丹参酮ⅡA对鼠脑缺血再灌注损伤凋亡基因表达的影响

1、丹参酮A对鼠脑缺血再灌注损伤凋亡基因表达的影响【摘要】 目的探讨丹参酮A（Tan A）对脑缺血再灌注损伤大鼠B细胞淋巴瘤/白血病基因?2（Bcl?2）及B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x（Bax）蛋白表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan A低剂量治疗组和Tan A高剂量治疗组。线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Tan A高、低剂量治疗组分别于术前连续灌胃给予相应剂量Tan A 3 d，1次/d。除假手术组外的各组于脑缺血90 min再灌注24 h，进行HE染色观察病理形态学变化和神经症状评分，免疫组化法观察大鼠额顶部皮质Bcl-2和Bax蛋白表达。结果Tan A高、低剂

2、量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组，Tan A高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。Tan A高、低剂量治疗组神经功能缺失评分较缺血再灌注组降低（P0.05）。与假手术组比较，缺血再灌注组Bcl-2和Bax表达增加， Bcl-2 /Bax比值下降（P0.05）。与缺血再灌注组比较，Tan A高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达、减少Bax表达，上调Bcl-2 /Bax比值，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。结论Tan A对缺血再灌注脑损伤具有保护作用，其机制可能与通过增加Bcl-2表达，减少Bax表达，上调Bcl-2 /Bax比值抗凋亡有关。 【关键词】

3、缺血再灌注； B细胞淋巴瘤/白血病基因?2； B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x； 丹参酮AAbstract：ObjectiveTo study the effect of Tanshinone A (Tan A) on expression of Bcl-2 and Bax of cerebral ischemia reperfusion（I/R）injury in rats. MethodsIn this experiment, rats were randomly divided into 4 groups, which were sham operated group, I/R gro

4、up,low dose Tan A treated group and high dose Tan A treated group. The focal middle cerebral artery occlusion(MCAO) model was made by suture-occluded method.Rats were pretreated with Tan A ,ig for 3 d,respectively before MCAO.After 90min MCAO following 24 h of reperfusion, HE staining and the neurol

5、ogical score were investigated . Expression of Bcl-2 and Bax were also investigated with immunohistochemistry. ResultsThe changes of ischemic impairment in low and high dose Tan A treated groups were lighter than in IR group,and was lighter in high dose Tan A treated group than in low dose Tan A tre

6、ated group. Compared with IR group, the neurological score was decreased in low and high dose Tan A treated group (all P0.05). Compared with sham operated group ,expression of Bcl-2 and Bax increased at 24h of reperfusion in the ischemic territory(P0.05);and the ratio of Bcl-2 /Bax was decreased .Co

7、mpared with I/R group, low and high dose Tan A treated group increased expression of Bcl-2 and reduced expression of Bax dose-dependently (P0.05）。表1 TAN A对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分的影响（略）与假手术组比较，*P0.05；与缺血再灌注组比较，P0.05；n=53.2 TAN A对脑组织病理学改变的影响假手术组脑组织切片可见神经细胞、胶质细胞及毛细血管形态正常，结构完整，锥体细胞核大而圆，核仁明显（见图1）。缺血再灌注组呈缺血改变，梗死

8、区正常组织结构消失，结构不清，间质水肿，有炎细胞浸润；锥体细胞体积缩小，细胞核固缩深染，胞浆嗜伊红。部分细胞坏死，并可见呈筛状坏死的坏死灶（见图2）。Tan A不同剂量治疗组脑组织缺血改变较缺血再灌注组明显减轻，坏死范围缩小，细胞结构较完整，细胞核固缩少，细胞间质水肿轻，高剂量组与低剂量组之间比较，缺血改变更轻。图1 假手术组大鼠脑组织HE染色（200）（略）图2 缺血再灌注组大鼠再灌注24h脑组织HE染色（200）（略） 3.3 TAN A对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响结果见表2。假手术组Bcl-2和Bax少量表达。缺血再灌注组Bcl-2和Bax阳性细胞表达增多，Bcl-2阳性细胞形态较

9、饱满，Bax阳性细胞部分呈条索状，表达部位主要分布于缺血半暗带的额顶皮质，Bcl-2 /Bax比值较假手术组下降，差异有统计学意义(P0.05)（见图34）。与缺血再灌注组比较，TAN A高、低剂量治疗组的BCL-2阳性细胞增加，Bax阳性细胞下降，Bcl-2 /Bax比值较缺血再灌注组升高 (P0.05)，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。表2 TAN A对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2 和Bax的影响（略）与假手术组比较，*P0.05；与缺血再灌注组比较，P0.05; 与TAN A低剂量治疗组比较，P 1时, 对细胞凋亡起抑制作用, 细胞趋于存活; 当Bcl-2/Bax 1时

10、, 对细胞凋亡起促进作用, 细胞趋于死亡6，7，本研究中，缺血再灌注组Bcl-2和Bax阳性细胞表达增多，部位主要分布于缺血半暗带的额顶皮质，且Bcl-2 /Bax比值下降且 1，这表明Tan A 可通过增加Bcl-2表达，降低Bax表达，增加Bcl-2与Bax结合成异源二聚体量可发挥抗凋亡作用，抑制了缺血后细胞凋亡的发展, 延缓或阻止缺血区域尤其是周边区神经细胞的死亡进程, 在一定程度上挽救了受损的神经细胞, 从而防止最终梗死灶的扩大，对缺血再灌注脑损伤起到一定的保护作用，并且高剂量Tan A的保护效果更显著。【参考文献】 1 曲友直，高国栋，胡佩珍，等. 丹参、黄芪对脑缺血再灌后BCL -

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12、anisms in cerebral ischemia: Bcl-2 family p roteins and protection of mitochondrial functionJ. Cell Calcium, 2004, 36：303.5 GrahamSH,ChenJ,Clark1RS1Bcl-2family gene products in cerebralIschemia and traumatic brain injuryJ.J Neurotrauma,2000,17：831.6 Isenmann S, Stoll G, SchroeterM, et al. Differential regulation of Bax, Bcl-2, and Bcl-X proteins in focal cortial ischemia in the ratJ. Brain Pathol, 1998, 8：49.7 Schabitz WR, Sommer C