晚期非小细胞肺癌患者血清酸性谷胱甘肽S转移酶的表达及临床意义(1)

1、晚期非小细胞肺癌患者血清酸性谷胱甘肽S转移酶的表达及临床意义(1)    【摘要】  目的 通过测定非小细胞肺癌（Nonsmall cell lung cancer，NSCLC）患者血清中酸性谷胱甘肽S转移酶（GST）的含量，探讨GST在临床的应用价值。方法 应用ELISA法检测46例NSCLC， 19例肺良性病变者（Benign lung diseases，BLD）及60例健康人血清GST含量，对46例NSCLC患者行诺维本加顺铂方案化疗两周期并判断疗效。结果 非小细胞肺癌患者血清中GST含量明显高于肺良性病变者（P<0.05）及健康对

2、照者（P<0.05）。以正常对照组(±2s，166.14ng/ml）为正常上限，NSCLC患者阳性率为54.34%，明显高于肺良性病变组36.84%（P<0.05）及正常对照组3.33%（P<0.05）。血清GST含量在鳞癌中的阳性表达率为57.14%，腺癌为52.00%，两者间的差别无统计学意义（P0.05）。血清GST表达与NSCLC组织学类型、分期、性别无关（P>0.05）。46例接受了以顺铂为基础的化疗的NSCLC中，19例对化疗有效，总有效率41.30%。其中25例GST表达阳性的NSCLC患者中5例对含铂方案化疗有效，有效率20%。21例GST表达

3、阴性的NSCLC患者中14例对含铂方案化疗有效，有效率66.67%。两组间化疗效果的差别有统计学意义（P<0.05）。结论 血清GST可作为NSCLC的肿瘤标志物，血清GST表达与NSCLC组织学类型、分期、性别无关。NSCLC患者血清中GST的表达阳性者对含铂化疗方案的敏感性低于GST的表达阴性者。GST的含量是一个有价值的可预测患者对含铂化疗方案的敏感性的指标。 【关键词】  非小细胞肺癌；血清；谷胱甘肽S转移酶Expression of  the Serum GST Level in Patients with Advanced NSCLC and Its

4、60; Clinical  SignificanceHAN    Zhigang,    SHAN   Li,   LIU ChunlingDepartment  of  chemotherapy, Affiliated   Tumor Hospital, Xingjiang,Wulumuqi 830011,ChinaAbstract：Objective   To detect the expression of serum

5、glutathione Stransferase （GST） level in patients with NSCLC,and to investigate its clinical significance.Methods  GST levels in serum of 46 patients with NSCLC, 19 patients with benign lung diseases and 60 health subjects were detected with ELISA. Fortysix NSCLC patients were given 2 cycles of

6、NVB+DDP chemotherapy and clinical response was  evaluated.Results  The mean serum GST level was significantly higher in patients with NSCLC than in those with benign lung disease and health subjects (P<0.05). Twentyfive of 46 patients with NSCLC (54.34%) showed elevated serum GST levels

7、 above a cutoff value of 166.14ng/ml (mean+two standard deviations in 60 healthy control subjects). The positive rate was significantly higher in patients with NSCLC than in those with benign lung disease 36.84% and heavy subjects  3.33%(P<0.05).The positive rate of serum GST were 57.14% in

8、squamous cell carcinoma and 52.00% in adenocarcinoma（P0.05）. No correlation was observed between the GST level and stage, sex, pathohistology. Of the 46 patients treated with NVB+DDP chemotherapy, 19 patients responded to chemotherapy (overall response rate, 41.30%). For the 25 patients with positiv

9、e GST expression, 5 patients responded to chemotherapy, response rate was 20%. In the 21 patients with negative  GST expression, 14 patients responded to chemotherapy, respone rate was 66.67%. This difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion  The serum GST level may be

10、a valuable tumor marker for NSCLC, There was no correlation between expression of serum GST and stage, sex, pathohistology. The response rate of NSCLC patients with GSTnegative expression was higher than those with GSTpositive. GST  may be a useful predictor of chemotherapy response.Key words：N

11、onsmall cell lung cancer; Serum; Glutathione Stransfera0  引言    在肺癌中，非小细胞肺癌对化疗的敏感性不如小细胞肺癌，两种类型肺癌对化疗敏感性的不同其中一个重要的差异就是谷胱甘肽S转移酶基因表达的差异。 因而，近几年GST介导的多药耐药越来越引起人们的重视。GST在非小细胞肺癌的组织及血清中均有表达，目前关于GST在组织中表达的研究较多，但血液学检测标本获取方便，检测方法简单易行。本文希望通过研究非小细胞肺癌患者血清GST的含量及其对化疗效果的影响以探讨GST在临床的应用。1  资料

