高效液相色谱-必备要点

1、第二十章 高效液相色谱法1 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。相同点：均为高效、高速、高选择性的色谱方法，兼具分离和分析功能，均可以在线检测 不同点：  分析对象及范围流动相的选择操作条件GC能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20%流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小加温常压操作HPLC溶解后能制成溶液的样品，高沸点、高分子量、难气化、离子型的稳定或不稳定化合物，占有机物的80%流动相为液体或各种液体的混合。它除了起运载作用外，还可通过溶剂来控制和改进分离。室温、高压下进行2何谓化学键合相？常用的化学键合相有哪几种类型？分别用于哪些液相色

2、谱法中？采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好，适于作梯度淋洗。目前常用的Si-O-Si-C型键合相，按极性分为非极性，中等极性与极性三类。非极性键合相：常见如ODS键合相，既有分配又有吸附作用，用途非常广泛，用于分析非极性或弱极性化合物；中等圾性键合相：常见的有醚基键合相，这种键合相可作正相或反相色谱的固定相，视流动相的极性而定：极性键合相：常用氨基、氰基键合相，用作正相色谱的固定相，氨基键合相还是分离糖类最常用的固定相。3什么叫正相色谱？什么叫反相色谱？各适用于分离哪些化合物？正相色谱法：流动相极性小于固定相极

3、性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。反相色谱法：流动相极性大于固定相极性的色谱法。用于分离非极性至中等极性的分子型化合物。4简述反相键合相色谱法的分离机制。典型的反相键合色谱法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相，常用十八烷基（ODS或C18）键合相；流动相常用甲醇-水或乙腈-水。非典型反相色谱系统，用弱极性或中等极性的键合相和极性大于固定相的流动相组成。 反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。对于反相色谱的分离机制目前，保留机制还没有一致的看法，大致有两

4、种观点，一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。分配色谱的作用机制是假设混合溶剂（水十有机溶剂）中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基表面，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分配。吸附色谱的作用机制可用疏溶剂理论来解释。这种理论把非极性的烷基键合相，看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的"分子毛"，这种"分子毛'有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时，一方面，非极性组分分子或组分分子的非极性部分，由于疏溶剂作用，将会从水中被挤出来，与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用，其结果使组分分子

5、在固定相得到保留。另一方面，被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，使它离开固定相，减小保留值，此即解缔过程，显然，这两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。一般说来，固定相上的烷基配合基或被分离分子中非极性部分的表面积越大，或者流动相表面张力及介电常数越大，则缔合作用越强，分配比k'也越大，保留值越大。不难理解，在反相键合相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。5离子色谱法、反相离子对色谱法与离子抑制色谱法的原理及应用范围有何区别？离子色谱法(Ion Chromatography) ：用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。以电导检测器为通用检测器。试样组分在分离

6、柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。离子色谱法是溶液中阴离子分析的最佳方法，也可用于阳离子分析。反相离子对色谱法(IPC或PIC) ：反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分与其中的反离子形成中性离子对，增加k和tR，以改善分离。适用于较强的有机酸、碱。反相离子抑制色谱：在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制组分解离，增加其k和tR，以达到改善分离的目的。适用于极弱酸碱物质（pH=37弱酸；pH=78弱碱；两性化合物）6亲和色谱的分离机制是什么？有何特点？传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理，利用色谱的差速迁移理论，实现对目标分子的分离，仅仅是

7、一种组分分离的选择性过滤法。然而，这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是，实际上目标分子在两相间分配系数过大，且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以，关于生物大分子在亲和色谱中的保留机制及色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环节，有待进一步的完善.亲和色谱具有较高的专属性，经其分离，纯化，浓集后的生物样品具有较高的纯度，大大降低了后续测定(如HPLC)时的背景噪音，进而使得后续测定具有极高的灵敏度。7速率理论方程式在HPLC中与在GC中有何异同？如何指导HPLC实验条件的选择？解:液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞

