流式细胞仪常用的几种检测方法完整

1、流式细胞仪常用的几种检测方法（可以直接使用，可编辑 优秀版资料，欢迎下载）流式细胞仪常用的几种检测方法(转载)一、测定用乙醇固定的 DNA 的含量1 、培养细胞的 DNA 含量的测定制备单细胞悬液于200卩的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇， 4 C保存；附:细胞固定的一般步骤1) 取单细胞悬液12 X 10个细胞于PBS ( PH=7.2 )缓冲液中；2) 300g 离心 5 分钟，弃上清，反复两次；3) 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中；4) 将细胞悬液放置于 2 3ml 冷 70% 乙醇中，混匀， 保存于4 C,至少30分钟。在4 C条件下可保存23周。2 根据实验的要

2、求，固定剂也可选用 1 3% 多聚甲醛；2将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至04C；2细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团(特别是用乙醇固定时)。2300g离心5分钟，去上清，再重悬于400卩I PB中;显微镜下观察，若有明显的黏附，须再用筛网过滤；2 加入 PI (含 Rnase )，避光孵育 30 分钟；2 上机检测。2 、新鲜组织的 DNA 含量的测定1) 用 200mg 湿重组织用机械法制成单细胞悬液；2) 500g 离心 5 分钟；3) 弃上清，重悬于 10ml 染色 - 去污剂中；4) 再过滤，用200目的筛网或7080 艸 的筛

3、网过滤；5) 上机检测。3 、石蜡包埋组织切片的 DNA 含量的测定1) 从石蜡包埋切取切片 50 ym厚，23片，制成单细胞悬液；2) 用 PBS 缓冲液洗涤， 500g 离心 5 分钟，弃上清；3) 加入 PI 液 1ml 室温避光 30 分钟；4) 调整细胞浓度为 1 X 106/ml ;5) 上机检测。二、细胞凋亡检测及相关分子检测1 、细胞 DNA 含量分布 (由细胞 DNA 降解方式检测细胞凋 亡)2 收集已固定的单细胞悬液约 5 X 1051 X 106/ml2 离心除去固定液， 3ml PBS 重悬细胞 ;21500rpm 离心， 5 分钟 ，弃去 PBS；2 加 PI 染液

4、1ml ，室温避光 20 分钟；2调整细胞浓度5 x 105/ml ;2 上机检测。2 、磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡1) 常规制备单细胞悬液 ,用 PBS 洗两次 .(若为全血要先溶血 ),取约 5 x 106个细胞，1500rpm 离心,弃上清，用 400 卩 l 1 x Binding Buffet悬；2) 分成 a、 b 、c、 d 、 e 五管，每管约 1 x 106个细胞a) 阴性对照，不加任何试剂；b) 阳性对照 ,加 2% 多聚甲醛固定 30 分钟 ,加AnnexinV 5 卩 l,室温n,用 1 x Binding Buffer 洗一次，弃上清再加190卩援冲液、10卩避

5、光15分钟c) 加10卩l PI ，避光孵育分钟；d) 力口 5卩l AnnexinV液，室温避光孵育 15min ;e) 力口 10卩l P和 5卩l AnnexinV液，室温避光孵育5min ；3) 每管各加 400 卩 l 1 x Binding Buffer4) 上机检测。注意 a. 操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞；b. 操作时注意避光；c. 反应完毕后尽快检测，最好在一小时内检测。3 、用单克隆抗体 APO2.7 检测细胞凋亡1) 放置 0.51 x 106个细胞到试管中；2) 室温离心 200g ， 6min ；3) 弃上清，加入100卩冷的(4 C)在PBSF溶液中含100卩

