乳腺癌组织中微淋巴管分布及密度的临床病理意义

1、乳腺癌组织中微淋巴管分布及密度的临床病理意义               作者：张宇 宋吉宁 周为 黎卫平 马岚   【摘要】  目的 探讨乳腺癌组织中微淋巴管分布、密度及其与相关临床病理因素之间的关系, 分析乳腺癌淋巴结转移的可能机制。方法 应用免疫组化SABC法检测50例乳腺癌及其相应癌旁正常乳腺组织中D2-40的表达，并分别计数其微淋巴管密度（microlymphatic density，MLD）。结果 乳腺癌组织中的M

2、LD明显高于癌旁正常组织(P<0.01)，且肿瘤不同区域中MLD有所差异，肿瘤边缘区MLD均值显著高于癌旁正常组织及肿瘤中心区均值(P<0.01)；肿瘤中心区MLD与正常组织MLD无显著性差异(P>0.05)；肿瘤边缘区MLD与乳腺癌的临床分期、淋巴结转移状态相关(P<0.01)，与年龄、肿瘤大小、组织分型及雌、孕激素受体状态无关(P>0.05)。结论 1)乳腺癌组织中存在淋巴管，且分布存在异质性，淋巴管主要分布于肿瘤边缘区，肿瘤边缘区MLD与淋巴结转移、临床分期状态相关，其MLD的增加可能与乳腺癌的侵袭及转移相关；2)乳腺癌组织中的MLD检测可作为评估乳腺癌淋巴

3、结转移状况的一项辅助指标，为判断乳腺癌患者预后及确定临床治疗方案提供实验和理论依据。 【关键词】  乳腺癌 D2-40 MLD 淋巴结转移 免疫组织化学    Abstract  Objective  To investigate the characteristics of distribution and density of lymphatic vessel and the correlation with its clinicopathological factors in breast cancer and analyse

4、the possible  mechanism of lymph node metastasis in breast carcinoma. Methods  Making use of immunohistochemistry to research the expression of D2-40 in 50 cases of breast carcinoma and the normal tissues near the tumor borderline,which microlymphatic density was counted. Results  The

5、 MLD in breast carcinoma was significant higher than that in the normal tissue adjacent  carcinoma(P<0.01) and it was not the same in different aeras of  carcinoma .The MLD in tumor borderline was higher than that in the normal tissues and tumor center tissues (P<0.01)and There was n

6、o correlation in the tumor center and the normal tissue (P>0.05). The MLD in the borderline had positive relation to the clinical stage, and lymph node metastasis (P<0.01), but it had no significant difference from age,tumor diameter,histologic types , progestoger and estrogen receptor conditi

7、on (P>0.05). Conclusions 1. The lymphatic vessel appears in the breast carcinoma. It mainly distributes in the tumor borderline. The MLD in the tumor borderline has correlation with clinical stage ,lymph node metastasis. The increase of MLD may be related to the invasion and metastasis of breast

8、carcinoma in the tumor borderline.2. The detection of MLD in the tissue of breast carcinoma can be a important affiliated markers to evaluate the lymph node metastasis. It also can measure the prognosis of breast carcinoma and provide experimental and theoretical foundation to confirm the clinical t

9、reatment methods.    Key words  Breast carcinoma  D2-40  Microlymphatic density  Lymph node metastasis  Immunohistochemistry    肿瘤细胞经淋巴道转移是人体上皮源性恶性肿瘤的早期扩散主要途径之一。但由于缺乏淋巴管特异性标记物，对肿瘤淋巴管转移的研究相对滞后。肿瘤内是否存在淋巴管，肿瘤内淋巴管生成是否与淋巴道扩散转移有关？目前对此存在争议1,2。乳腺癌局部淋巴结转

10、移十分常见，是影响预后的关键因素之一，一旦出现淋巴结转移，其患者生存率明显降低。为此本实验选取50例乳腺癌及其相应癌旁正常乳腺组织标本，应用免疫组化SABC法采用新近发现的淋巴管特异性标记物D2-40抗体，对乳腺癌和癌旁正常乳腺组织淋巴管进行染色标记，并计数其微淋巴管密度（microlymphatic density，MLD），以此来探讨乳腺癌组织中的MLD特点及其与乳腺癌相关病理因素间的关系，并探讨MLD与淋巴结转移的关系和可能的机制，为乳腺癌的临床治疗及预后判断提供一定的理论依据。    1  材料与方法    1.1&

