高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊三七的含量

1、高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊三七的含量杨丽(包头中药有限责任公司 包头 014040)摘要：冠心丹参胶囊为国家中药保护品种, 由丹参、三七、降香油三味组成，具有活血化瘀，理气止痛的药理作用，临床用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷刺痛、心悸气短；冠心病心绞痛见上述证候者。冠心丹参胶囊对冠心病病情轻度及中度者疗效较好，且安全、可靠，无毒副作用。原质量标准只有丹参一项含量测定，为更好地控制产品质量，保证产品的疗效，作者建立了专属性好的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1高效液相色谱法同时测定含量的方法，适用于本制剂的质量控制。1仪器与试药.仪器 L-2000高效液相色谱系统（日立公司）,电子

2、天平(BP211D)药品 冠心丹参胶囊批号：060516，060622，060625，060626；对照品：三七皂苷R1（110745-200312）、人参皂苷Rg1（110703-200424）和人参皂苷Rb1（110704-200420）、购自中国药品生物制品检定所。其他试剂均为色谱纯、分析纯。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验仪器 固定相 BDS C18柱（250×4.6mm，5µm） 流动相 A相：50%乙腈，B相：水；按如下程序梯度洗脱：时间（min）012110111A45457245B55552855对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参

3、皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.4mg、人参皂苷Rb1 0.4mg、三七皂苷R1 0.2mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细（过四号筛），取约1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，放置过夜，置80水浴上保持微沸2小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。阴性溶液的制备 取不加三七药材的本品,同法制成阴性对照溶液.作者简介:杨丽 女从事中药研发工作 大学本科 学士学位 TelEmail:nmgbtyangli.163分别精密吸取10µ

4、;l，注入液相色谱仪，测定，阴性无干扰，色谱图见图1。对照猫画虎样品阴性图12.2线性关系考察配制含三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品各约0.2mg/ml，0.4mg/ml和0.4mg/ml的甲醇溶液，摇匀，精密量取2、8、12、16、20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对进样量回归得标准曲线，结果见表2表4。表2 三七皂苷R1 HPLC法测定结果进样量m（µg）0.2480.9921.4881.9842.48峰面积A（µv.s）96320640453436290067834148310610014结果，三七皂苷R1在0.2482.48&

5、#181;g范围内，峰面积与进样量线性关系良好, r = 0.9998。表3 人参皂苷Rg1 HPLC法测定结果进样量m（µg）0.7322.9284.3925.8567.32峰面积A（µv.s）99730343338276723682902472511529960由表中数据可见，当进样量为0.7327.32µg范围内时，峰面积与进样量线性关系良好,r = 0.9998。表4 人参皂苷Rb1 HPLC法测定结果进样量m（µg）0.8423.3685.0526.7368.842峰面积A（µv.s）2773371363140212315928921

6、573702300由表中数据可见，当进样量为0.8428.842µg范围内时，峰面积与进样量线性关系良好,r=0.9996。2.3精密度试验取含量测定项下对照品溶液，连续测定5次，记录色谱图，计算平均值及相对标准偏差，结果见表5。表5 精密度试验结果进样序号三七皂苷R1人参皂苷Rg1人参皂苷Rb111811135596000555030202184687259652915567180318855645927758550349241895274598363155030635188933459205685510184618915285936354549443218699515948934

7、5513562RSD（%）1.810.410.492.4稳定性试验取含量测定项下对照品溶液在8小时内连续进样5次，记录峰面积，结果见表6。表6 稳定性试验结果时间（h）三七皂苷R1人参皂苷Rg1人参皂苷Rb101282317445218540910902129192344120374157922412901744461713413204061232249448032740670568123752544683784139860126683844549284117594RSD（%）2.080.520.81由表中结果可知，样品溶液在8小时内稳定。2.5重复性试验取一批样品（060516），取样5次，

8、按含量测定项下方法测定，计算含量，并求RSD%。结果见表7。表7 重复性试验结果 序号三七皂苷R1（mg/g）人参皂苷Rg1（mg/g）人参皂苷Rb1（mg/g）14.05716.49715.65324.04716.75715.64334.07016.39315.40744.03016.46015.69054.02715.69015.7474.04616.35915.628RSD（%）0.452.440.832.6回收率试验精密称取本品细粉500mg（批号：060516，含量：三七皂苷R1为4.046mg/g、人参皂苷Rg1为16.359mg/g、人参皂苷Rb1为15.628mg/g）五份，配

9、制三七皂苷R1 1mg/ml、人参皂苷Rg12mg/ml、人参皂苷Rb12mg/ml对照品储备液，精密吸取2ml加入样品溶液中，照含量测定项下方法依法测定，以测得量和加入量计算回收率。结果见表8-10。 表8 三七皂苷R1回收率试验结果测序称样量（g）原有量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）10.49612.0071.8883.88699.5220.49522.0041.8883.954103.2830.49391.9981.8883.916101.5940.49201.9911.8883.946103.5550.49682.0101.8883.940102.22平均回收率为10

10、2.03%，RSD%为1.58%表9 人参皂苷Rg1回收率试验结果测序称样量（g）原有量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）10.49618.1166.77814.89199.9620.49528.1016.77814.920100.6030.49398.0806.77815.053102.8840.49208.0496.77815.082103.7650.49688.1276.77815.013101.59平均回收率为101.758%，RSD%为1.54%表10 人参皂苷Rb1回收率试验结果测序称样量（g）原有量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）10.49617.7

11、536.97414.62398.5120.49527.7396.97414.892102.5730.49397.7196.97414.804101.5940.49207.6896.97414.848102.6550.49687.7646.97414.66698.97平均回收率101.758%，RSD%为1.37%2.7含量限度的确定表11 三批样品含量测定试验结果批号060622060625060626三七皂苷R1(mg/粒)1.2501.3841.393人参皂苷Rg1(mg/粒)4.9545.1654.928人参皂苷Rb1(mg/粒)3.9134.2564.010总量(mg/粒)10.11710.80510.331根据三批样品含量测定结果，每粒以300mg计,将本品含量限度确定为：每粒中含