8、留的流动相传质以及柱外效应。在气相色谱中径向扩散往往比较显著，而液相色谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。另外，在液相色谱中还存在比较显著的滞留流动相传质及柱外效应。在高效液相色谱中，对液液分配色谱，Van Deemter方程的完整表达形式为由此，HPLC的实验条件应该是：小粒度、均匀的球形化学键合相；低粘度流动相，流速不宜过快；柱温适当。8试讨论影响HPLC分离度的各种因素，如何提高分离度？(1) 色谱填充性能液相色谱柱分离性能的优劣，是由固定相粒度、柱长、由柱内径和填充状况决定的柱压降这三个参数度决定的。这三个参数度也决定了样品组分的保留时间，保留时间不仅与色谱过程的热力学因素k有关，还

9、直接与决定柱效与分离度的柱性能参数及流动相的黏度有关，这些参数都是影响色谱分离过程动力学的重要因素。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般都是购买商品柱，很少自行制备。(2) 流动相及流动相的极性液相色谱中，改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接因素。液相色谱不可能通过增加柱温来改善传质。因此大多是恒温分析。流动相选择在液相色谱中显得特别重要，流动相可显著改变组分分离状况。(3) 流速流速大于0.5 cm/s时， Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。 9试讨论反相HPLC的分离条件

10、的选择。反相HPLC法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的种液相色谱分离模式。反相HPLC色谱中样品的保留值主要由固定相比表面积、键合相种类和浓度决定，保留值通常随链长增长或键合相的疏水性增强而增。溶质保留值与固定相表面积成正比，当其他条件相同时，溶质在低表面积色谱柱上的保留值短。样品的保留值也可以通过改变流动相组成或溶剂强度来调整，溶剂强度取决于有机溶剂的性质和其在流动相中的浓度。10在正、反相HPLC中流动相的强度是否相同？在正相色谱中，由于固定相是极性的，所以溶剂极性越强，洗脱能力也越强，即极性强的溶剂是强溶剂。在反相色谱中，由于固定相是非极性的，所以溶剂的强度随

11、溶剂的极性降低而增加，即极性弱的溶剂是强溶剂。11什么叫梯度洗脱？它与GC的程序升温有何异同？在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提。是改进液相色谱分离的重要手段。梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH或离子强度，而后者改变的温度。程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段。12蒸发光散射检测器的原理及特点是什么？蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。一、ELSD原理 恒定流速的色谱仪（高效液相、逆流色

12、谱、高效毛细管电泳等）洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drift tube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号色谱图。 二、特点 1洗脱液需要雾化，所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。 2流动相要蒸发掉，所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。如果被测

13、物质沸点接近或低于流动相的蒸发温度，则无法检测；不过，100%的水做流动相，蒸发室温度也才设为150摄氏度，沸点比水低的有机物质完全可以用气相色谱仪进行分离检测了。由于流动相和溶剂蒸发了，使用ELSD检测器收集的色谱图一般没有溶剂峰；而且梯度洗脱没有折光视差效应，一般不会出现基线漂移。 3.检测光散射变化，所有进入到散射池的物质都可被检测，而且响应值只与物质的量有关。 4.浓度跟峰面积不成线性，分别取自然对数后成线性。13常用的HPLC定量分析方法是什么？哪些方法需要用校正因子校正峰面积？哪些方法可以不用校正因子？常用的HPLC定量分析方法有：外标法：外标工作曲线法、外标一点法、外标二点法等内

14、标法：内标工作曲线法、内标一点法、内标二点法、内标对比法等使用内标和外标标准曲线法时，可以不必测定校正因子，其它方法须要用校正因子校正峰面积高效液相色谱习题及参考答案一、单项选择题1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（ ）。A、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离。A、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？A、0.5m B、0.45m C、0.6m D、0.55m4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？A、改变流动相的种

15、类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长C、改变固定相的种类和流动相的种类 D、改变填料的粒度和柱长5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（ ）A、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43） C、正庚烷/异丙醇（93/7） D、乙腈/水（1.5/98.5）6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。A、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（ ）范围内。A 、1030cm B、 2050m C 、12m D、25m8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（