6、g/ml的digitonnin ，轻轻地重悬细胞，在冰上孵育20min ；4) 加入2ml冷的(4 C)BSF液，室温离心 200g ,6min ；5) 弃上清，加入 20卩l P标记的Apo2.7 单克隆抗体 和80卩l PBSI液，用vortex轻轻震荡，室温避光孵育 15分钟；6) 加入 2ml PBSF 液，室温离心 200g ， 6min ；7) 弃上清，加入 1ml PBSF 液重悬细胞；8) 避光保存，直到流式细胞仪检测。PBSF :含 2.5% FCS (v/v ) 和 0.01%NaN3(w/v )的 PBS。三、用流式细胞术进行 DNA 周期分析1 、方法：同 DNA 含量

7、检测2 、注意：单细胞浓度应约 106/ml ，以免影响检测的 CV 值和检测结果；制备完成后的标本应用光学显微镜检查其质量(如细胞是否聚集或过多碎片)，以保证得到足够的细胞含量；醛类固定会影响 PI 与核酸的结合。四、免疫荧光标记法1 、细胞膜上的免疫荧光检测法 间接标记法1) 制备单细胞悬液；2) 细胞计数，取出1 X 106个细胞于试管中；3) 用台盼蓝染色计活细胞数，要求活细胞数>9095% ；4) 在试管中加入一抗，(剂量按照说明书的要求)，孵育 3060 分钟；5) PBS 洗涤 1 2 次， 1500rpm ，离心 3 分钟，弃上清；6) 加入二抗，孵育 20 30 分钟；

8、7) PBS 洗一次， 1500rpm ，离心 3 分钟，弃上清 ;8) 加300卩I PBS ，上机检测不能及时上机检测，可 加 1ml 1% 多聚甲醛固定，可放置 1 周 )。直接标记法同间接标记法 在试管中加入荧光标记的抗体，混匀，孵育30分钟； 用PBS洗2次，1500rpm，离心3分钟，弃上清； 加300卩I PBS(PH=7.4)，上机检测。2、细胞膜内的免疫荧光标记法间接免疫荧光标记法1) 取已制备好的单细胞悬液，用 13%的多聚甲醛固 定30分钟(也可4 C保存过夜)；2) 用 PBS 洗两次，弃上清；3) 细胞膜打孔，加入0.1%皂素200卩室温10分钟；4) 用 PBS 洗

9、涤两次；5) 加入第一抗体，室温3060分钟，或4 C过夜，同时须设阴性对照或同型对照管；6) 用 PBS 洗涤两次；7) 加入二抗(荧光标记的抗体)室温 20 分钟，避光；8) 用 PBS 洗涤 1 2 次，弃上清；9) 重悬细胞于500卩IPB中，上机检测。直接荧光标记法同间接荧光标记法；加入荧光素标记好的抗体，避光 30 分钟(同时做同型对照管)；用PBS洗涤12次，弃上清；加300卩I PB上机检测。细胞膜上及细胞内双标记法(直标法)1) 取出已制备好的未固定的单细胞悬液1 X 10 6个细胞于试管中；2) 用 PBS 洗涤两次；3)加入用荧光素标记的抗体来标记细胞膜上的抗原，同时加上

10、阴性对照管，室温孵育 20 分钟；4) 在试管中加入1 %3%多聚甲醛1ml，固定30分钟；5) PBS 洗涤两次 1500rpm 3 分钟，弃上清 ;6) 打孔，加入0.1 %皂素200卩室温10分钟；7) 用 PBS 洗涤两次，弃上清 ;8) 加入用荧光素标记的抗体，标记膜内的抗原(标记膜内的抗体的荧光素的颜色与膜上标记的荧光素的颜色务必不相同)室温 20 分钟孵育 ；9) 用 PBS 洗一遍弃上清；10) 用300卩IPB重悬细胞，上机检测五、流式细胞术中的几点注意事项：1 、对照组的设置： 在流式细胞术中所测得的量都是相对值， 不是绝对值。如需知道绝对值时必须设置对照组样品。对照组样品

