒效果最好。因此选定0.1%HgCl2为最佳消毒剂。表2 不同消毒剂的消毒效果 0.1%HgCl2不同消毒时间处理发芽率的比较由于0.1%HgCl2的污染率为0，因此不同消毒时间的消毒效果只需比较其发芽率，发芽率高为好。由图1可见，消毒4min

14、的花生发芽率最高为100%,消毒6min的花生发芽率为96.7%,之后随着消毒时间的增加，花生的发芽率急剧降低。因此消毒最佳时间为46min 。 图1 0.1%HgCl2不同消毒时间处理后花生种子的发芽率3.3 建立了双价植物表达载体pCAMBIA1301-bkt -CrtR 双价植物表达载体pCAMBIA1301-bkt -CrtR 的检测载体pCAMBIA1301-bkt 用Bgl II 、Bst EII 双酶切后回收的大片段和回收后的CrtR-B 基因片断连接并转化大肠杆菌TOP10，按1.2.1和1.2.2的方法进行扩增，挑选两个基因都检测为阳性的单克隆（图2、图3）。进一步酶切鉴定显

15、示（图4），pCAMBIA1301-bkt -CrtR 经Bam HI 、Sac I 双酶切产生963bp 一条带，经Bgl II 、Bst EII 双酶切产生879bp 一条带, 说明bk 基因和CrtR-B 基因已成功克隆到pCAMBIA1301中。 注：M. marker (DNA/Eco RI+Hind III 1.阳性对照 2. 阴性对照 3-7. pCAMBIA1301-bkt -CrtR图2 表达载体pCAMBIA1301-bkt -CrtR 中bkt 基因的PCR 检测 注：M. marker (DNA/Eco RI+Hind III 1.阳性对照 2. 阴性对照37.pCAM

16、BIA1301-bkt -CrtR图3 表达载体pCAMBIA1301-bkt -CrtR 中CrtR-B 基因的PCR 检测注：M. marker (DNA/Eco RI+Hind III 1.pCAMBIA1301-bkt -CrtR 用Bam HI 、 Sac I双酶切结果2.pCAMBIA1301-bkt -CrtR 用Bgl II 、Bst EII双酶切结果Note: M. marker (DNA/Eco RI+Hind III1.pCAMBIA1301-bkt -CrtR /Bam HI+Sac I2. pCAMBIA1301-bkt -CrtR /Bgl II+Bst EII图4

17、表达载体pCAMBIA1301- bkt -CrtR 的酶切分析3.4 获得了转基因植株100株以上，并进行了遗传性和稳定性检测农杆菌菌株EHA105/pCAMBIA1301-bkt -CrtR 介导转化花生（花育23），用100mg/L卡那霉素筛选共获得再生花生植株35株。以重组质粒pCAMBIA1301-bkt -CrtR 为阳性对照，未转化植株的为阴性对照，各取1LDNA 为模板，分别进行bkt 基因和CrtR-B 基因的PCR 扩增。其中有15株bkt 基因检测为阳性（图5），未检测到仅有CrtR-B 基因的阳性植株，而bkt 基因和CrtR-B 基因检测都为阳性的仅有5株（图6）。获

18、得的5株转基因植株在温室内继续培养，获得转基因种子30粒，海南南繁加代得到转基因种子217粒。利用转基因种子进行了虾青素的提取研究。 注：M. marker (DNA/Eco RI+Hind III 1.阳性对照 2.阴性对照310. 转基因植株图5 转基因植株中bkt 基因的PCR 检测 注：M. marker (DNA/Eco RI+Hind III1. 阳性对照 2. 阴性对照 310. 转基因植株图6 转基因植株中CrtR-B 基因的PCR 检测4 花生功能基因克隆4.1 花生unigene 基因文库构建4.1.1 RNA抽提和纯化：抽提获得total RNA 706ug。分离分别获得