16、）A、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相 D、组分与组分9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（ ）的操作A、改变柱长 B、改变填料粒度C、改变流动相或固定相种类 D、改变流动相的流速10. 液相色谱中通用型检测器是（ ）A、紫外吸收检测器 B、示差折光检测器 C、热导池检测器 D、氢焰检测器11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器A、荧光检测器 B、示差折光检测器C、电导检测器 D、紫外吸收检测器12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（ ）A、提高柱温 B、降低板高 C、降低流动相流速 D、减小填料粒度

17、13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（ ）A、改变固定相种类 B、改变流动相流速C、改变流动相配比 D、改变流动相种类14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（ ）A、紫外吸收检测器 B、红外检测器 C、差示折光检测 D、电导检测器15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（ ）A、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（ ） A、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（ ）水A国标规定的一级、二级去离子水 B国标规定的三级水 C不含有机物的蒸

18、馏水 D无铅(无重金属)水18. 高效液相色谱仪与普通紫外可见分光光度计完全不同的部件是（ ） A、流通池 B、光源 C、分光系统 D、检测系统19. 下列哪种是高效液相色谱仪的通用检测器 A、紫外检测器 B、荧光检测器 C、安培检测器 D、蒸发光散射检测器20. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括 A、贮液器 B、高压输液泵 C、过滤器 D、梯度洗脱装置 E、进样器二、判断题：1. 液相色谱分析时，增大流动相流速有利于提高柱效能。2. 高效液相色谱流动相过滤效果不好，可引起色谱柱堵塞。 3. 高效液相色谱分析的应用范围比气相色谱分析的大。4. 反相键合相色谱柱长期不用时必须保证柱内充满甲醇流

19、动相。5. 高效液相色谱分析中，使用示差折光检测器时，可以进行梯度洗脱。6. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是减小填料粒度。7. 在液相色谱中，范第姆特方程中的涡流扩散项对柱效的影响可以忽略。8. 由于高效液相色谱流动相系统的压力非常高，因此只能采取阀进样。9. 高效液相色谱仪的色谱柱可以不用恒温箱，一般可在室温下操作。10. 高效液相色谱中，色谱柱前面的预置柱会降低柱效。11. 液相色谱中，化学键合固定相的分离机理是典型的液液分配过程。12. 高效液相色谱分析中，固定相极性大于流动相极性称为正相色谱法。13. 高效液相色谱分析不能分析沸点高，热稳定性差，相对分子量大于400的有机物。1

20、4. 在液相色谱法中，约7080的分析任务是由反相键合相色谱法来完成的。15. 在高效液相色谱仪使用过程中，所有溶剂在使用前必须脱气。16. 填充好的色谱柱在安装到仪器上时是没有前后方向差异的。17. 保护柱是在安装在进样环与分析柱之间的，对分析柱起保护作用，内装有与分析柱不同固定相。18. 检测器、泵和色谱柱是组成高效液相色谱仪的三大关键部件。19. 紫外可见光检测器是利用某些溶质在受紫外光激发后，能发射可见光的性质来进行检测的。20. 应用光电二极管阵列检测器可以获得具有三维空间的立体色谱光谱图。三、简答题1. 为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？2. 高效液相色谱有哪

21、几种定量方法，其中哪种是比较精确的定量方法，并简述之。参考答案一、 选择题D C B C A D AC C B A D BB D B AADE二、  判断题× × × × 11.× 12. 13.× 14. 15. 16.× 17.× 18. 19.× 20.三、 简答题1. 高效液相色谱仪所用溶剂在放入贮液罐之前必须经过0.45m滤膜过滤，除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。所有溶剂在上机使用前必须脱气；因为色谱住是带压力操作的，检测器是在常压下工作。若

22、流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作，这在梯度洗脱时尤其突出。2. 高效液相色谱的定量方法与气相色谱定量方法类似，主要有归一化法、外标法和内标法。其中内标法是比较精确的定量方法。它是将已知量的内标物加到已知量的试样中，在进行色谱测定后，待测组分峰面积和内标物峰面积之比等于待测组分的质量与内标物质量之比，求出待测组分的质量，进而求出待测组分的含量。液相色谱复习题一、填空题1.高效液相色谱的高压输液泵按排液性质可分为 泵和 泵两类。答案:恒压 恒流2. 高效液相色谱的高压