11、包括有 阴性对照和阳性对照。(1 )、阴性对照的设置2 在实验过程中，如做间接标记法，可设置与一抗无关 的实验，即在实验中不加一抗而只加上带有荧光标记的第二 抗体作为阴性对照管，作为阴性对照。2 在实验过程中，假设做直接标记法，可设置理论上的 阴性细胞作为阴性对照管，实验过程及步骤与实验组务必相 同。(做间接标记法时，同样也可同时设置“阴性细胞”的 阴性对照管作为阴性对照。2 在实验过程中， 假设做直接标记法， 可将实验组细胞， 取一管，加上与实验抗体所标记的荧光颜色相同的同型对照 来作为阴性对照。(2)、阳性对照的设置：在实验过程中如涉及到表达缺失或减少的实验，应设置阳性对照组，其设置方法与

12、阴性对照设置相同。2、几点建议：1) 在实验过程中， 在保证实验的科学性和准确性的基础 上，应尽量减少实验工序和过程。 由于间接标记法的工序多， 实验过程长，如再加之操作的不熟练，细胞更容易丢失和受 损，而造成实验结果的误差。因此，在条件允许的范围内， 建议尽量做直接标记法而不去做间接标记法，以保证实验的 真实性和准确性。2) 建议送检细胞一定要足够量， 一般要求1 X 106个细胞。不要过少。因为，如细胞太少检测时样本流量相对会增 大从而影响变异系数，结果也不可信。细胞量也不宜过多， 因细胞量太多加入的抗体或染料相对不足，结果也由此受影 响。3) 同一种细胞需同时做双标记时， 须做双标记的同

13、型对 照，且两种抗体所标记的荧光颜色务必不同。植物细胞1. 教材分析学生在已经知道显微镜的基本结构及功能，并能正确操作 显微镜的基础上，进一步通过制作临时装片并观察植物细胞， 学习植物细胞的基本结构，是本节教学的主要目标。本节教材在内容和活动的安排上遵循认知心理学和概念建 构的基本原理， 及先有学生的观察、 实验和讨论活动， 在活动 中引导学生逐步建构概念，然后教材完整地呈现概念。想一想，议一议活动创设了一个学生在操作显微镜观察植 物材料是最容易出现的认知错误， 通过强烈的认知冲突， 激发 学生探讨如何能在显微镜下清晰地观察到植物细胞。 在此基础 上再进一步引导学生， 应该根据材料的不同特点和

14、保存时间的 长短制作不同的玻片标本。 最后， 教材比较全面地介绍了玻片 标本的基本类型。同样，关于植物细胞的基本结构及其功能的内容，教材也 是基于学生已有的显微镜的操作技能， 引导学生亲自制作植物 细胞临时装片， 通过自己的观察活动， 先从感性上认识植物细 胞的形态及基本结构， 然后从知识的系统性上完整地呈现这些 内容，帮助学生建构植物细胞的基本结构及其功能的完整概 念。在制作并观察植物细胞临时装片的实验中，教材处理列出 了详细的实验步骤之外， 还提供了多种实验材料， 这里有两个目的：意识不同材料的作用不同。 利用洋葱鳞片叶制作内表皮 细胞的临时装片，是作为示范材料提供的， 材料易得，制作简

15、单，效果明显。而随后提供的黄瓜、苦瓜和黑藻等材料，则可以在前者的基础上，让学生根据已有的经验选择制作，进一步巩固刚学习过的制作临时装片的基本方法。二是提供多样的材料让学生观察，可以看到植物形态的多样性， 同时对比总结出 植物细胞共同的结构特点。本节实验中要求学生绘制植物细胞结构简图，尽管其位置在实验中，但在实际教学时，可以按教材顺序进行， 也可以在 学生全面学习过植物细胞基本结构的基础上，再要求学生绘 图。这两种方法中，后者适于动手能力相对较差的学生。教师可根据实际情况灵活安排。植物细胞的基本结构是本节教学的重点内容之一。限于课程标准的要求和学生的认知水平，教材知识简单介绍了植物细 胞的壁、膜