19、mRNA 15.04ug ；4.1.2 取3 ul mRNA 进行RT ；LD-PCR 二链合成循环数为28；蛋白酶K 消化；Sfi I 酶切，产物用100ul 水溶；4.1.3 连接产物1000ul ；4.1.4 取1 ul连接产物转化涂板；4.1.5 菌落单克隆的验证，进行测序4.1.6 根据phred 软件QC10标准，对长度450的测序结果进行载体屏蔽（参数为-minmatch 14 -penalty -2 -minscore 30）后得到插入长度400bp 的有效序列。4.1.7 再采用100bp ，90的原则对这些序列归并unigene ，得到unigene 数为4074条。4.1

20、.8 对获得的unigene 进行读框分析、同源性分析和生物信息学分析，得到各种功能的基因。4.2高油酸花生中12-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与功能分析4.2.1高油酸花生12-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析根据普通花生中获得的12-脂肪酸脱氢酶基因序列（GenBank accession No ：EF186911），设计引物进行RT-PCR ，获得长度约为1200bp 的核苷酸序列，将片段回收后，测序结果显示所扩增得到的片段全长为1141 bp ，核苷酸序列与普通花生中获得的AhFAD2B 序列相比，在起始密码子后第442bp 处有碱基A 的插入（图1），导致编码区提前终止。12-脂肪酸脱氢酶

21、具有3个膜整合酶特异性组氨酸保守区，高油酸花生Ah FAD2B基因编码区缺失了第3个组氨酸保守区(图2 ，这可能会导致高油酸花生中12-脂肪酸脱氢酶的活性减弱或失活。 ahfad2b 1 ATGGGAGCTGGAGGGCGTGTCACTAAGATTGAAGCTCAAAAGAAGCCTCTTTCAAGGGTTCCACATTCAAACCCTC 76ahfad2b' 1 ATGGGAGCTGGAGGGCGTGTCACTAAGATTGAAGCTCAAAAGAAGCCTCTTTCAAGGGTTCCACATTCAAACCCTC 76ahfad2b 77 CATTCAGTGTTGGCCAACTCAA

22、GAAAGCAATTCCACCACATTGCTTTGAACGTTCTCTTTTCATATCATTCTCATA 152ahfad2b' 77 CATTCAGTGTTGGCCAACTCAAGAAAGCAATTCCACCACATTGCTTTGAACGTTCTCTTTTCATATCATTCTCATA 152ahfad2b 153 TGTTGTCTATGATCTCTTAATGGCCTACTTACTCTTCTACATTGCCACCACTTATTTCCACAAGCTTCCATACCCA 228ahfad2b' 153 TGTTGTCTATGATCTCTTAATGGCCTACTTACTCTTC

23、TACATTGCCACCACTTATTTCCACAAGCTTCCATACCCA 228ahfad2b 229 TTTTCCTTCCTTGCTTGGCCAATCTATTGGGCCATCCAAGGCTGCATTCTCACCGGTGTTTGGGTGATTGCTCATG 304ahfad2b' 229 TTTTCCTTCCTTGCTTGGCCAATCTATTGGGCCATCCAAGGCTGCATTCTCACCGGTGTTTGGGTGATTGCTCATG 304ahfad2b 305 AGTGTGGCCACCATGCCTTCAGCAAGTACCAACTTGTTGATGACATGGTTGGTTTG

24、ACCCTTCACTCTTGTCTATT 380ahfad2b' 305 AGTGTGGCCACCATGCCTTCAGCAAGTACCAACTTGTTGATGACATGGTTGGTTTGACCCTTCACTCTTGTCTATT 380ahfad2b 381 AGTTCCTTATTTCTCATGGAAAATCAGCCACCGCCGCCACCACTCCAACACAGGTTCCCTC-GACCGCGACGAAGT 455ahfad2b' 381 AGTTCCTTATTTCTCATGGAAAATCAGCCACCGCCGCCACCACTCCAACACAGGTTCCCTCAGACCGCGA