23、输液泵应具备 、 、 、 、 、 等性能。答案:流量稳定 输出压力高 流量范围宽 耐酸碱腐蚀 压力波动小 有梯度淋洗3.高效液相色谱的淋洗梯度可分为 梯度和 梯度两种。答案:低压 高压4.高效液相色谱梯度洗脱中的低压梯度又称 梯度,高压梯度又称 梯度。答案:外 内5.高效液相色谱的保护柱起到 的作用。答案:保护、延长柱寿命6.高效液相色谱进样系统包括 和 两个步骤。答案:取样 进样7.高效液相色谱检测器可分为 型和 型两大类。答案:通用 选择8.高效液相色谱紫外检测器属于 型检测器,只能适用于那些 的物质。答案:选择 能吸收紫外光9.常用的高效液相色谱紫外单波长检测器的波长是 nm。答案:25

24、410.正相色谱中,固定相是 性的,流动相是如 一类的 性溶剂。答案:极 己烷 非极11.反相色谱中,固定相是 性的,流动相是如 一类的 性溶剂。答案:非极性或弱极 甲醇水 极12.在正相色谱中,流动相极性变小,色谱保留时间 答案:延长13.在反相色谱中,流动相极性增大,色谱保留时间 答案:延长14.高效液相色谱可分为 、 、 、 、四种分离类型。答案:吸附(正相) 分配(反相) 离子交换 凝胶渗透或排阻(GPC)15.高效液相色谱系统由 、 、 、 等部分组成。答案:输液系统 进样系统 分离系统 检测器16.高效液相色谱测定多环芳烃类化合物通常采用的液相色谱柱是 流动相是 、检测器是 检测器

25、。答案:十八烷基硅烷(ODS) 甲醇和水或乙腈和水 荧光分光(或紫外分光)17.高效液相色谱仪的主要部件有 、 、 、 、 、 和 答案:贮液罐, 高压输液泵, 进样装置, 色谱柱, 检测器, 记录仪, 数据处理装置18.高效液相色谱法常用流动相脱气方法有 、 、 、 和 答案:吹氦脱气法, 加热回流法, 抽真空脱气法, 超声波脱气法, 在线真空脱气法19.影响荧光强度的因素主要是 和 答案:溶剂极性, 溶液温度20.根据键合固定相与流动相相对极性的强弱,可将键合相色谱法分为 和 答案:正相键合相色谱法, 反相键合相色谱法二、判断题1使用多元梯度洗脱时，一般使用峰面积法定量（）答案：2 保留时

26、间长的色谱峰，最好使用峰高法定量（）答案：×3 保留时间短的色谱峰,最好使用峰高法定量( )答案: ×4 当分离度不好，色谱峰形不好时，最好使用峰高法定量（）答案：5 正相键合相色谱所用键合固定相的极性大于流动相的极性（）答案：6 相键合相色谱法中，流动相极性愈强，溶质的保留值越小（）答案：×7 正相键合相色谱法使用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物（）答案：8 在反相色谱分析中，当流动相的极性减小时，会增强对溶质的洗脱强度，使溶质的k值减小答：9 荧光检测器的灵敏度较高，是痕量分析时的有力检测工具（）答案：10 检测器灵敏度越高，检测限越高（）答案：

27、15;11 高效液相色谱法中塔板高度随填料粒度减小而增大（）答案：×12 减小冲洗剂粘度或提高柱温有利于减小塔板高度（）答案：13 示差折光检测器是一种通用型检测器（）答案：14 梯度洗脱时可以使用示差折光检测器（）答案：×15 高效液相色谱法适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析( )答案：16 一定范围内，填充柱中微粒填料粒度越小，色谱柱的分离效率越低（）答案：×17 荧光检测器不能用于梯度洗脱( )答案：×18 荧光的波长总要比分子吸收的紫外光波长长,通常在可见光范围内( )答案：19 荧光强度与激发光强度成反比( )答案：&#

