实验一 紫外-可见分光光度计的性能检验

1、实验一 紫外可见分光光度计的性能检验一、实验目的 1.掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法2.学会UV-1100型紫外可见分光光度计的使用方法二、实验原理分光光度计的性能的好坏，直接影响到测定结果的准确程度。因此，要对仪器进行性能检查，以保证测定结果的准确性。三、仪器和试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪石英比色皿（一对）擦镜纸 K2Cr2O7溶液 KMnO4溶液蒸馏水四、实验内容及操作步骤1. 比色皿的配对性 将蒸馏水注入到比色皿中，以其中一个比色皿作空白，在 440 nm波长处分别测定其他各比色皿中的透光率。 2.波长精度的检查 用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm为标准，在待测仪器

2、上测绘KMnO4溶液的吸收曲线，若测得的最大吸收波长在5251nm以内，则仪器的波长精度符合使用要求。3. 重复性 以0.02mol/L的H2SO4溶液的透光率为100%，用同一K2Cr2O7溶液连续测定7次，求出极差，如小于0.5%，则重复性符合要求。4.吸收值的准确度考察 取K2Cr2O7溶液，在以下波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，如下表所示，其相对偏差在1%以内，则吸收值的准确度符合要求。波长/cm235（最小）257（最大）313（最小）350（最大）吸收系数123.0126.0142.8146.247.050.3105.5108.5五、思考题1. 同种比色皿透光度

3、的差异对测定有何影响？2. 检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？  实验二、吸收曲线的测绘及吸收系数的测定一、实验目的 1. 掌握测绘吸收曲线的方法2. 学会测定吸收系数二、实验原理若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的max、min或 (S)为一定值，且他们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的证据。百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。即 三、仪器和试剂 UV1100型紫外可见分光光度计石英比色皿（一对） 100ml 烧杯1 个擦镜纸 95%乙醇（A.R）丹皮酚对照品四、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品母液的配制：称取丹皮酚对

4、照品10mg，用95乙醇溶解，定容至10ml，摇匀。吸取5ml于100ml量瓶内，用95%乙醇定容，作为母液备用，此溶液中丹皮酚的含量为0.005%。1. 吸收曲线的测绘 吸取母液1ml于10ml量瓶内，用95乙醇定容。此时，丹皮酚含量为0.0005%。将此溶液与空白溶液（95乙醇）分别用两个相同的比色皿盛装后，放置在仪器的比色架上，按仪器使用方法进行光谱扫描，得到吸收曲线图。2吸收系数的测定 利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度，计算百分吸收系数。  实验三、分光光度法测定槐花中总黄酮的含量一、实验目的 1.掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法2.巩固紫外可

5、见分光光度计的操作方法二、实验原理黄酮类化合物分子结构中多含有羰基和羟基等结构，这些结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物。铝盐比色法是指用三氯化铝或硝酸铝、亚硝酸钠同黄酮类化合物生成稳定的有色配合物，可用于定量分析。三、仪器和试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液10% Al(NO3)3溶液NaOH试液芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯四、实验内容及操作步骤1. 对照品溶液的制备 精密称取在120干燥至恒重的芦丁对照品50mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10ml，置100ml量

6、瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。2. 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。3. 样品测定 取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，移至100ml量瓶中，用

7、甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，至25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量（g），计算，即得。槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计，不得少于8.0%。五、注意事项 1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题 1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。  实验四、薄层板的制备一、实验目的 掌握薄层板的制板方法二、仪器和试剂 天平（0.1mg）

8、 研钵玻璃板 10 cm×20cm CMC-Na水溶液 蒸馏水 95乙醇（A.R）薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工厂）三、实验内容及操作步骤1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在薄层板放置架上阴干备用。（要求：薄板应光滑、平整、不符水珠。）2匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。3铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4活化 将阴干的薄层板至于110烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。要求：制备好的薄层板应检查其均匀度,即在反射光及透射光的检视下其表