25、CGAAGT 456ahfad2b 456 GTTTGTCCCGAAACCAAAATCAAAGGTATCATGGTATAACAAGTACATGAACAATCCACCAGGGAGGGCTATTTCC 531ahfad2b' 457 GTTTGTCCCGAAACCAAAATCAAAGGTATCATGGTATAACAAGTACATGAACAATCCACCAGGGAGGGCTATTTCC 532ahfad2b 532 CTTTTCATCACACTCACACTAGGATGGCCCTTGTACTTGGCCTTCAATGTTTCTGGCAGACCCTATGATAGATTTG 607ahfad2b&#

26、39; 533 CTTTTCATCACACTCACACTAGGATGGCCCTTGTACTTGGCCTTCAATGTTTCTGGCAGACCCTATGATAGATTTG 608ahfad2b 608 CAAGCCACTATGACCCTTATGCTCCCATATACTCTAACAGGGAAAGGCTTCTAATTTATGTCTCAGATTCATCTGT 683ahfad2b' 609 CAAGCCACTATGACCCTTATGCTCCCATATACTCTAACAGGGAAAGGCTTCTAATTTATGTCTCAGATTCATCTGT 684ahfad2b 684 CTTTGCTGTAA

27、CATATCTGCTATATCACATAGCAACTTTGAAAGGTTTGGGTTGGGTGGTATGTGTTTATGGGGTG 759ahfad2b' 685 CTTTGCTGTAACATATCTGCTATATCACATAGCAACTTTGAAAGGTTTGGGTTGGGTGGTATGTGTTTATGGGGTG 760ahfad2b 760 CCATTGCTCATTGTGAATGGGTTTCTAGTTACCATAACCTATTTGCAGCACACACATGCATCATTGCCTCACTATG 835ahfad2b' 761 CCATTGCTCATTGTGAATGGGTTTC

28、TAGTTACCATAACCTATTTGCAGCACACACATGCATCATTGCCTCACTATG 836ahfad2b 836 ATTCATCCGAATGGGACTGGTTAAGAGGAGCATTGGCAACAGTGGACAGAGATTATGGGATACTGAATAAGGCATT 911ahfad2b' 837 ATTCATCCGAATGGGACTGGTTAAGAGGAGCATTGGCAACAGTGGACAGAGATTATGGGATACTGAATAAGGCATT 912ahfad2b 912 TCATCATATAACTGATACGCATGTGGCTCATCATTTGTTCTCAA

29、CAATGCCTCATTACCATGCAATGGAAGCAACC 987ahfad2b' 913 TCATCATATAACTGATACGCATGTGGCTCATCATTTGTTCTCAACAATGCCTCATTACCATGCAATGGAAGCAACC 988ahfad2b 988 AATGCAATAAAGCCAATATTGGGTGATTACTACCAATTTGATGGCACCCCAGTTTACAAAGCATTGTGGAGAGAAG 1063 ahfad2b' 989 AATGCAATAAAGCCAATATTGGGTGATTACTACCAATTTGATGGCACCCCAGTTTA

30、CAAAGCATTGTGGAGAGAAG 1064ahfad2b 1064 CCAAAGAGTGCCTCTATGTGGAGCCAGATGATGGAGCTTCTCAGAAGGGTGTTTATTGGTACAAGAACAAGTTCTG 1139ahfad2b' 1065 CCAAAGAGTGCCTCTATGTGGAGCCAGATGATGGAGCTTCTCAGAAGGGTGTTTATTGGTACAAGAACAAGTTCTG 1140ahfad2b 1140 A 1140ahfad2b' 1141 A 1141图1. 高油酸花生与普通花生中12-脂肪酸脱氢酶基因核苷酸序列的比对ahfad