12、与方法1.1  研究对象    选取我院2004年3月2005年7月化疗二科收住的初诊肺癌并经病理证实的住院病人（34例为组织学证实,12例为细胞学证实）。其中非小细胞肺癌46例（其中腺癌25例，鳞癌21例；III期15例，IV期31例），男33例，女13例。年龄3378岁，中位年龄62岁。肺良性病变患者19例(肺结核7例,炎性假瘤4例,肺部感染8例)，中位年龄61岁。健康成人对照组60例，中位年龄57岁。上述肺癌患者在化疗前均行头、胸部及肝肾(肾上腺)CT、胸部X片，全身骨扫描检查。1.2  血清GST测定   

13、 化疗前抽取空腹静脉血3ml，颠倒混匀，然后28孵育1530min，1800转速离心10min，吸取血清于-20冰箱保存。实验试剂盒由北京岳泰生物制品有限公司提供，采用ELISA法检测。试剂盒中有高值、低值质控血清。严格按试剂盒说明进行试验。1.3  治疗措施    46例非小细胞肺癌患者给予诺维本加顺铂（NP）化疗方案：盖诺（国产诺维本，连云港豪森制药有限公司生产）25mg/m2，静推，第1、8天，顺铂（齐鲁制药厂生产） 30mg/m2静滴，第1、2、3天，3周为一周期。上述方案给予常规止吐，水化治疗。以上病例用相同方案化疗至少两周期,于第2周期化疗结

14、束后4周进行疗效评价。1.4  疗效评价标准    采用WHO通用的实体瘤评价方法分为完全缓解（CR），部分缓解（PR）， 稳定（SD），进展（PD）。1.5  统计分析    采用SPSS11.0统计软件，采用t检验，检验水准=0.05。2  结果2.1  血清GST含量测定结果    血清GST含量测定结果，非小细胞肺癌患者血清GST含量（320.71±286.66）ng/ml，明显高于肺良性病变患组（174.3±142.24）ng/ml（t

15、=2.13，P<0.05）及正常对照组（91.37±36.71）ng/ml（t=4.32,P<0.05）。以正常对照组（±2s，166.14ng/ml）为正常上限，非小细胞肺癌患者阳性率为54.34%，明显高于正常对照组3.33%（P<0.05）及肺良性病变组36.84%（P<0.05）。非小细胞肺癌中血清GST含量在鳞癌中的阳性表达率为57.14%、腺癌为52.00%，两者间的差别无统计学意义（P0.05)，见表1。表1  血清GST含量测定结果（略）46例非小细胞肺癌患者中，血清GST表达阳性组与阴性组在性别、病理类型及TNM分期上的差

16、别无统计学意义（P>0.05）,见表2。表2  血清GST表达与性别、病理类型、TNM分期的关系（略）2.2  化疗效果与GST表达、病理类型、 TNM分期的关系  见表3。  表3  化疗效果与GST表达、病理类型、 TNM分期的关系（略）3  讨论3.1  GST在非小细胞肺癌的表达    谷胱甘肽S转移酶（GSTs）是一组具有解毒和结合蛋白功能的同工酶，与癌症的发生发展及抗药性有密切关系。根据其不同等电点可分为（碱性）、（中性），（酸性）。其中酸性谷胱甘肽S转移酶（GST）

17、是一种具有高度敏感性和广泛反应性的酶类，主要分布在于消化道、呼吸道、肾脏，胎盘和胎儿肝脏中。GSTs特别是GST在多种肿瘤细胞和组织中高度表达。GST在肺癌组织中的表达首次由Eimoto等 3于1988年报道，该研究结果表明在所研究的肺鳞癌及腺癌组织中GST表达高于小细胞肺癌。非小细胞肺癌血清中GST阳性率高于小细胞肺癌和正常人，但低于组织中GST阳性率。GST表达与肺癌TNM分期，病理类型无关而与分化程度有关4。本研究中，46例非小细胞肺癌患者血清GST阳性率为54.34%，明显高于正常组的3.33%及肺良性病变组的36.84%。其中，鳞癌57.14%、腺癌52.00%。但两者间的差别无统计

18、学意义（P>0.05）。说明GST表达与非小细胞的病理类型无关，而且血清GST的表达与患者性别、分期也无关（P>0.05）。有资料显示GST表达与非小细胞肺癌分化程度有一定关系，高分化者阳性率高于低分化者，即细胞分化程度越高，GST表达也高，GST在较接近正常分化的肺癌组织中表达高于明显异常的肺癌组织3。由于本研究中有些病例的诊断为细胞病理学诊断，无法判断肿瘤的分化程度，故研究过程中未做GST表达与肿瘤分化程度关系的研究。    目前认为GST含量增高与转录水平mRNA表达增高有关，GST受基因控制，当致癌物作用于机体细胞引起细胞变异时，同时诱导GST

