不同产地车前草中总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量测定

1、不同产地车前草中总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量测定DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.09.ContentDeterminationofPhenylethanoidGlycosidesandActeosideinPlantagoHerbafromDifferentProducingAreasYIMan1，FENGChuan-hua1，TANGXiao-lin2，XULan1，TAOXiao-xuan1，ZHANGLang1，LIGang1(1.No.94HospitalofPLA，Nanchang330002，China；2.ChildrenHospitalofJi

2、angxiProvince，Nanchang330006，China)：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofphenylethanoidglycosideandacteosideinPlantagoHerba.MethodsUV-visiblespectrophotometricmethodwasusedforthedeterminationofthecontentofphenylethanoidglycosidescompoundsinPlantagoHerba.HPLCmethodwasusedforthedeterminationof

3、acteosideinPlantagoHerba.ChromatographiccolumnwithC18ODS2(4.6mmx150mm,5?m)wasused.Acetonitrile-0.1%formicacid(13：87)wasasmobilephase；theflowratewas1mL/min；thedetectionwavelengthwas332nm；thecolumntemperaturewas30；thesamplevolumewas10?L.ResultsThecontentsofphenylethanoidglycosideinPlantagoHerbafromdif

4、ferentproducingareaswereamong1.03%?C3.47%.Acteosidewithpeakareaoverthe0.0062?C1.55mgrangeshowedagoodlinearrelationship；thesamplerecoveryratewas98.9%，andtheRSDwas1.6%.ThecontentsofacteosideinPlantagoHerbafromdifferentproducingareaswasamong0.18%?C0.56%.ConclusionThemethodissimple，stableandreproducible

5、，whichcanbeusedforthedeterminationofphenylethanoidglycosideandacteosideinPlantagoHerbafromdifferentproducingareasandprovideexperimentalbasisforqualitycontrolofPlantagoHerba.车前草为车前科植物车前PlantagoasiaticaL.或平车前PlantagodepressaWilld.的干燥全草，具有清热利尿通淋、凉血、解毒等功效，主要用于热淋涩痛、水肿尿少、暑湿泄泻、痰热咳嗽、吐血衄血、痈肿疮毒1。车前草中含有多种化学成分，

6、如黄酮类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类、三萜类等2-3。苯乙醇苷类是车前草中极具代表性的化学成分，具有抗菌、抗炎、基金项目：2015年度军区医学科技创新课题项目（15MS083）通讯作者：封传华，E-mail：fengch1986126抗氧化等药理活性。毛蕊花糖苷是车前草中含量较高的苯乙醇苷类成分之一，具有降低尿酸、抗高血压、增强免疫力等作用4-5。不同产地车前草中苯乙醇苷类及毛蕊花糖苷的含量存在较大的差异。本研究建立紫外-可见分光光度法测定车前草中苯乙醇甘类成分含量及HPLCM定车前草中毛蕊花糖甘含量的方法，为车前草的质量评价及深度开发提供依据。1仪器与试药岛津高效液相色谱仪（包括CTO±

7、;温箱、SIL-10AF自动进样器、LC-15C泵、SPD-15C紫外检测器），UV-765紫外可见分光光度计（上海军科），AUW120型分析天平（岛津公司），？热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），KQ3200EB声波清洗器（昆山市超声仪器XX公司），DFT-50手提式高速万能粉碎机（温岭市林大机械XX公司）。毛蕊花糖甘（成都普菲德生物技术XX公司，批号150401,纯度>98%）；不同产地车前草，均购自江西樟树中药材市场，经江西中医药大学？小兰教授鉴定为车前PlantagoasiaticaL.的干燥全草；乙腈（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂，批号201510011）;甲酸（分析纯，西

8、陇化工XX公司，1012051）;甲醇（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造XX公司，20130320）;水为超纯水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1 总苯乙醇苷含量测定2.1.1 对照品溶液制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置于25mL量瓶中，加甲醇适量溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.31mg/mL的毛蕊花糖苷对照品溶液。2.1.2 供试品溶液制备取车前草粉末（过2号筛）约1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60狮酉?50mL,称定质量，超声处理(功率250W频率40kHz)30min,放冷，再称定质量，用60%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，即得。2.1.3 检测波长的选择取