31、2b 1 MGAGGRVTKIEAQKKPLSRVPHSNPPFSVGQLKKAIPPHCFERSLFISFSYVVYDLLMAYLLFYIATTYFHKLPYPFS 78ahfad2b' 1 MGAGGRVTKIEAQKKPLSRVPHSNPPFSVGQLKKAIPPHCFERSLFISFSYVVYDLLMAYLLFYIATTYFHKLPYPFS 78 ahfad2b 157 PKSKVSWYNKYMNNPPGRAISLFITLTLGWPLYLAFNVSGRPYDRFASHYDPYAPIYSNRERLLIYVSDSSVFAVTYL 234ahfad2b' 157 TKIKGI

32、MV 164ahfad2b 235 LYHIATLKGLGWVVCVYGVPLLIVNGFLVTITYLQHTHASLPHYDSSEWDWLRGALATVDRDYGILNKAFHHITDTHV 312ahfad2b' 165 164ahfad2b 313 AHHLFSTMPHYHAMEATNAIKPILGDYYQFDGTPVYKALWREAKECLYVEPDDGASQKGVYWYKNKF 379 ahfad2b' 165 164图2. 高油酸花生与普通花生中12-脂肪酸脱氢酶基因氨基酸序列的比对4.2.2 花生12-脂肪酸脱氢酶基因的表达特性利用半定量RT-PCR 的方法分析了

33、油酸含量不同的花生品种种子中12-脂肪酸脱氢酶基因的表达情况。结果表明，与普通花生相比，高油酸花生中12-脂肪酸脱氢酶基因（AhFAD2B）表达量降低（图3）。 图3. 12-脂肪酸脱氢酶基因在油酸含量不同的花生中的表达Fig 3.4.2.3 表达载体的构建及阳性克隆的鉴定用BamHI 和XhoI 双酶切分别将AhFAD2B 和AhFAD2B基因从克隆载体上切下，回收并与以同样双酶切的质粒pYES2连接，构建得到新的质粒pYFAD2B 和pYFAD2B。挑取阳性克隆，酶切鉴定显示，重组质粒pYFAD2B 和pYFAD2B经BamHI 和XhoI 双酶切产生1140bp 和5900bp 两条片段

34、，表明外源基因片段已经插入表达载体pYES2中（图4）。 4.2.4 花生12-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达及产物分析为了验证花生AhFAD2B 和AhFAD2B 基因的功能，将空载体pYES2以及重组表达质粒pYFAD2B 和pYFAD2B转化到酿酒酵母营养缺陷型INVSc1细胞中，获得转基因酵母工程菌株。在SC-U 培养基上分别挑选到含有pYES2、pYFAD2B 和pYFAD2B的工程菌株，提取各个菌株的RNA ，经RT-PCR 扩增，从含pYFAD2B 和pYFAD2B质粒的工程菌株中扩增出一条约1140bp 的条带，与预期结果相符，说明含有目的基因片段的pYFAD2B 和pYF

35、AD2B重组质粒已经转化到酿酒酵母中。按1.5、1.6和1.7所述方法培养酵母，处理并对脂肪酸成分进行气相色谱分析，发现含pYFAD2B 重组质粒的菌株中积累了C18:29,12(图5C ，而在含pYFAD2B重组质粒以及空载体pYES2的酵母菌株中未检测到(图5A ，5B 。根据波峰面积，可计算出含pYFAD2B 重组质粒的菌株中积累C18:29,12的含量占总脂肪酸的9.8%(图6 。 图6. 酿酒酵母中的脂肪酸成分（%） 图5. 酿酒酵母总脂肪酸成分的气相色谱分析C16:0 ,软脂酸;C16:1,棕榈一烯酸;C18:0,硬脂酸;C18:1, 油酸;C18:2,亚油酸4.3花生PEPC 基

