实验一槐米中芦丁的提取分离和鉴定

1、实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、 凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热 LI赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗 渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮昔，皂 昔、笛醇和糅质等成分，其中芦丁 （Rutin）含量最高，达1220%。主要化学成分的结构及理化性质：芦丁 （rutin）： C27H30016 3H=0,浅黄色针状结晶,mpl74178&

2、#176;C （含三分子 水）；188°C （无水物）。难溶于冷水（1： 800010000）,可溶于热水（1： 180 200）,热甲醇（1： 10）,冷甲醇（1： 100）,热乙醇（1： 60）,冷乙醇（1： 650）； 难溶于乙醯、三氯中烷、石油瞇、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。懈皮素（quercetin）： C1SH1OO- 2H20,黄色结晶,mp313314°C （2 分子结 晶水），316°C （无水物）。能溶于冷乙醇（1： 290）,易溶于沸乙醇（1： 23）,可 溶于中醇、乙酸乙酯、冰醋酸、毗唳、丙酮等；难溶于水、苯、石油瞇等溶剂。芦丁 R=Gl

3、c-(6-l)-Glc 觀皮素R=H二、实验部分（-）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黃酮类化合物提取分离的原理和操作。2、掌握酸水解将芦丁生成擱皮素的方法。3、掌握芦丁与榔皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使 用方法。（二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。3、芦丁的鉴定原理：芦丁与榔皮素分别为黃酮类化合物的昔与昔元，用 Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析， Rf值也应不同。（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g （每组）。2、仪器：电炉子

4、、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、 减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。3、试剂：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸係水、镁粉、 浓硫酸、中醇、90%乙醇、瑰三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。（四）实验方法1、芦丁的提取：（碱提酸沉法）取槐米50g,加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节 PH二9,加热微沸30min,随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过滤，药 渣再重复处理一次（不用调PH值）。合并两次滤液，用浓盐酸调PH二3,放入冰 箱中析晶。2、芦丁的精制：（水重结晶法）（1）抽滤：用虹吸法先除去

5、上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。（2）精制：取全部芦丁粗品,加入蒸憾水800ml,煮沸至全部溶解（15min）, 趁热抽滤，放入冰箱析晶。3、芦丁的水解：（酸水解法）取芦丁 lg,加入2%硫酸150ml,小火加热微沸30min,注意观察现象：溶液 山浑浊变澄清，逐渐析出黃色结晶，抽滤，得到搠皮素粗品。剩下的芦丁要妥善 保管，下次课还要带来。4、鉴别反应（1）称擱皮素重量，计算水解率。（2）薄层色谱鉴定样品：自制芦丁及斛皮素的lmg/ml 醇溶液。（每组称取20mg）对照品：芦丁及懈皮素对照品的lmg/ml中醇溶液。展开剂：90%乙醇溶液显色：喷三氯化铝溶液，紫外光（365nm）观察荧光。实验结

6、果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。（3）显色反应©Molish反应：取芸香昔及榊皮素样品分别lml,加入3%ci -蔡酚溶液1滴, 振摇，沿壁滴加浓硫酸lml,观察现象。 盐酸-镁粉反应：分别取样品lml,加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉, 观察现象。 纸片反应：取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液 1滴，观察现象。（同理，再用酷酸镁显色）（五）注意事项1、提取时控制小火加热，微沸即可。2、加热完成后要放冷抽滤。3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH,既可以达到碱提取芦丁的口的，还可 以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余 的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黃酮母核在强碱性条件下易被破坏。4、用HC1调PH时，应注意:PH不要过低，因为PH过低（PH2以下）会使芦 丁形成锌盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被 破坏，导