16、、质、核四种基本结构，以及液泡、线粒体、叶绿 体三种比较重要的细胞器。 线粒体和叶绿体的具体知识没有展 开，后面的章节中会有进一步的介绍，教师在此并不需要加深和拓展。这里还需要特别提醒教师， 尽管植物细胞模式图中没 有画出植物细胞的其他结构，教材中也没有提到其他细胞器， 但是，教师在教学时应该告诉学生， 细胞质中除了上述一些细 胞结构之外，还有很多其他细胞器结构，这些结构同样重要， 在以后的生物课程中将会进一步学习。 这种交代会避免学生形成植物细胞中只有这些结构的错误概念， 同时也可激发学生进 一步学习生物学的兴趣。2. 学情分析学生在学习了显微镜的使用后，迫切想通过显微镜观察身 边生物及自身

17、细胞的结构， 这种强烈的探知欲望正是学生学习 本节知识的动力， 但是学生很容易在学习过程中出现实验的盲 目性以及操作的混乱， 所以在实验前对学生要有详细的实验要 求，从而保证实验的顺利进行。 对实验材料的观察， 学生一时 还难以完全做到两眼同时睁开观察， 更难以做到一边观察一边 画图，所以，教师在实验过程中要不断提醒学生注意观察的习 惯。学生在绘制生物细胞图时可能会有部分学生临摹课本的模 式图，所以，教师要求学生在绘图时一定要求做到真实性。二、教学目标 知识与技能 ： 1.能分辨玻片的基本类型。 2.阐明植物细胞的基本结构。过程与方法 ：1.能熟练操作显微镜。2.能成功完成临时装片的制作并观察

18、，同时培养良好的科 学实验习惯。3.练习绘制植物结构简图。情感态度与价值观 ：1.严谨的实验态度和习惯的培养。2.根据自己的观察，客观真实地绘制植物细胞结构简图。3. 从微观的生物世界体会生命的神奇与美丽。三、教学重难点1.制作并观察临时植物细胞的临时装片。2.植物细胞的基本结构。四、课前准备1.教师准备一些自己演示所要用的植物细胞材料、学生分 组平均 2 人一组、显微镜。2.学生准备一些自己想观察的植物细胞材料。五、课时安排2 课时六、教学策略创设情境导入新课实验分析教师实验演示 组织学生实验学生汇总实验结果并分析师生总 结植物细胞结构学生课堂练习巩固七、教学建议本节课由于实验部分较多，建议

19、教师先进行演示实验，然 后有步骤的进行洋葱鳞片叶表皮的实验， 在熟悉的基础上再进 行其他材料的自由操作实验， 并及时对实验过程和结果进行评 价。八、学法建议规范的实验操作对养成良好的实验习惯非常重要，所以，本节课学生要特别重视实验的规范操作，同时对实验的观察要建立在真实的基础上，尊重事实对培养科学素养非常重要，所以在学习的过程中，一定要从事实出发，得出实验结果，学会 分析总结实验过程中出现的问题并及时修正。九、教学过程（一）课前复习活动：要求各小组一人指挥一人操作，将显微镜调试到最佳对光 状态。（设计意图：可以让学生复习并熟练显微镜的使用。）（二）导入新课：创设情境：学生阅读课本的“想一想，议

20、一议”并投影思 考。在学会了使用显微镜后，同学们是否很想通过看看生物细 胞在显微镜下是什么样子啊？（学生：是的），大家都有同感，我们的萌萌同学也很迫不及待的想看看，但是大家认为萌萌能看到菠菜叶细胞吗？我们一起来试一下吧。每个小组现在把菠菜叶放在显微镜下进行观察，看看能看到什么？学生：一片漆黑，什么也看不到。教师：为什么看不到菠菜叶细胞呢？投影：思考能否将一个洋葱或一片菠菜叶直接放到显微镜下观察呢？要看得清楚被观察的物体，应该要让被观察的材料具备什 么样的条件？学生：不能，因为菠菜叶太厚了不透光，在光学显微镜下 观察时，实验材料必须薄而透明，才能观察到细胞结构教师：很好！那么现在要怎么做才能把材