36、因家族克隆根据拟南芥和大豆中的研究，设计简并引物，进行PEPC 基因家族的克隆，已从花生中获得该家族的四个基因：PEPC1,PEPC2和PEPC3，属于植物型;PEPC4，属于细菌型4.3.1 PEPC1:(编码区2906bp TTGAGAAGATGGCTTCAA TTGA TGCTCAGCTGAGGTTGCTGGCACCAAGGAAGGTTTCTGATGATGACAAGCTTGTTGAGTATGATGCTT TGTTGCTTGATCGATTCCTTGACATTCTTCAGGATTTGCATGGTGAAGATATCAGGCAAACGGTTCAAG ATTGTTATGAGCTTTCAGCTGAG

37、TATGAAGGGAAGCATAAGACTGAGAAGTTGGAGGAACTTGGGAAT ATGCTAACTGGTCTTGATGCTGGGGATTCTA TTGTCATTGCCAAATCATTTTCCCACATGCTTAA TTTGG CTAACTTGGCAGAAGAAGTCCAAATTGCCTACCGAAGAAGGATTAAACTATTAAAGAAGGGCGATTTT GCTGATGAGAACCCTGCCA TCACTGAATCTGACATTGAAGAAACCTTCAAGAGGCTTGTGACTGAACT GAAGAAGTCCCCACAGGAAGTGTTTGA TGCCTTGAAGAACC

38、AAACTGTAGATTTGGTCCTAACTGCTC ATCCCACTCAGTCCATTCGTCGATCTCTGCTGCAAAAGCATGGAAGGGTAAGGAACTGTCTGACACAG TTGTATGCAAAAGACATAACACCGGATGATAAGCAGGAACTTGA TGAGGCTCTCCAAAGAGAGATTCA AGCTGCATTTCGCACAGATGAAATTCGAAGGAGTCCTCCGACACCACAAGATGAGATGAGGGCAGGA ATGAGCTACTTTCA TGAGACAATATGGAAAGGTGTACCAAAGTTTTTGCGCCGTGTTGACACAG

39、CTCT GAAGAACATCGGAATAAATGAGCGTGTCCCATACAATGCCCCTCTTATTCAATTCTCTTCTTGGATGGG AGGAGATCGTGA TGGTAACCCTAGGGTAACCCCTGAAGTTACAAGGGATGTGTGTTTGCTGGCTAGAA TGATGGCTGCTAATTTATACTTCTCTCAGATAGAAGATCTCATGTTTGAGCTGTCTATGTGGCGCTGCAA TGATGAGCTTCGTGTTCGTGCTGATGAACTCCATGTGTCCTCAAGGAGAGATGCAAAACATTACA TTGA ATTTTGGAAGCAG

40、ATTCCTCCAAATGAGCCATATCGTGTTATTCTTGGTGATGTGAGGGACAAACTATA CAATACACGCGAACGTGCTCGCCAGTTATTAGCCAATGGAACCTCTGACATCCCCGAAGAGACAACCT TCACAAATGTTGAGCAGTTCCTGGAGCCCCTCGAACTCTGCTATAGATCACTCTGCGCA TGTGGTGACC GACCAATAGCAGATGGTAGCCTTCTTGATTTCTTGCGGCAAGTTTCCACATTTGGACTCTCAATGGTAA GACTCGACATTCGTCAAGAGTCAGACCGGCACA

41、CTGATGTCATGGATGCCATTACCAAACACTTGGAG ATTGGATCATACCGAGAGTGGTCTGAGGAACGCAGGCAGGAATGGCTTCTGTCAGAGCTCAGTGGAA AGCGCCCTCTGTTCGGCCCTGATCTTCCCAAAACAGAAGAGATCGCCGATGTTCTGGAAACCTTCCAT GTCATTGCAGAACTTCCCTCAGACAACTTTGGTGCCTACATAATCTCAATGGCAACAGCACCGTCTGAT GTGCTTGCTGTTGAGCTCTTACAACGGGAATGCCATGTGAAGCAACCGCTAAGGGTT

