浅论基质金属蛋白酶-9与层黏连蛋白在原发性干燥综合征唇腺中的表达

1、浅论基质金属蛋白酶-9与层黏连蛋白在原发性干燥综合征唇腺中的表达 【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、层黏连蛋白(Laminin,LN)在原发性干燥综合征(Primary Sjgrenss Syndrome，PSS)患者唇腺组织的表达及其与唇腺病理分级的相关性。方法 采用免疫组化S-P法检测59例PSS患者，30例正常对照者唇腺中MMP-9，LN表达。结果 原发性干燥综合征患者唇腺组织中MMP-9高表达,LN低表达,而对照组唇腺组织中MMP-9低表达,LN高表达；MMP-9的表达强度随唇腺病理分级升高而增强，LN的表达随唇

2、腺病理分级升高而减弱；MMP-9与LN的表达呈现负相关性。结论 MMP-9、LN在PSS患者唇腺组织中存在异常表达，并且二者的表达情况与病理分级相关。 【关键词】 原发性干燥综合征 基质金属蛋白酶-9 层黏连蛋白 唇腺Abstract: Objective To study the relationship between MMP9,LN and their roles in the pathogenesis of Primary Sjgrenss Syndrome. Methods Immunohistochemical technique was employed to detect th

3、e expression of MMP9 and LN in the labial gland acini of patients with Primary Sjgrenss Syndrome (PSS). Results Significant differences in LN and MMP9 expressions between two groups were found.The expression of MMP9 in the labial gland of the patients with PSS was increased significantly (P0.01) and

4、 the expression of LN in the labial gland acini of the patients with PSS was decreased significantly (P0.01). The expression degree of MMP9 was significantly negatively correlated with the the expressioned degree of LN, and the Pearsons correlation coefficient was0.997 (P0.01). Conclusion MMP9,LN ma

5、y be involved in the pathogenesis of Primary Sjgrenss Syndrome.Key words:Primary Sjgrenss Syndrome; matrix metalloproteinase9; laminin; labial glands原发性干燥综合征(Primary Sjgrenss Syndrome,PSS)是一种累及全身外分泌腺的自身免疫性疾病，主要侵犯泪腺和唾液腺，以淋巴细胞、浆细胞浸润为特征，可以引起腺体分泌减少，出现眼、口干燥症状。其发生淋巴瘤的机率是正常人的44倍1。MMP-9是一个蛋白酶家族中主要成员之一，能降解上皮

6、基底膜(basement membrane,)，在许多生理和病理过程中发挥重要作用，包括免疫和炎症反应。有关MMP-9在肿瘤的发病及MMPs抑制剂对肿瘤和部分自身免疫性疾病治疗作用的研究已有报道2-3，而有关MMP-9及LN与PSS的发病机制关系，国内未见报道。深入探讨PSS患者唇腺组织MMP-9的表达及其与LN表达间的关系，有可能为PSS提供新的治疗靶点，本研究应用免疫组化SP法对原发性干燥综合征患者唇腺区MMP-9及LN进行了检测和分析。1 资料和方法1.1 临床资料实验组：2004年5月2006年9月我科门诊及住院的PSS患者59例，所有病例均符合2002年干燥综合征国际分类诊断标准4，

7、首次确诊时由本院口腔科行唇腺活检术。术前均征得患者本人的同意。男3例,女56例,年龄2565岁,平均(45.4611.86)岁;病程1个月10年,平均(2.272.91)年。对照组：30例为同期健康志愿者。两组患者年龄、性别等无统计学差异。1.2 方法石蜡5m厚连续切片,常规处理后,微波炉抗原热修复,依次加入即用型一抗(鼠抗人MMP -9、LN工作液)、生物素标记二抗,DAB显色、苏木素复染。具体操作步骤严格按试剂盒说明进行。用已知阳性片作阳性对照,PBS代替一抗作空白对照。鼠抗人MMP-9、LN工作液和即用型SP免疫组化染色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.3 结果判断标准免疫组

8、化：光学显微镜下MMP-9以胞质内出现黄色颗粒状物质为阳性，LN以基底膜线性染色为阳性,按着色强弱分级计分:无着色为0,浅黄色为1,深黄色为2,棕黄色为3;着色范围以在40倍镜下随机选取5个视野(每个视野计数100个细胞)计数阳性细胞所占的百分比均值:25%为1,25%50%为2,50%为3。上述两项相加即为MMP 9或LN的强度积分:3分为阴性,3分为(+),4分为阳性(2+),5分为(3+)，6分为(4+)。 HE染色按Chisholm标准进行病理分级5：0级为间质中无淋巴细胞浸润；1级为每4mm2组织内有少量淋巴细胞浸润；2级为每4mm2组织内有轻度淋巴细胞浸润；3级为每4mm2组织内有

