RP-HPLC法同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌的含量

1、RP-HPLC法同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌的含量         11-05-12 09:18:00     作者：崔岚 安富荣 夏玲红    编辑：studa20【摘要】  ：目的 建立同时测定舒肝祛脂胶囊中4种大黄蒽醌类成分大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的高效液相色谱方法。方法 采用反相高效液相色谱法,Diamonsil C18色谱柱(5 m,4.6 mm×150 mm),流动相：甲醇-0.1%磷

2、酸溶液(7723),检测波长：254 nm,柱温：30 ,流速：1.0 mL/min,进样量20 L。结果 线性范围分别为：大黄酸0.083 22.08 g/mL、大黄素0.100 82.52 g/mL、大黄酚0.291 27.28 g/mL和大黄素甲醚0.0882.20 g/mL。平均加样回收率分别为：大黄酸97.3%、大黄素96.9%、大黄酚96.5%和大黄素甲醚95.9%。结论 本方法灵敏,重现性好,适合于舒肝祛脂胶囊中这4种蒽醌含量的分析。 【关键词】  大黄酸大黄素大黄酚大黄素甲醚舒肝祛脂胶囊反相高效液相色谱法    Abstract：Obje

3、ctive To establish a RP-HPLC method for simultaneous quantitative determination of 4 anthraquinones in Shugan Quzhi capsules. Methods A RP-HPLC method was used with a Diamonsil C18 column (5 m, 4.6 mm×150 mm). The mobile phase was composed of methanol and 0.1% H3PO4 water solution (7723, v/v).

4、The wavelength of UV detector was 254 nm and column temperature was 30 . Flow rate was 1.0 mL/min and 20 L was injected every time. Results The linear ranges of rhein, emodin, chrysophanol and physcion were 0.083 22.08, 0.100 82.52, 0.291 27.28 and 0.0882.20 g/mL, respectively. Their average recover

5、ies were 97.3%, 96.9%, 96.5% and 95.9%, respectively. Conclusion This method was sensitive, repeatable and suitable to determine the contents of 4 anthraquinones in Shugan Quzhi capsules.    Key words：rhein；emodin；chrysophanol；physcion；Shugan Quzhi capsule；RP-HPLC   

6、60; 舒肝祛脂胶囊是由柴胡、郁金、三七、大黄和黄芩等十几味中药制成的医院复方制剂,具有疏肝解郁、行气活血、化除痰湿、清热燥湿等功能,可用于治疗脂肪肝气血郁滞、痰湿互阻、湿热内蕴之证。该制剂在临床使用多年,疗效确切。本研究建立了同时测定舒肝祛脂胶囊中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚4种大黄主要蒽醌类成分的高效液相色谱法,为改进和提高舒肝祛脂胶囊的质量标准提供了方法学基础。1  仪器与药品   高效液相色谱仪(美国Waters,2487双波长紫外检测器,510型高压双泵)；CQ-250型超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂)；BS224S型电子分析天平(北京赛多利

7、斯仪器系统有限公司)。舒肝祛脂胶囊(本院自制,批号060801,061001, 061201)；大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为0757-200206、110756- 200110、110796-200514、110758-200509)。所用流动相甲醇为色谱纯；磷酸、盐酸、三氯甲烷和提取用甲醇为分析纯；水为重蒸水。2  方法与结果2.1  色谱条件    色谱柱：Diamonsil C18(5 m,4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(7723),流速：1.0 mL

8、/min；柱温：30 ；检测波长：254 nm,进样量：20 L。在本试验条件下,大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚与杂质完全分离,色谱图见图1。2.2  标准曲线的制备    精密称取大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品,用少量三氯甲烷溶解后用甲醇定容至50 mL,制成浓度分别为大黄酸26 g/mL、大黄素28 g/mL、大黄酚56 g/mL和大黄素甲醚11 g/mL的对照品贮备液。分别精密量取上述对照品贮备液4.0、4.5、6.5、10 mL,用甲醇定容至50 mL,制成浓度分别为大黄酸2.08 g/mL,大黄素2.52 g/mL、大黄酚7.28

9、 g/mL和大黄素甲醚2.20 g/mL的混合对照品贮备液。精密吸取混合对照品贮备液0.4、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0、10.0 mL,用甲醇定容至10 mL,取20 L注入色谱仪,以色谱峰面积为纵坐标,浓度(g/mL)为横坐标,绘制标准曲线,结果见表1表1  4种成分的线性关系和回归方程（略）2.3  样品溶液的制备    精密称取舒肝祛脂胶囊内容物约0.36 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定重量,加热回流1 h,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,挥去溶剂,加8%盐酸溶液10 mL,超

10、声处理2 min,再加三氯甲烷10 mL,加热回流1 h,放冷,置分液漏斗中,用少量三氯甲烷洗涤容器,并入分液漏斗中,分取三氯甲烷层,酸液再用三氯甲烷提取3次,每次10 mL,合并三氯甲烷液,减压回收溶剂至干,残渣加10 mL甲醇使溶解,滤过,取续滤液即得样品溶液。按照样品生产工艺条件制备不含大黄的阴性样品,同法制成阴性样品溶液。     11-05-12 09:18:00     作者：崔岚 安富荣 夏玲红    编辑：studa202.4  精密度试验 

11、;   精密吸取混合对照品溶液20 L,重复进样5次,记录峰面积,计算RSD,分别为大黄酸1.84%、大黄素1.01%、大黄酚0.97%和大黄素甲醚1.51%。2.5  稳定性试验    照“样品溶液的制备”项下方法配制样品(批号061201),分别于0、1、2、3、4 h进样20 L,记录峰面积,计算RSD,分别为大黄酸1.29%、大黄素1.54%、大黄酚0.43%和大黄素甲醚1.39%,表明样品至少在4 h内稳定。2.6  重现性试验    照“样品溶液的制备”项下方法配制样品(批号0612

12、01)5份,取20 L进样,计算含量,分别为大黄酸83.5 g/mg、大黄素65.7 g/mg、大黄酚209.2 g/mg和大黄素甲醚45.3 g/mg,RSD分别为1.75%、1.66%、2.42%和4.06%。2.7  加样回收率试验    称取样品(批号061201)约0.36 g,共5份,精密加入大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量,照样品溶液的制备项下方法配制,取20 L进样,计算回收率,结果见表2。表2  加样回收率试验结果(略) 2.8  样品测定    取3批样品(批号分

13、别为060801、061001、061201),照“样品溶液的制备”项下方法配制,平行5份,取20 L进样,计算含量,结果见表3。表3  样品中4种大黄蒽醌含量测定结果(略)3  讨论    舒肝祛脂胶囊处方中大黄为主药,而蒽醌类成分为其主要有效成分,包括游离蒽醌和结合蒽醌,它们具有利胆退黄、保肝护肝的作用,所以测定蒽醌类成分含量是该制剂质量控制的重要内容之一。目前测定蒽醌类成分含量的文献报道很多1-2,但尚未见舒肝祛脂胶囊中多种蒽醌类成分同时测定的文献报道。常见的大黄蒽醌类含量测定方法为HPLC法,本实验参考了2005版中华人民共和国药典3大黄药材含量测定项下的色谱条件,通过调节两相的比例,得到分离度好、出峰时间适宜的流动相条件。由于其采用水提醇沉工艺,故在本制剂中,游离蒽醌含量很少,在测定前需进行水解。本实验采用了2005版中华人民共和国药典3大黄药材含量测定项下的提取方法,由于提取步骤比较多,而且在提取过程中需加酸、加热,可能会使蒽醌类物质发生降解或转化,因而导致重现性和回收率