21、料变成薄而透明 呢？是的，必须要做成玻片标本。（设计意图：通过创设学生实际操作中非常容易发生的错 误的情景，引导学生认识到对实验材料处理的必要性及处理材 料的不同方式。激起学生学习的热情。）（三）授新课：教师：什么是玻片标本呢？有哪些类型？不同玻片标本对 生物材料的处理有何不同？学生活动：学生结合课本总结出切片、 涂片和装片的区别， 并进一步区分永久装片和临时装片。小结：投影：投影出玻片标本分类及特点设问我们到医院去体检的时候，有一项是进行血常规的 检查，那么进行验血的时候， 医生对血液的处理属于哪种处理 方式？同学们再思考一下，要观察植物茎的结构时，需要把茎 切成薄片然后做成装片，那么这样做

22、成的是什么装片呢？（设计意图：通过比较学习，自主总结出玻片的类型，并 且能和实际生活中的例子相结合。）现在我们首先来看看怎么制作并观察洋葱鳞片叶表皮细 胞。1. 制作植物细胞临时装片 投影视频：制作临时装片的过程 （1 ）引导学生认真阅读课本实验 “制作并观察植物细胞临 时装片” 的目的要求、 材料器具和实验方法步骤， 然后观看视 频演示实验。（2）教师演示制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片的方 法，并同步讲解每个步骤的要点和技巧， 并让学生标出每步的 关键词。进一步总结出实验步骤：擦、滴、撕、展、盖、染、 吸（投影：每一步的步骤和关键词）（3 ）学生动手实验， 在学生实验过程中， 要求学生在实

23、验 的同时主要围绕以下问题展开思考： 投影： 擦：为什么要擦拭 干净？滴：滴水过多会怎样，过少会怎样？ 撕：为什么撕取的材料不能太多？ 展：为什么不能重叠，什么情况下会重叠？ 盖：为什么要从一侧缓缓盖上盖玻片？ 染：为什么要染色？染色对细胞产生什么影响？所以生物 材料都必须要染色吗？吸：为什么要在盖玻片滴碘液的另一侧吸引？教师和学生一起再一次总结整个装片制作过程的要点和技巧：擦：将玻片擦拭干净，避免视野中出现杂质、污物。滴：水滴太小容易产生气泡或干涸，影响观察；水滴太大实验材料容易漂浮移动，水会溢出载玻片而污染显微镜。撕：撕取洋葱鳞片叶内表皮时一定要薄，不能带叶肉，大 小适中。展：一定要展平，

24、避免细胞重叠不易观察。盖：盖玻片放下时要匀速而缓慢，避免盖玻片下出现气泡 而影响观察。染：染色可凸显细胞核，便于观察。染色时标本全部浸润 在碘液中， 盖玻片上无碘液。 不能直接在显微镜的载物台上进 行染色，否则会污染显微镜。有色生物材料不需要染色。吸：用吸水纸在另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。投影：临时装片制作技能测试评价表学生之间根据投影的评价表进行相互评价（设计意图：演示示范，规范操作，问题促思，关注细节。强调因果，注重分析，师生互动，明究原理。）2. 制作其他植物细胞临时装片根据上面的实验制作经验，同学们可以继续用其他材料制 作临时玻片学生继续进行制作黄瓜表层果肉或黑藻叶片临时装片或者

25、让学生自主选择准备的材料。）让学生自己制作其他植物细胞临时装片。在这一步，教师要提醒学生注意：不同的材料取材方法 不同；考虑是否要染色（设计意图：自主探究，合作交流初步感知细胞的异同。）3. 观察植物细胞同学们，想知道自己制作的装片是否成功了呢，那就需要 进行观察，看看是否能成功的看到细胞结构。投影：投影洋葱鳞片叶内表皮细胞、黄瓜表层果肉细胞和 苦草叶细胞的显微镜下的实景图，并且结合植物细胞的模式 图，让学生逐个结构仔细观察。可提醒学生用低倍镜观察，并且没必要观察一张新装片就降 1 次镜头，升一次镜头。一般情况下，直接换上新玻片标本即可。如果物镜模糊，稍微调节细准焦螺旋就可以了。在学生观察的过