9、毛蕊花糖苷对照品溶液及供试品溶液，于190800nm波长范围内测定各溶液的紫外吸收，结果显示两者的紫外吸收图谱相似，且在波长为332nm处均有最大吸收，故选择332nm作为车前草中总苯乙醇昔含量测定的波长。2.1.4 标准曲线绘制精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5mL分别置于10mL量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，同时以相应的溶剂作空白，于332nm波长处测定各对照品溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=41.982X-0.2213，r=0.9995(n=3)。结果表明，毛蕊花糖甘质量浓度在0.0031-0.155mg/

10、mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。2.1.5 样品含量测定取车前草样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定。每份样品平行测定3次，计算总苯乙醇苷含量。2.2 毛蕊花糖苷含量测定2.2.1 色谱条件采用迪马ODS2C1的谱柱(150mrm<4.6mm5?m),流动相为乙睛-0.1%甲酸(15：85),流速1mL/min,检测波长332nm,柱温30C,进样量10?L。理论板数按毛蕊花糖苷计算应不低于3000。色谱图见图1。AB注：A.对照品；B.供试品（江西高安）；1.毛蕊花糖苷图1车前草中毛蕊花糖音HPLC图2.2.2标准曲线绘制分别精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液0.02、

11、0.05、0.2、0.5、1、2、5mL置10mL量瓶中，力口甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。精密吸取各对照品溶液10?L注入高效液相色谱仪，测定。以质量浓度对峰面积绘制标准曲线，得回归方程Y=1000000X-5832.2，r=0.9991。结果表明，毛蕊花糖昔在0.00621.55mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.2.3 精密度试验取同一对照品溶液，连续进样6次，进样量均为10?L，按上述色谱条件进行测定，结果毛蕊花糖苷峰面积RSD=1.76%表明精密度良好，符合含量测定的基本要求。2.2.4 稳定性试验取同一供试品溶液，于0、2、4、6、8、12、24h精密吸取10?L注入高效液相色谱

12、仪，按上述色谱条件进行测定，结果毛蕊花糖昔峰面积RSD=1.89%表明供试品溶液在24h内基本稳定。2.2.5 重复性试验取同一批样品粉末（过2号筛），按供试品溶液制备方法平行制备6份溶液，分别精密吸取10?L注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算毛蕊花糖苷峰面积RSD=1.52%结果表明，本方法重复性较好。2.2.6 加样回收率试验取同一批已知毛蕊花糖苷含量的样2号筛），精密称取6份，分别加入毛蕊花糖苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取10?L注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。2.2.7 样品含量测定取车前草样品，精密称定，按“2.

13、1.2”项下方法制备供试品溶液，取续滤液进样，根据已建立的色谱条件测定毛蕊花糖苷的峰面积，代入线性回归方程，计算车前草中毛蕊花糖苷含量。2.3样品测定结果取12个不同产地的车前草，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述方法和色谱条件分别测定总苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量，结果见表2。3讨论在建立苯乙醇苷类含量测定方法过程中，本研究考察了溶剂种类、乙醇浓度、pH值、提取时间、提取次数、溶剂体积多个因素对提取效果的影响6-8，并选取影响提取效果较大的4个因素（乙醇浓度、pH值、提取时间和提取溶剂体积）进行正交试验，确定了车前草中苯乙醇苷类的提取方法，同时进行了多批次验证试验，结果表明该方法比较稳定，可用于车前草中苯乙醇苷类的提取。毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷在多个波长下均有吸收，通过比较，最终选择332nm为检测波长，在此波长下，杂峰对这2种成分含量测定的干扰最小9-10。同时，在考察毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的提取方法过程中，比较了甲醇、乙醇、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇6种不同的提取溶剂，对比了回流提取、超声提取和静置提