42、GTGCCATTGTT TGAAAAGCTTGCTGATCTTGAGTCTGCTCCTGCTGCAGTGGCGCGGCTTTTCTCTA TTGATTGGTACAG AAACCGAATCAA TGGGAGGCAAGAAGTTATGATAGGATACTCAGACTCAGGAAAAGATGCCGGTCGTCTTTCTGCGGCTTGGGCGCTGTACAAGGCTCAAGAGGAGCTCATAAAGGTTGCGAAGGATTTCGGTGT TAAGCTGACAA TGTTCCATGGCAGAGGAGGGACTGTTGGAAGAGGAGGCGGCCCCACTCACCTTGCT ATA TTATCTC

43、AGCCACCAGAAACCATTCATGGCTCACTTCGGGTGACAGTTCAAGGTGAAGTTATTGAA CAATCCTTTGGAGAGGAGCACTTGTGCTTTAGAACTCTCCAGCGATTCACTGCTGCTACACTTGAGCA CGGAATGCACCCTCCCGTGTCACCCAAACCGGAATGGCGAGTGCTGCTAGATGAGATGGCTGTCATTG CAACGAAGGAGTATCGCTCCATTGTTTTCCAGGAACCCCGTTTTGTTGAATACTTCCGATGTGCTACCC CTGAGTTGGAGTATGGACGAATGAACATTGGA

44、AGTCGTCCATCAAAGAGAAAGCCGAGTGGAGGAAT CGAATCACTGCGTGCTATTCCATGGATTTTTGCTTGGACACAAACAAGGTTTCA TTTGCCAGTGTGGCT TGGCTTTGGTTCTGCATTTAAGCATGCAATTGAGAAGGATCCAAAGAATCTCCTAATGCTTCAGGATAT GTACAACCAGTGGCCTTTCTTCAGGGTCACCCTGGACTTGATCGAGATGGTGTTCGCCAAGGGAGACC CGGGGATCGCTTCCCTGTACGACAAACTCCTAGTGTCAGAAGAGCTGTTGCCAT

45、TCGGAGAGCGCTTG AGGACTAAATATGAAGAAACCAAGAGTTTTCTCCTTAAGGTTGCTGGGCACAGGGATCTTCTTGAAGG TGACCCCTACTTGAAGCAAAGGCTTCGTCTCCGCGATTCATACATCACAACCCTGAATGTGTTACAAGC CTACACGTTGAAGAGAATCCGCGACCCCGACTACCATGTCAAGTTGAGGCCACATTTGTCAAAGGAAT TCATGGAATCAAACAAGCCAGCTGCAGAACTTGTTAAACTCAACCCAAAAAGTGAGTATGCTCCTGGT TTGGAGGA

46、CACACTTA TGAAAAAAATTGGCATTTTTTTTTTGGTTATGTCAGTGGATATGTAAACATTGTATAACCTATTCTATGAT GTCTGCTGPEPC1基因表达谱E16 E11 HY23 L14 HGSPI056 不同品种花生脂肪含量 PEPC1酶活性变化趋势 4.3.2 PEPC2:（编码区2901BP ） ACTTCTACTTGCTCCATTTCTCTCTCCTTCTCACCCATTCTAAATTCTCATCATCGTTTTCTTCTTATTTCTCCCTCTTCTGACAACTTTAT CAGCTGGTTCCGGCAAAAGTGAGCGAAGATGAC

47、AAACTGATTGAGTATGATGCTCTGCTATTGGATCGCTTCCTTGATATTCTTCAGGACTT ACACGGAGAGGATCTGAAAGAAACGGTTCAAGAAGTATACGAGCTTTCTGCTGAATATGAAGGGAAACACGACTCTAAGAAACTGGACGAAC TTGGAAATCTGATAACTAGTTTGGATGCTGGTGATTCAATTGTCGTCGCCAAATCCTTTTCTCATATGCTTAACTTGGCCAACTTAGCAGAA GAGGTCCAGATTGCTCATCGGCGAAGGATCAAGTTGAAAAAGGGAGATTTTGCT

