木贼乙醇提取物中皮素HPLC法含量测定的研究

1、    木贼乙醇提取物中?皮素HPLC法 含量测定的研究         摘要本文用反相高效液相色谱法测定木贼乙醇提取物中树解皮素的含量。采用Zorbax-C18柱，流动相为0.4%磷酸-甲醇(11)，检测波长254nm。样品经甲醇超声波提取，10%硫酸-甲醇(11)水解，定容后进样。用树解皮素作对照外标两点法定量，线性范围0.25g，相关系数r为0.9993，平均回收率为98.1%。关键词木贼乙醇提取物树解皮素高效液相色谱法中国书分类号R285.5Determin

2、ation of Quercetin in Extraction ofEquisetum Hiemale L. by HPLCGao Hancheng,etal(Xianning Blood Bank.Hubei Xianning,437000)Abstract:A HPLC methold has been developed for the determination of Quercetin in Ethanol Extract of Equisetum hiemale L.Quercetin was separated completely on a zorbax-C18 column

3、,4.6mm×250mm,using a mixture of methanol,water and phosphoric acid (100:99.60.4) as mobile phase,with UV detection at 254 nm.A good linear relationship of standard (quercetin) was found in the range of 0.2Key words：High pressure liquid chromatography Quercetin Ethanol extract of Equisetum hiema

4、le L.木贼系木贼科植物Equisetum hiemale L.的干燥地上部分，属常用中药1。近20年来的临床、药理和化学研究表明，木贼除具有“散风热，退目翳”等传统功效外，其乙醇提取物还显示出较明显的降压作用，其降压作用的有效成分为?皮素和山萘酚的二糖黄酮甙类化合物25。为了对木贼所含黄酮类降压有效成分进行更深入的研究，我们采用高效液相色谱仪测定本省产木贼乙醇提取物中?皮素含量的方法，木贼乙醇提取物用10%硫酸-甲醇(11)水解后，再用?皮素对照品对其酸水解液中?皮素进行外标两点法测定含量，由于本方法为样品酸水解定容直接进样测定，故较为简单、快速和准确，可作为木贼黄酮有效部位提取及质量标准

5、方法学研究的重要参考依据。1仪器与试剂LC-4A高效液相色谱仪，SPD-2AS紫外检测器，C-R2AX色谱数据处理机(以上均为日本岛津制作所产品)，超声波清洗仪(上海船舶设备研究所)。?皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供，081-9304)，木贼乙醇提取物(自制)。甲醇，硫酸，磷酸(均为分析纯)，水为重蒸水。2色谱条件67Zorbax-C18(10)不绣钢柱(4.6mm×250mm)；流动相为0.4%磷酸-甲醇(11）；流速1.0ml/min；标温32°C；检测波长254nm；10l进样，分离效果如1、2。      &

6、#160;  1?皮素对照品色谱         2样品色谱3供试液的制备3.1?皮素对照品溶液取?皮素对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。3.2供试品溶液取木贼乙醇提取物约0.2g，精密称定，置50ml烧瓶中，加入10ml甲醇，超声处理20分钟，再加入10%硫酸10ml，摇匀，水浴回流2小时，冷却至室温，水解液转移至25ml容量瓶中，用甲醇洗涤烧瓶两次(2，2ml)，一并转移至25ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。4标准曲线的制备分别吸取?皮素对照品

7、溶液2l、5l、10l、20l、30l、40l、50l，按二项下方法进样测定，测定结果及回归方程见表1，3。表1线性测定进样量2l5l10l20l30l40l50l峰面积积分值17364109862118038291684006650082回归方程Y=-651.412+998.897xr=0.9993         3标准曲线测定结果显示，?皮素在0.25g范围内呈良好线性关系。宜用外标两点法测定含量。5重现性考查按三项2所述方法，取同一批一定量的木贼乙醇提取物，精密称定，制成供试品溶液，按二项下的条件进样测定，

8、进样量10l，共测5份，测定结果见表2。表2重现性考查样品重(mg)210.4211.0210.0209.6209.0含量(%)0.1830.1880.1910.1970.184RSD=2.7%     6回收率测定采用加样回收率实验，取同一批已知含量的木贼乙醇提取物，精密称定，分别添加一定量的?皮素对照品，按三项2下方法及二项下条件制备出供试品溶液并测定，共测5份，测定结果见表3。 表3回收率测定编号样品重量(mg)原样含量(mg)对照品加量(mg)实测量(mg)回收率%均值(%)RSD(%)1105.30.1990.1950.38898.598.11

9、.582105.50.1990.1950.396100.53105.10.1920.1950.38298.74104.80.1970.1950.37996.45104.50.1980.1950.38096.7     7稳定性试验取供试品溶液10l，按三项2下方法及二项下条件，每隔一段时间测定1次，共测5次，测定结果如表4。 表4稳定性测定时间(min)0306090120崎面积积分值33583489329133763197     测定结果显示，本测定方法在120分钟内稳定。 8样品测定按三项2下方法及二项下条件

10、，分别测定3批样品，每次进样10l，按外标两点法计算含量，测定结果如表5。表5样品测定批号取样量(mg)?皮素量(mg)含量(%)平均含量(%)1210.20.3760.1790.180210.30.3820.1822210.00.3780.1800.178210.30.3600.1753209.80.3800.1810.179210.00.3720.177     三批样品?皮素含量RSD为1.33% 9讨论样品的HPLC谱中显示在21分钟左右还有一个单峰存在，经用银杏提取物的酸水解液进行对照测定，结果与银杏提取物中的异鼠李素的Rf值一致，提示本省产木贼中可能含有异鼠