26、程中，鼓励学生发现并分析各种问题出现的原因： 细胞聚集在一堆， 无法看清楚单层细胞是什么原因？如何区分细胞和气泡？有大量气泡是什么原因，怎样消除？结合植物细胞模式图，引导学生注意：能否看到清晰的细胞膜； 细胞核为什么在细胞的一侧而不在中央； 是不是 所有的植物细胞都有叶绿体；还有哪些结构看不到。最后让学生描述洋葱鳞片叶表皮细胞和学生另外观察的植 物细胞结构，各组根据观察结果说说有什么相同处。（设计意图：初步认识细胞的结构，促进学生发现、分析 问题的能力。）4. 绘制植物细胞结构简图教师：同学们，你们想把今天用肉眼看不到的显微镜下的 细胞形态永久的保留下来吗？那么就需要我们用笔把它们描 绘出来。

27、那么怎样才能画好细胞简图呢？教师演示：一边观察一边绘图，两眼都睁开。要求学生根据课本“生物图的画法及注意事项”，绘制洋 葱鳞片叶内表皮细胞结构简图。 因为洋葱鳞片叶内表皮细胞的 结构典型， 而且容易观察， 容易绘制。 在此基础上再绘制其他 植物细胞图。同时列出绘图要求。投影：生物图绘图技能测试学生根据测试进行绘图，并且相互打分评价。最后教师展 示优秀作品。（设计意图： 激发兴趣，自主学习。规范绘图， 领悟方法。 ）5. 植物细胞的基本结构展示小组学生画好的各种植物细胞简图，并和学生一起总 结共同结构特点， 得出植物细胞具有的相同结构 （细胞壁、 细 胞膜、细胞核、细胞质、液泡、叶绿体），然后指

28、导学生和书 本上的植物细胞结构模式图进行对比， 说明线粒体在光学显微 镜下无法看到的原因，并进一步用多媒体展示植物细胞的详细 结构模式图，让学生明白植物细胞还有很多其他更复杂的结 构，为以后的学习打下基础。最后总结植物细胞的结构和功能。（设计意图：自主总结，学会通过资料分析得出结果的能力。）十、教学反思本节课的内容很多，最好用两节连堂上课，才可以很好的 完成教学内容。实验课对学生动手能力的培养是最重要的，所以不能过分要求学生实验的规范， 允许学生在一定范围内的犯 错，这样可以让学生很好的发现细节错误， 对掌握实验过程会 更好，另外学生画生物图的时候一定要求真实性。但是实验课的课堂秩序是最难把握

29、的， 还需要做更详细的课前准备， 包括 对学生的实验前的纪律要求。卜一、板书设计植物细胞驶片标再装片类型林斜的不同处理方法/nJ Et ,' Y" 丁门；切片保存时间涂片临时誠片汞久玻片二、制作与观察洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片 实验目的：实验材料：洋葱鳞片叶内表皮细胞制作步骤：擦、滴、撕、放、展、盖、染、吸 观察：认识洋葱鳞片叶内表皮细胞的结构三、练习画细胞结构简图绘图要领：真实、规范、完整四、植物细胞的基本结构和功能十二、关键词1检测前的准备1.1根据检测委托书中要求的检测时间提前12天通知受检单位，要求受检单位提前做好相关检测准备工作。1.2检测人员到达检测现场后，应严