48、GATGAGAACAATGCAACTACTGAATCAGACATTGAAGA AACACTCAAGAAGCTTGTAGTGGAATTAAAAAAGTCTCCTCAGGAAGTTTTTGAAGCACTGAAAAACCAGACCGTTGATTTGGTTCTTACAG CTCACCCTACTCAATCTGTTCGTAGATCTTTGCTTCAGAAGCATGGAAGGATACGAAACTGTTTAACTCAATTATATGCCAAAGATGTAACT CCTGATGACAAGCAGGAACTTGATGAGGCTCTACAGAGGGAGATCCAAGCTGCCTTCCGTACTGATGAGATTAGG

49、AGGACTCCTCCAACCCC GCAAGATGAGATGAGAGCAGGGATGAGCTACTTCCATGAGACAATTTGGACTGGTGTACCCAAATTTCTACGTCGGCTCGATACAGCTTTGA AGAATATAGGGATAAATGAACGTGTCCCTTATAATGCTCCTCTTATTCAATTTTCTTCTTGGATGGGTGGTGATCGTGATGGCAATCCAAGA GTAACTCCTGAAGTGACAAGGGATGTTTGTTTATTGGCCAGAATGATGGCTGCTAATTTATATTATTCCCAGATAGAGGATCTTATGTTTGA ACT

50、GTCAATGTGGCGTTGCAATGATGAGCTGCGTGTACGTGCAGATGAACTTAACAGGTCTTCCAGAAAAGATGCAGTTGCAAAGCACTATA TAGAGTTTTGGAAAATCATTCCCCCAAATGAACCATACCGTGTGTTACTGGGTGAAGTAAGGGATAGGCTTTATCAGACTCGTGAGCGATCT CGTCATTTGCTAGCACACGGGCACTCTGAAATTCCAGAGGAAGAAACTTTTACCAATGTTGAGGAGTTCTTGGAACCCCTGGAACTTTGCTA TAGATCACTCTGTGCTTGTGGTGA

51、TCGGGCAATTGCTGATGGAAGCCTTCTAGATTTCCTTCGGCAAGTATCTACTTTTGGATTGTCACTAG TGAGGCTTGATATCAGGCAAGAGTCAGACCGTCATACTGATGTGTTGGACGCCATTACCAAGCATCTGGAAATTGGTTCCTACCAGGAATGG TCAGAAGAGAAACGGCAGCAATGGCTTTTGTCTGAATTAAGTGGCAAACGGCCACTGTTTGGGCGCGACCTTCCCAAAACTGAAGAAATTAA AGATGTTTTGGACACATTTCATGTTATTGCTGAACTGCCAGCAGA

52、TAACTTTGGAGCATATATCATATCAATGGCAACTGCACCATCTGATG TGCTTGCAGTTGAACTTCTGCAACGTGAATGCCATGTCAAGCATCCACTAAGAGTTGTCCCATTGTTTGAGAAACTTGCAGATCTGGAGGCA GCTCCTGCTGCTTTGGCTCGGTTGTTCTCCGTAGAATGGTACAGAAACCGAATCAACGGAAAGCAAGAAGTTACGATTGGTTATTCTGATTC AGGTAAAGATGCTGGAAGGTTCTCTGCAGCATGGCAGCTATATAAGGCCCAAGAGGAACTTATCAA

53、GGTAGCTAAAGAGTATGGTGTTAAGC TAACAATGTTCCATGGTCGCGGTGGAACTGTTGGGAGAGGAGGTGGTCCGACCCGCCTTGCTATCTTATCCCAACCTCCGGATACAATCCAT GGGTCACTTCGTGTAACTGTCCAAGGTGAAGTTATTGAACAATCATTTGGAGAGCAGCACTTATGTTTCCGAACACTTCAACGTTACACTGC TGCAACTCTAGAACATGGAATGCATCCTCCAATCTCACCCAAACCAGAGTGGCGGGCTTTGATGGATCAGATGGCTGTCATTGCTAC