9、中度淋巴细胞浸润或少于一个灶淋巴细胞浸润；4级为每4mm2组织内有两个或两个以上淋巴细胞浸润灶，每个灶至少有50个淋巴细胞聚集。1.4 统计学方法采用SPSS 13.0统计软件，两样本计数资料比较采用非参数秩和检验、单因素方差分析及Pearson相关性分析。 2 结果 阳性信号为胞浆内出现黄色颗粒。以PBS代替一抗的空白对照切片中,无任何阳性反应。59例原发性干燥综合征患者唇腺组织MMP 9阳性，呈现高表达,主要位于导管细胞胞浆(图1，见封3)。30例原发性干燥综合征患者的唇腺组织检测到LN，呈现低表达(图2，见封3)。对照组唇腺组织中MMP-9表达为阴性或弱阳性，而LN呈现高的表达(图3，见

10、封3)。二组MMP-9、LN的表达强度相比较，差异有统计学意义，并且MMP-9的表达随病理分级的升高而升高，LN的表达随唇腺病理的分级升高而减弱，MMP-9与LN的表达强度呈现负相关(r=-0.997,P0.01)，见表1、2。表1 MMP-9、LN在正常对照与患者唇腺中表达强度的比较（略）表2 MMP-9、LN在PSS患者唇腺中表达强度与病理分级的关系（略）3 讨论 PSS是临床常见的结缔组织病，发病率仅次于类风湿关节炎。PSS最主要的病理特征是唇腺、泪腺等腺体组织中淋巴细胞的灶性浸润。PSS因外分泌腺结构破坏、功能受损可出现口干、眼干症状，还可有皮疹、关节炎、胆囊炎、胰腺炎、肾小管病变、肺

11、部受损等全身表现，并且PSS发生淋巴瘤的机率明显高于正常人1。至今，其确切发病机制仍不完全清楚。唇腺导管、腺泡上皮及基底膜的完整是保证唇腺功能正常的基础。 在正常情况下,上皮细胞不但分泌LN等基底膜蛋白以形成基底膜，而且分泌MMP-9等依赖锌离子的内肽酶降解物质分解基底膜,使基底膜成分处于不断合成和降解的动态平衡，以维持基底膜完整结构。PSS的典型唇腺病理特征是导管周围大量的淋巴细胞浸润成灶，并且多为CD4+的T淋巴细胞6，MMP-9可以介导T 细胞的迁移7。 本研究发现MMP-9在PSS患者唇腺组织中高表达，与对照组比较差异明显(0.01),并且表达强度随着病理分级的升高而表达增强，具有统计

12、学意义(0.01)。LN在PSS患者唇腺组织中呈现低表达，表现为基底膜染色减弱、基底膜破坏、断裂甚至缺失，与对照组比较差异明显(0.01),并且表达强度随着病理分级的升高而减弱，差异具有统计学意义(P0.01)。MMP-9与LN的表达间存在显着性负相关性(r=-0.997,P0.01)。部分对照组MMP-9的低表达，推测为其发挥生理作用维持基底膜完整结构。Fox8研究认为唇腺组织的上皮细胞具有一定的免疫功能，而在PSS患者的腺体局部免疫失衡的情况下，导管上皮细胞产生MMP-9的增加，LN是MMP-9的作用底物，即MMP-9活性增加，从而导致MMP-9降解其基底膜中的层黏连蛋白，而基底膜借助层黏

13、连蛋白与上皮细胞紧密连接9，一旦基底膜结构不完整，二者连接受到影响，导致腺体分泌功能受损。推测PSS患者唇腺功能的受损有MMP-9与LN的参与。 本研究结果提示，MMP-9、LN在PSS患者唇腺组织中存在异常表达，并且二者的表达情况与病理分级相关，而检测原发性干燥综合征患者唇腺组织中MMP-9、LN的表达变化，可以预测病变，为临床实施积极的干预措施提供实验室依据。【参考文献】 1张乃峥.临床风湿病学M.上海:上海科学技术出版社，1999.290.2Zucker S,Cao J，Chen WT.Critical appraisal of matrix metalloproteinase inhi

14、bitors in cancer treatmentJ. Oncogene,2000,19:6642-6650.3Kerkela E,Saarialho-kere U.Matrix metalloproteinase in tumor progression:focus on basal and squamous cell skin cancerJ.Exp Dermatol,2003,12:109-125.4董怡.2002年修订的干燥综合征国际分类(诊断)标准J.中华风湿病学杂志，2002,6(4):257.5Chisholm DM，Mason Dk.Labial salivary gland in Sjgrens SyndromeJ.J Clin Pathol,1968,21:656-660.6唐福林.原发性干燥综合征的发病机制J. 中华风湿病学杂志，2000,4:50-53.7Leppert D，Waubant E，Galardy R,et al.T cell gela