19、基因表达，故GST的表达在肿瘤发生启始阶段就已决定，而与病变进展无关，与分期无关，这表明GST可作为早期癌变的标志酶。3.2  GST与非小细胞肺癌的耐药性    目前临床肺癌的化疗多以顺铂为基础的联合化疗。顺铂在肺癌的化疗中一直被认为是最有效、最具活性的抗癌药物之一，是肺癌联合化疗中的核心成份。诺维本（国产诺维本商品名为盖诺）为第三代长春碱类抗肿瘤药物。1974年由法国学者Potiere半合成，是抗有丝分裂的细胞周期特异性药物。诺维本加顺铂（NP）方案是国际推荐的治疗晚期非小细胞肺癌的一线方案之一。 1     

20、 electroretinography，F-ERG）检查，男30例，女23例；年龄2158（平均37.6）岁；右眼33只，左眼40只。按照10岁为一年龄组分成4组：2029岁，20眼；3039岁，22眼；4049岁，19眼；5060岁，12眼。裸眼或矫正视力均1.0，屈光度在+1.00 -2.00之间，经裂隙灯和检眼镜检查，无屈光间质和眼底病变，无全身性疾病。    1.2方法 应用法国Metrovision 公司生产的Vision Monitor 视觉诱发系统，该仪器包括4个主要的组成部分：刺激器、放大器、计算机和打印机。刺激条件：选用高亮度、高分辨

21、率、高刷新率的50cm彩色光电刺激器。屏幕最大亮度为300cd/m2，最小亮度<0.001cd/m2，对比度为99%。以中央红点为固视点，同时配有红外摄像系统，以监视眼球的固视情况。使用的电极包括记录电极（角膜接触电极）、参考电极（盘状电极）和地电极（盘状电极）。分别置于双眼角膜，双眼外眦外2cm 处和鼻根上5cm处。检测前充分散瞳,同时暗适应30min，检测时受试者取端坐位，面对刺激屏，用地卡因表面麻醉角膜后，将角膜接触电极置于双眼角膜,参考电极置于双眼外眦外2cm处，地电极置于鼻根上5cm 处。暗适应下,分别在25dB弱光刺激下检测视杆细胞反应，在0dB强光下检测眼的最大反应和震荡电

22、位（oscillatory potentials， OPs），明适应下，在白色标准光刺激下检测视锥细胞反应,在30Hz白色标准闪烁光刺激下检测视锥细胞对快速重复刺激的闪烁光反应。    统计学处理：将原始数据输入SPSS12.0软件，应用统计学进行频数分布分析和配对t检验。    2结果    用Vision Monitor 系统测试典型的F-ERG波形由一个负向a波和一个正向b波组成，OPs是叠加在F-ERG的b波上的小波，包括3个主要的波峰OP1、OP2、OP3后面常伴有第4个相似的峰OP4，a波潜伏

23、期是由闪光时刻到波峰的时间，a 波振幅的测量是从基线到a波波谷；b波潜伏期是由闪光时刻到波峰的时间，b波振幅是由a波波谷到b波波峰；在30Hz白色标准闪烁光刺激下闪烁光反应F-ERG波形在最初的60ms内的几个反应是重叠在第一个F-ERG的b波上，以后的反应呈现与闪光频率一致的准正弦波，在记录a波和b波振幅时舍弃最初几个反应波，记录稳定后的振幅；OPs的总振幅是3个主要的波峰OP1，OP2，OP3波谷到波峰的和。在暗适应25dB弱光刺激时F-ERG波形a波的反应不明显，其后是一个缓慢上升的b波，没有次成分OPs（图1）；在暗适应0dB强光下的反应F-ERG波形由一个负向a波和一个正向b波组成，

24、b波的上升支还可看到被称为OPs的次成分（图2）；震荡电位包括3个主要的波峰OP1，OP2，OP3后面常伴有第4个相似的峰OP4（图3）；在明适应白色标准闪光刺激下的反应F-ERG波形表现为较短潜伏期的a，b波，尖锐的波形和较小的振幅（图4）；在30Hz白色标准闪烁光刺激下闪烁光反应F-ERG波形在最初的60ms内的几个反应是重叠在第1个F-ERG的b波上，以后的反应呈现与闪光频率一致的准正弦波（图5）。暗适应25dB刺激时a波无明显反应，潜伏期为40.4±6.7ms，振幅为-2.1±5.0V；b波潜伏期为110.2±11.3ms，振幅为226.7±49