9、面应均匀、光滑、平整、无麻点、无气泡、无破损及无污染。四、注意事项1.玻璃板的规格有多种10*20cm、20*20cm等，可根据实验需要选择不同规格的玻璃板。 2. CMC-Na水溶液做为薄层板制备的粘合剂，中国药典2005年版规定其浓度在25 ，其浓度大小决定了所制备薄层板的硬度，本次实验粘合剂浓度为3 。3.除硅胶GF254外，薄层用硅胶还有硅胶G、硅胶H、硅胶GF365、硅胶GH254、 硅胶GH365等，不同种类的硅胶所制备出的薄层板性能不同。本次试验所用的硅胶GF254是指一种含有煅石膏的硅胶并在其硅胶中加入了一种在254nm下显强荧光背景的荧光剂，主要用于分离、检视在紫外和可见光下

10、物无吸收的成分。五、思考题1薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？  实验五 薄层色谱定性分析（五味子的定性鉴别）一、实验目的 1. 掌握薄层色谱的定性分析方法2. 熟悉薄层板的点样方法二、实验原理中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。三、仪器与试剂毛细管薄层板 10 cm×20cm 所用试剂均为分析纯五味子粉末四、实验内容及操作步骤 取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯

11、甲烷1ml使溶解，作为供试品液。另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。吸取上述三种溶液各2l，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（1551）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。五、注意要点1.五味子有南、北之分。中国药典2005年版（一部）所收载的五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(TurcZ) Bail的干燥成熟种子。习称“北五味子”。2.本次实验操作分为点样

12、、展开、检视与记录数据四个过程。具体操作要点如下：2.1点样：在干燥、清洁的环境中用毛细管分别吸取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液于同一硅胶GF254薄层板上，点样基线距离底边1015mm，点样圆点不大于3mm，接触点样时勿损伤薄层板表面。点间距离不少于8mm。2.2展开：浸入展开剂的深度为距底边5mm为宜。上行展开10cm左右，达到展距后取出薄层板、晾干、待检测。（展开之前应注意预平衡：在双槽展开箱的一侧槽内加入适量的展开剂，密闭，一般保持1530 min，待容积蒸汽平衡后，应迅速将薄层板放入展开箱中，立即密闭，展开。）2.3检视与记录数据：将展开、晾干的薄层板置于254mm紫外

13、灯下检视，观察供试品溶液所显示的主斑点的颜色和位置（Rf值）与对照品溶液、对照药材溶液是否一致。当供试品溶液主斑点与对照品、对照药材能对应时，即可认为该药材为药典收载五味子。六、思考题1如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？实验六、高效液相色谱仪的使用一、实验目的   1. 掌握高效液相色谱仪的使用方法2.了解高效液相色谱仪的结构二、仪器和试剂 L-2000液相色谱仪（紫外检测器）；C18反相键合色谱柱（250 mm×4.6 mm）；微量进样器（25l）；过滤器（0.45m）及脱气装置；苯、甲苯、萘；甲醇（色谱纯）；重蒸馏水（新制）

14、；三、实验内容与步骤 （一）流动相的预处理：1过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2对过滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。（二）安装色谱柱（三）液相色谱仪的使用方法1.启动液相色谱仪：(1)检查仪器的电源线是否已连接。(2)打开仪器的电源开关。(3)打开输液泵电源。(4)打开检测器电源。（在平衡和冲洗色谱柱时请将检测器关闭）2.排除管道内空气：(1)将吸滤头放入经过处理后的溶剂内。(2)将输液泵阀打开（逆时针旋转180º）。(3)按下pump on/off键，开启输液泵。(4)按下purge键，开始排管道内气泡。(5)仔细观察管路，至无气泡流出时，再次按下purge键，暂停排液