28、215;20 安培检测器对流动相的流速、温度、pH值等因素的变化比较不敏感( )答案：×三、名词解释1 检测器灵敏度: 一定量的物质通过检测器时所给出的信号大小叫做该检测器对该物质的灵敏度2 检测器噪音: 没有溶质通过检测器时,检测器输出的信号变化3 内标法: 选择适宜的物质作为欲测组分的参比物,定量加到样品中去,依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值. 4 标准加入法: 以欲测组分的纯物质为内标物,加入到待测样品中,然后在相同的色谱条件下,测定加入欲测组分纯物质前后欲测组分的峰面积(或峰高),从而计算欲测组分在样品中的含量的方法. 5 荧光猝灭效应: 当样品浓度较高时,荧光物质分子

29、易与溶剂分子或其它溶质分子相互作用,引起溶液的荧光强度降低,荧光强度不再与浓度呈线性关系,这种现象称为荧光猝灭效应. 6 梯度洗脱: 梯度洗脱是使流动相中含有两种或两种以上不同极性的溶剂,在洗脱过程连续或间断改变流动相的组成,使样品中的所有组分可在最短的分析时间内,以适用的分离度获得圆满的选择性分离. 7 最小检测量: 产生的信号响应等于2倍噪声时的进样量8保留时间（tR）:从进样开始到柱后出现样品的浓度极大值所需的时间为保留时间9 容量因子（k）:分配平衡时该物质在两相中绝对量之比。10 柱外效应：指由色谱柱以外的因素,引起的色谱峰形扩展的效应.11 死时间（t0）：不被固定相滞留的组分，从

30、进样到出现峰最大值所需的时间。12 峰宽（w）：在峰拐点处所作切线与峰底相交两点间底距离。13 基线：在正常操作条件下仅有流动相通过检测器系统时产生底响应信号底曲线。14 色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器系统时产生的响应信号的微分曲线。15 畸峰：形状不规则的峰，如拖尾峰、前伸峰。16 分离度（R）：两个相邻色谱峰的分离程度，以两个组分保留值之差与其平均峰宽值之比表示17 线性范围：检测信号与被测物质的量呈线性关系的范围。18 化学发光: 某些物质常温下进行化学反应,能生产处于激发态的反应中间体或反应产物.这些反应中间体或反应产物从激发态返回基态时,会伴随有光子发射的现象.由于物质激发态的能量

31、是通过化学反应,而不是通过其它途径获得的,故称这种通过化学反应产生的光辐射为化学发光.四、问答题1.高效液相色谱的特点是什么?答案:(1)高效:(2)快速:(3)不受样品挥发性影响:(4)不受热稳定性限制。2.请举出高效液相色谱检测器的名称(四种即可)。答案:紫外检测器；荧光检测器；示差折光检测器；电化学检测器；电导、电容、放射性、红外检测器等。3.高效液相色谱二极管阵列检测器有哪些特点?答案:(1)可同时得到多波长色谱图；(2)对每个色谱峰的指定位置适时记录吸收光谱图；(3)进行函点光谱扫描,可得到三维色谱光谱图。4.高效液相色谱的紫外检测器常用AU/FS表示灵敏度,试问AU和FS各表示什么

32、?答案:AU为吸光度单位,FS为满程偏转。5.高效液相色谱在环境监测中,适用于什么性质的有机污染物的分析,请举出几类化合物的例子。答案:适用于分子量大、挥发性低、热稳定性差、水溶性的有机污染物的分析,如多环芳烃、酚类、多氯联苯、邻苯二甲酸酯类、联苯胺类、阴离子和非离子表面活性剂、有机农药等。6.在进行高效液相色谱分析时,保留时间不恒定的主要原因有哪些?答案:泵室内有气泡,流速不稳定；管路漏液；流动相浓度或pH值变化；柱温不稳定。7.在高效液相色谱法梯度洗脱中,影响梯度洗脱的因素有哪些?答案:1 溶剂纯度要高,2 梯度混合的溶剂互溶性要好3 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器.8.高效液相色谱法中,作为流动相的溶剂应具备哪些要求?答案:1 纯度高 2 用作流动相的溶剂应与固定相不互溶,并能保持色谱柱的稳定性3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配 4 对样品有足够的溶解能力 5 选用的溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点 6 低毒性.9.检测系统造成峰展宽的主要来源?答案: 1柱外死