25、.2V；暗适应0dB强光下的反应a波潜伏期为26.3±1.2ms，振幅为-205.4±40.1V，b波潜伏期为49.3±2.3ms，振幅为481.2±81.2V；明适应白色标准闪光刺激下的反应a波潜伏期为23.0±1.6ms，振幅为-23.4±9.1V，b波潜伏期为38.8±1.8 ms，振幅为78.1±20.7V；明适应快速重复闪烁光刺激的反应b波的振幅为122.1±27.5V，震荡电位总振幅为112.6±28.2 V。对不同年龄组正常人在暗适应25dB弱光刺激时的反应、暗适应0dB强光刺激时

26、的反应、明适应白色标准闪光刺激时的反应、明适应快速重复闪烁光刺激的a波和b波振幅及潜伏期和振荡电位总振幅进行统计学分析（表1）：在暗适应25dB刺激时a波无明显反应；在暗适应0dB强光刺激时、明适应白色标准闪光刺激时和明适应快速重复闪烁光刺激时，a波振幅和潜伏期与年龄的增加无明显相关性，5060岁年龄组的潜伏期较其他年龄组均延长，各年龄组两两比较无显著统计学差异（P0.05）；在暗适应25dB弱光刺激时、暗适应0dB强光刺激时、明适应白色标准闪光刺激时和明适应快速重复闪烁光刺激时的b波振幅随着年龄的增加逐渐降低，潜伏期与年龄的增加无明显相关性，但5060岁年龄组的潜伏期较其他年龄组均延长，各年

27、龄组两两比较无显著统计学差异（P 0.05）；振荡电位总振幅随着年龄的增加逐渐降低，各年龄组两两比较无显著统计学差异（P 0.05）。 1          electroretinography，F-ERG）检查，男30例，女23例；年龄2158（平均37.6）岁；右眼33只，左眼40只。按照10岁为一年龄组分成4组：2029岁，20眼；3039岁，22眼；4049岁，19眼；5060岁，12眼。裸眼或矫正视力均1.0，屈光度在+1.00 -2.00之间，经裂隙灯和检眼镜检查，无屈光间质和眼底病变，无全

28、身性疾病。    1.2方法 应用法国Metrovision 公司生产的Vision Monitor 视觉诱发系统，该仪器包括4个主要的组成部分：刺激器、放大器、计算机和打印机。刺激条件：选用高亮度、高分辨率、高刷新率的50cm彩色光电刺激器。屏幕最大亮度为300cd/m2，最小亮度<0.001cd/m2，对比度为99%。以中央红点为固视点，同时配有红外摄像系统，以监视眼球的固视情况。使用的电极包括记录电极（角膜接触电极）、参考电极（盘状电极）和地电极（盘状电极）。分别置于双眼角膜，双眼外眦外2cm 处和鼻根上5cm处。检测前充分散瞳,同时暗适应30min，

29、检测时受试者取端坐位，面对刺激屏，用地卡因表面麻醉角膜后，将角膜接触电极置于双眼角膜,参考电极置于双眼外眦外2cm处，地电极置于鼻根上5cm 处。暗适应下,分别在25dB弱光刺激下检测视杆细胞反应，在0dB强光下检测眼的最大反应和震荡电位（oscillatory potentials， OPs），明适应下，在白色标准光刺激下检测视锥细胞反应,在30Hz白色标准闪烁光刺激下检测视锥细胞对快速重复刺激的闪烁光反应。    统计学处理：将原始数据输入SPSS12.0软件，应用统计学进行频数分布分析和配对t检验。    2结果 &#

30、160;  用Vision Monitor 系统测试典型的F-ERG波形由一个负向a波和一个正向b波组成，OPs是叠加在F-ERG的b波上的小波，包括3个主要的波峰OP1、OP2、OP3后面常伴有第4个相似的峰OP4，a波潜伏期是由闪光时刻到波峰的时间，a 波振幅的测量是从基线到a波波谷；b波潜伏期是由闪光时刻到波峰的时间，b波振幅是由a波波谷到b波波峰；在30Hz白色标准闪烁光刺激下闪烁光反应F-ERG波形在最初的60ms内的几个反应是重叠在第一个F-ERG的b波上，以后的反应呈现与闪光频率一致的准正弦波，在记录a波和b波振幅时舍弃最初几个反应波，记录稳定后的振幅；OPs的总振幅是3个主要的波峰OP1，OP2，OP3波谷到波峰的和。在暗适应25dB弱光刺激时F-ERG波形a波的反应不明显，其后是一个缓慢上升的b波，没有次成分OPs（图1）；在暗适应0dB强光下的反应F-ERG波形由一个负向a波和一个正向b波组成，b波的上升支还可看到