11、#160; 标本    收集青海大学附属医院病理科2004年11月2005年10月手术切除的乳腺癌及相应癌旁正常组织石蜡包埋标本50例。患者均为女性病例，年龄3372岁，平均545岁，其中<50岁者27例，50岁者23例；根据2003年WHO制定的乳腺癌病理学分类标准进行病理组织学分类和TNM分期：浸润型导管癌35例，导管内癌13例，小叶原位癌2例；肿瘤2 cm者24例，>2 cm者26例；伴有淋巴结转移者27例，无淋巴结转移者23例；期者28例，期者22例。所有病例术前均未接受放疗和化疗。所有标本经10福尔马林液固定后制成切片（4 m），切片贴于多聚

12、赖氨酸处理过的玻片上。每个蜡块切片5张，然后行常规HE染色及免疫组织化学SABC法染色。    1.2  试剂    即用型鼠抗人D2-40单克隆抗体(产品编号为ZM-0465)购自北京中杉金桥生物工程有限公司。即用型鼠抗人ER单克隆抗体(产品编号为MAB-0062)、即用型兔抗人PR单克隆抗体(产品编号为RMA-0502)、即用型鼠抗人C-erbB-2单克隆抗体(产品编号为MAB-0198)均购自福州迈新生物技术开发有限公司。SABC试剂盒、DAB显色试剂盒及PBS缓冲液结晶、柠檬酸修复液结晶均为Maixin-bio公司产

13、品，购自武汉博士德生物工程有限公司。    1.3  免疫组织化学染色方法    采用SABC 法，并设阳性、阴性对照。    1.4  结果判定方法    ER、PR为胞核着色，C-erbB-2为胞膜/胞浆着色。免疫组化染色结果判定参照邢传平等3相关文献：以低倍镜和高倍镜分别观察切片，阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰，细胞浆或细胞核有棕黄色颗粒沉着，染色明显高于背景者。根据细胞百分率及染色深浅分级：1)阳性细胞百分率：无细胞显色为0分；<25的细胞显

14、色为1分；2550的细胞显色为2分；>50的细胞显色为3分。2)显色深浅不一或显色不清为0分；浅黄色为1分；棕黄色为2分；深褐色为3分。综和评分：01分为阴性(-)；23分为弱阳性(+)；45分为中度阳性(+)；>5分为强阳性(+)。ER、PR、C-erbB-2的免疫组化染色结果判定均参照以上标准。 本课题在进行数据处理时将+、 +、+合并为阳性(+)作统计分析。    1.5  统计学处理    采用 SPSS11.0统计软件对数据进行统计学处理。所有计量数据均以均数±标准差（x±S）表示，

15、显著性检验采用单因素方差分析或t检验。检验水准以P<0.05为具有显著性差异；P<0.01为具有非常显著性差异。    2  结果    2.1  乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中D2-40的表达    D2-40阳性染色仅定位于淋巴管内皮细胞胞膜和胞浆，呈棕黄色颗粒状(见图1)。癌旁正常乳腺组织中D2-40阳性染色淋巴管多呈扩张状，形态不规则，壁薄，管壁无平滑肌，管腔内偶见淋巴细胞，也可见呈闭锁的条索状或几个内皮细胞构成的细胞簇，甚至单个内皮细胞。乳腺癌组织内可见明确的D2-4

16、0阳性淋巴管(见图23)，也有部分乳腺癌组织内淋巴管相当稀疏甚至完全缺乏。乳腺癌组织中淋巴管数目和分布具有明显的异质性，表现为：数目的差异：肿瘤边缘区中微淋巴管数最多(见图4)，MLD均值为56.4±13.5，肿瘤中心区MLD均值为13.2±7.2，肿瘤边缘区与肿瘤中心区MLD均值间差异有统计学意义（P<0.01）；形态的差异：肿瘤边缘区可以见到较多管腔扩张的淋巴管，而肿瘤中心区多为闭锁的条索状(见图5)。50例乳腺癌总的MLD均值为34.5±7.5，其相应癌旁正常乳腺组织MLD均值为15.0±7.8，两组MLD均值间差异有统计学意义（P<0.01），肿瘤边缘区MLD均值与癌旁正常乳腺组织差异有统计学意义（P<0.01），但肿瘤中心区MLD均值与癌旁正常组织差异无统计学意义（P>0.05），见表 1。表1癌旁正常乳腺、乳腺癌组织中淋巴管密度测定比较    2.2  乳腺癌MLD与乳腺癌临床病理因素间的关系    50 例乳腺癌总的MLD与各临床病理因素间差异无统计学意义，乳腺癌不同区域的 MLD与各临床病理因素间差异有统计学意义，其中乳腺癌边缘区MLD与淋巴结转移、临床分期状态密切相关，伴淋巴结转移组，其肿瘤边缘区MLD与是否存在淋巴