30、格遵守加油站管理规定，使用隔离墩设置检测区域，防止无关人员、车辆进入检测现 场。1.3 了解加油站油气回收系统的相关信息，包括加油站名称、系统配置、加油机台数、加油枪数量、油罐数量、油罐容积 等，并填写在原始记录上。1.4检测前要对测试设备状态进行检查确认，检查设备运行 是否正常，设备运行正常才可进行检测。1.5检测人员穿着防静电服，准备好防爆工具。设备连接时 须使用防爆扳手，确保操作安全。2密闭性检测2.1检测仪器和附件检测设备：智能测试仪（IW HJZH H型）秒表氮气和氮气瓶，储存氮气的高压氮气瓶应带有两级压力调节软管、地线、泄漏探测溶液“ 0”点的校准。按智能测试仪操作说明书选择“设备

31、 自检”界面，打开设备的进气口和出气口，按“ 键，对设备进行校准。设备每一次开关机，都需要做“ 点的校准。t = V265F公式 1式中：t 将系统中油气空间的压力从 0 Pa提高至500 Pa所需的最少时间，min ;V检测所影响的油气空间，L;F充入系统的氮气流量，L/min ；2.3限值力叶由油气回收系统密闭性最小剩余压力限值见表1。油气回收系统密闭性压力检测值应大于等于表1规定的最小剩余压力限值。2.4检测步骤Pa时，关闭氮气阀门，秒表复零，调节流速阀，当压力值 在500Pa时，关闭流速阀，并按“由”键，同时启动秒表开始计时，分别记录第1、2、3、4、5分钟的压力值。如果实际油气空间数

32、值处于表1中所列两油气空间数值之间时，根据公式2，计算出本次密闭检测的最小剩余压力限值。P = (V- Vn)(Pn+1 -Pn)Vn+1 -Vn + Pn公式2公式中：P实际油气空间对应的最小剩余压力限值，V实际油气空间数值，L;Pa;Vn -L；表1中小于且与实际油气空间数值V相邻的值，Vn+1值，L;表1中大于且与实际油气空间数值V相邻的Pn 表1中与 V 对应的最小剩余压力限值，Pa;Pn+1表1中与Vn+1对应的最小剩余压力限值，Pa。将第5分钟的压力值与最小压力限值进行比较。当第5分钟的压力值大于等于最小剩余压力限值时，检测结果合 格。按”键，退出本项操作。3液阻检测 3.1限值加

33、油站油气回收管道内液阻压力限值见表2通入氮气流速（L/min）液阻最大压力（Pa）18<4028<9038<155表23.2检测步骤打开氮气瓶阀门，设置输出压力为35 kPa，按“画”键，调节测试仪上的流速阀，让氮气分别以18L/min 、28 L/min、38L/min的流速通过设备，当各流速稳定后， 记 录下对应流速下的压力值。当在三个流速下测试完成后，将 记录下的压力值与液阻限值进行比较。当三种流速下对应的压力值全部小于对应的液阻限值 时，检测结果合格。按“丽 ”键，退出本项操作。关 闭调速阀及氮气瓶阀门。4气液比检测 4.1检测仪器和附件检测设备：智能测试仪（IW H

34、JZH 型）加油枪适配器。过滤器总成。防止杂质损伤设备，使用时通过快装接头连接在测试仪进气口。密闭测试工装。用来检测测试设备连接后的密封性。由1个模拟加油枪枪管、真空源（吸气球）、堵盖组成，使用时要根 据被测对象来选择相应的适配器。氮气和氮气瓶、地线、检测用油桶、秒表、润滑剂4.2检测准备打开流速阀，用真空压力源通过“氮气进口”，使设备 产生1245Pa的真空压力，待压力稳定后，关闭流速阀，并 按“J ”键，同时开启秒表计时，3分钟后，真空压力保持在1230Pa以上视为通过自检。自检合格后才能进行检 测。并保证接地装置连接正确4.3检测要求范围内的某一流量，每支加油枪获得2个气液比；未安装在 线监测系统的加油站，仅将加油枪开启至加油机允许的最大 流量，每支加油枪获得 1个气液比。按照加油枪的每档流速 检测每支加油枪的气液比。4.4限值加油枪的气液比应在大于等于1.0和小于等于1.