54、AGAGG AATACCGCTCTATTGTATTCAAAGAACCTCGATTTGTTGAGTACTTCCGTCTGGCTACTCCAGAGTTGGAGTATGGCCGCATGAACATAGGA AGTCGACCAGCAAAGCGAAAACCAAGTGGAGGCATTGAGACTCTCCGTGCAATACCTTGGATATTTGCCTGGACACAAACAAGGTTTCATCT TCCGGTGTGGCTAGGCTTCGGGGAAGCATTTAGACATGTTATTGGGAAGGATATTAAGAATCTTCATATGCTGCAAGAAATGTACAATCAAT GGCCTTTCTTCAGGG

55、TCACTCTTGATTTAGTGGAAATGGTGTTTGCCAAGGGAGACCCTGGCATAGCTGCCCTGTATGATAAGCTCCTTGTT TCACAAGATCTATGGTCGTTTGGGGAGCAGTTGAGGACCAAGTTTGACGAAACCAAGAAACTCCTGCTTCAGGTGTGTGGACACAGAGATCT TCTTGAAGGGGATCCATACTTAAAACAAAGGCTCCGCTTGCGTGATTCTTACATTACCACCCTTAACGTTTGCCAAGCTTATACATTGAAAC GTATCCGTGATCCGAACTATAACGTGAGTTTGCGAC

56、CGCACATCTCAAAAGAGTATATAGAGATAAGTAAACCTGCTGATGAACTTATAACA GTTATTTCC4.3.3 PEPC3:（已获得2822BP ） ACGCAAGGTGTCTGATGA TGATAAGCTTGTTGAATACGATGCTTTGTTGTTGGATCGATTCCTTGACATT CTTCAGGATTTGCA TGGACCTGATA TCAGAGAAACCGTTCAAGACTGCTATGAGCTGTCAGCAGAGTA CGAAGGGGAGAATGATCCTCACAAATTGGAGGAACTTGGGAACA TGCTGACTGGTCTTGATGCTG

57、GG GACTCTATTGTTGTGGCCAAATCA TTTTCTCACATGCTTAATTTGGCTAACTTGGCAGAAGAAGTTCAA ATCGCCTACCGAAGAAGGATCAAGCTGTTGAAGAAAGGCGATTTTGTGGATGAGAACTCTGCCATCAC TGAGTCAGATTTAGAAGAGACCTTCAAGAGGCTTGTGAATCAAATGAATAAGACCCCTCAAGAAGTCT TTGA TGCTTTGAAGAACCAGACTGTAGATTTGGTCCTAACTGCTCATCCAACTCAGTCTGTTCGTAGAT CTTTGTTGCAAAAGCAT

58、GGCAGGATAAGGAATTGTTTGACACAGTTGTATGCTAAAGACATAACACCA GATGACAGACAGGAACTTGATGAGGCTTTACAAAGAGAGATTCAAGCTGCATTTCGTACGGATGAAAT TCGAAGGACCCCTCCTACACCACAAGATGAAATGAGGGCCGGAATGAGCTACTTCCATGAGACGA TCT GGAAAGGTATACCAAAATTTTTGCGCCGAGTTGACACTGCTCTGAAGAACA TTGGTATAAATGAACGT GTCCCATA TAGTGCTCCGGTTATTCAGTTCTCTTCTTGGATGGGAGGAGATCGTGACGGAAACCCGAGG GTAACTCCTGAAGTTACAAGGGATGTATGTTTGCTGGCTAGAATGATGGCTGCTAATTTGTACTTTTCTC AGATTGAGGATCTCATGTTTGAGTTGTCAATGTGGCGCTGCAGTGATGAGCTTCGTGTTCACGTCGATG AACTCCTTAGGTCCTCAAAGAGTGATGCAAAACACTATATTGAGTTCTGGAAACAAGTTCCTCCAAAT GAGCCCTATCGTGTTATTCTTGGTGATGTGAG