15、。(6)按下pump on/off键，关闭输液泵。(7)顺时针旋紧输液泵阀。3.泵流速的设定：(1)按下manual键。(2)按下1键，按ent键确认。(3)输入需要的流速，按ent键确认。4.检测器波长的设定：按下wl键，输入需要的波长，按ent键确认。5.打开T2000P色谱工作站：(1)选择实时进样通道1，进入样品信号采集界面。(2)鼠标左键点击“方法” ，修改或者新建分析方法。(3)鼠标左键点击“谱图” ，设置谱图显示。(4)在“停止时间” 项下输入采集停止时间。(5)在“路径及文件名规则” 项下输入文件保存路径。(6)鼠标右键点击“使用方法”项下分析方法，选择分析方法。6.色谱柱预平

16、衡：按下pump on/off键，开启输液泵。至基线平稳时可开始进样。7进样：(1)进样前按A/Z键将基线调零。(2)将进样阀逆时针旋至于load位，插入进样针，进样。(3)进样后立即将进样阀顺时针旋至injecti位。工作站开始采集信息。8.数据采集完毕后，点击停止进样。9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图。10.实验完毕后冲洗色谱柱。11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源。附: 练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量  色谱条件 流动相为甲醇水（8020）；固定相为C18反相键合色谱柱；检测波长为254nm；流速：1

17、ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为1g/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10l。   四、问题讨论    流动相在使用前为何要过滤和脱气？实验七高效液相色谱定性及定量分析中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定（色谱分析设计实验）一、实验目的1.掌握利用高效液相色谱法进行定性及定量分析2.巩固高效液相色谱仪的使用方法二、实验内容  中药赤芍中芍药苷的高效液相色谱分析三、实验提示    赤芍为常用中药，主要含芍药苷，并含氧化芍药苷、芍药内酯苷、牡丹酚、挥发油等，赤芍中的芍药苷是其主要活性成分，为了控

18、制其含量，对赤芍中的芍药苷进行含量测定。 四、实验要求 1. 在老师的指导下查阅文献，系统了解赤芍中的芍药苷的测试方法。 2. 设计赤芍的提取处理方案。 3. 设计液相色谱分离条件（色谱柱，流动相，检测器等）与定量方法。 4. 实验报告按设计实验的要求书写。五、思考题1外标一点法的主要误差来源是什么？2紫外检测器的优缺点是什么？实验八、气相色谱仪的使用一、实验目的 1.掌握气相色谱仪的使用方法2.了解气相色谱仪的结构二、实验原理气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。所用的仪器为气相色谱仪，主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。

19、三、仪器与试剂岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器）樟脑对照品溶液试剂均为A.R纯；四、实验内容及操作步骤 （一）、启动GC-2014气相色谱仪：1、检查仪器的电源线及氮气、空气、氢气的接头是否连好；2、打开氮气、空气、氢气钢瓶及减压阀；3、打开仪器右侧的电源开关，待自检完成后，开启电脑；（二）、参数的设定：1、进样口温度：按下“INJ”键，设定进样口温度；2、柱温：按下“COL”键，设定柱温；3、检测器温度：按下“DET”键，设定检测器温度；4、载气的流量：按下“FLOW”键，设定载气的流量；5、分流比：按下“FLOW”键后，设定“SPLIT RATIO”项；（三）、打开N2000色谱

20、工作站：（四）、运行GC-2014气相色谱仪：1、点击“SYSTEM”，按下“START GC”键开启系统，再按下“MONITOR”键，在监视栏中观察流量、柱温、进样口温度、检测器温度的变化；2、待温度达到设定值后，点击“MONITOR”键后，点击flame on，确认点火是否成功。 3、确认点火成功后，观察图谱的基线；（五）、进样1、进样前按“ZERO ADJUST”键，将基线调零；2、将进样针迅速插入进样口，并快速进样，然后立即按下数据采集开关，稍过片刻后拔出进样针；（六）、待数据采集完毕后，点击停止采集；（七）、待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。（八）、关机：1、将进样口、柱温箱、检测器的温度设为室温；2、待各单元温度低于80度后，点击“MONITOR”键后，按下“SYSTEM”键，再点击“STOP GC”键关闭系统；3、关闭N2000色谱工作站，关闭主机电源；4、关闭氮气、空气、氢气钢瓶。 附: 练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量  色谱条件