强心灵丸中人参皂苷Rg1 和Re含量的高效液相色谱研究

1、强心灵丸中人参皂苷Rg1 和Re含量的高效液相色谱研究    【关键词】  人参皂苷Rg1摘要: 目的: HPLC法测定强心灵丸中人参皂苷Rg l和Re的含量。 方法: ODS-C18 （钻石）色谱柱（250mm×4.6mm，5m）;流动相:乙腈-0.2%磷酸（2080）;检测波长:203nm。 结果: 该法可测定有参皂苷Rg1 和Re的含量，其分别在1.2457.400mg及2.16813.008mg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9998和r=0.9998，平均回收率分别为98.50%和99.12%，RSD分别为1.50%

2、和0.65%。 结论: 该方法方便、准确可靠、重现性好，可作为强心灵丸中人参皂苷Rg1 和Re含量的含量测定方法。关键词: 人参皂苷Rg1 ; 人参皂苷Re; 强心灵; 高效液相色谱法FU Dong-nin， LI X iang-yongAbstract: Objective:To establish a method to determine Ginsenoside Rgl and Re in Qiangxinling pill by HPLC.Methods:ODS-C18 （diamond）column（250mm×4.6mm，5m）was used and CH3CN-0.2

3、%（v/v）H3 PO4 （2080）as mobile phase.The flow rate was1.0ml/min and the wavelength was203nm.Results:The quantities of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re can be determined with the method，which have quite good linearity within the scope of1.2457.400mg and2.16813.008mg respectively（r=0.9998and r=0.9998）

4、，the average recover rate are98.50%and99.12%，RSD are1.50%and0.65%.Conclusion:The method is simple，accurate，good repeatbility，which can be used as the method to determine the quantity of gimsenoside Rg1 and qinsenoside Re in QiangXinLing pill.Key words:强心灵丸是连云港市中医院制剂室的协定处方，临床使用已有20余年，由人参、泽泻、猪苓等10味药组成

5、，具有补气培元、回阳救逆、活血化瘀、利水渗湿之功效，用于冠心病，高血压心脏病，肺心病等引起的心慌、气促、胸闷、头晕，疲乏无力、下肢水肿、心力衰竭、心肌炎等。强心灵原质量标准中只采用薄层色谱法对人参、泽泻进行鉴别，无含量测定项，为了使强心灵丸的质量进一步提高，我们用准确度、精密度更高的高效液相色谱法对人参皂苷Rgl 和Re进行含量测定。以乙腈和0.2%磷酸作为流动相，测定波长203nm。人参皂苷Rg1 和Re分离较好。该方法简便、快速、准确，可以作为强心灵丸的含量测定方法。1 仪器与试剂安捷伦高效液相色谱仪（Agilent1100）（G1311A四元递度泵，VWD-1314A型紫外可见检测器，安

6、捷伦工作站）;ODS-C18 （钻石）色谱柱（250mm×4.6mm，5m）;水为重蒸水，乙腈为色谱纯，所用其他试剂均为分析纯。人参皂苷Rg1 和Re对照品购于中国药品生物制品检定所（批号0703-200120，110754-200320）。强心灵丸（030106，030911，031015）均为本院制剂室提供。2 实验方法2.1 色谱条件流动相为乙腈-0.2%磷酸（2080）;流速1ml/min;柱温35;检测波长203nm 1 ;进样量10l。 2.2 对照品、供试品和阴性供试品溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备分别精密称取人参皂苷Rg1 及Re对照品5.03，5.10mg置

7、10ml量瓶中，加甲醇溶解并释稀至刻度，摇匀，作为人参皂苷Rg1 及Re的对照品溶液。2.2.2 供试品溶液的制备取本品约0.6g，精密称定，置100ml锥形瓶中，加水50ml，超声提取30min，放冷，滤过，滤液用水饱和正丁醇提取3次，30ml/次，合并正丁醇提取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至50ml，摇匀，用0.45m的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.2.3 阴性供试品溶液的制备取阴性供试品（除人参外的其余药材制成的阴性供试品），按供试品溶液制备方法制备阴性供试品溶液。2.3 色谱行为将人参皂苷Rg1 及Re对照品溶液混合，进样，2个峰分离较好;取强心灵丸供试品溶液进

8、样，人参皂苷Rg1 及Re分离良好。阴性供试品溶液成分对人参中Rg1 及Re的含量测定无干扰。2.4 线性关系考察分别精密称取人参皂苷Rg1 及Re对照品12.45，10.84mg，加甲醇超声溶解，定容于10，5ml作为标准贮备液;再精密吸取人参皂苷Rg1 及Re标准储备液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2ml分别置2ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别得到系列浓度的标准品溶液。分别精密吸取上述标准品溶液各10l，注入液相色谱仪，记录色谱图，由溶液浓度（X）作为横坐标对峰面积（Y）作为纵坐标，作线性回归方程分别为Y=157942.6，X-8666.5，r=0.9998;Y=11

9、0863.6，X-5342.9，r=0.9998。线性范围分别为1.2457.400g，2.16813.008g。2.5 精密度实验精密吸取上述对照品溶液10l，重复进样5次，记录峰面积，计算，人参皂苷Rg   1 及Re的RSD分别为0.75%及0.84%，表明精密度良好。2.6 稳定性实验取同一批号（030106）样品适量，制成供试品溶液，分别于0，1，3，5，7，12，24h进样，10l/次，记录峰面积，结果Rg1 及Re的RSD分别为0.90%及0.87%，表明供试品在24h内质量稳定。2.7 重复性实验取同批样品（n=5），按照含量测定方法进行测定，记录色谱图，测

10、得人参皂苷Rg1 及Re平均含量分别为2.24%及4.27%，人参皂苷Rg1 及Re的RSD分别为0.74%及0.84%，表明该方法重复性较好。2.8 回收率实验取已知含量的供试品（批号:030106，人参皂苷Rg1 及Re含量分别为2.24%和4.27%）0.3g，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rg1 及Re的对照品溶液（Rg1 对照品溶液的浓度为3.5mg/ml，Re对照品溶液的浓度为6.5mg/ml）各1.6，2.0，2.4ml，再按正文含量测定项下的方法进行操作。结果见表1。表1 回收率实验结果（略）2.9 样品含量测定精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10l，进样，记录色谱图，按外标法计算供试品中Rg1 及Re的含量。结果见表2。 表2 样品含量测定结果  %批号 人参皂苷Rg（略）3 讨论本试验曾用乙酸乙酯、乙醇、水饱和正丁醇、正丁醇和氯仿提取。结果表明以水饱和正丁醇萃取最好。取同批号样品3份，分别用水饱和正丁醇萃取1，2，3，4次。结果表明，3次即可萃取完