第二代捕获杂交法_HC_检测HPV_DNA在宫颈癌筛查中应用_钟奇志

1、第二代捕获杂交法(H C- 检测H P V-D N A 在宫颈癌筛查中应用钟奇志广东省佛山市三水区妇幼保健院528100中国图书分类号R737. 33文献标识码B文章编号1001-4411(2008 07-0974-02【摘要】目的:寻找一种方便、有效的检测宫颈H P V (人乳头瘤病毒 感染及其分型的检验方法。方法:以自愿的方式选择聚合酶链反应(P C R 检测法和第二代杂交捕获法(H C - 检测H P V 感染率。对其结果进行统计学分析, 检验H C-与P C R 的结果是否存在差异。结果:第二代杂交捕获法(H C- 检测人乳头瘤病毒(H P V D N A 检出率达98%以上, 与P

2、C R 检出率基本相符, 通过统计学方法检验无差异性。结论:HC-检测H P VD N A 可成为一种广泛应用的临床检验技术, 作为筛查宫颈癌及癌前病变的首选方法。【关键词】第二代捕获杂交法(H C- 宫颈癌筛查高危型H P V (人乳头瘤病毒 宫颈癌是严重危害妇女健康与生命的常见病。国际医学权威证实:宫颈癌发生与高危型H P V (人乳头瘤病毒 16, 18,31, 33, 35,39, 45, 51,52,56, 58, 59和68型等13个型H P V 感染密切相关, 特别是16和18型主要引起宫颈癌1, 2, 因而有必要寻找一种方便、有效的检测宫颈H P V (人乳头瘤病毒 感染及其分

3、型的最佳检验方法。1资料与方法1. 1资料来源2004年6月2006年7月本院妇科门诊病人, 年龄1864岁, 按乐杰主编的第6版妇产科学诊断标准诊断出有慢性宫颈炎(宫颈糜烂 、宫颈尖锐湿疣的已婚妇女, 特别是有家族病变者共1700例。做H P V 检查的同时进行膜式液基薄层细胞学(T C T 检测。以自愿的方式选择聚合酶链反应(P C R 检测法和第二代杂交捕获法(H C- 进行H P V 感染情况检测。1. 2方法1. 2. 1标本采集两种检验方法均要求3天内不要作阴道冲洗或使用阴道内药物; 24h 内不要有性生活; 非月经期做检查。1. 2. 2H C-I I 检测法按H C-I I 法

4、要求暴露宫颈后, 用专用小刷子置于宫颈口与黏膜交界处逆时针转3圈, 停留10s , 将小刷子放于专用试管中, 盖上盖子在室温中保存备用, 采用H C-I I -基因杂交信号放大系统可检测出13个高危型H P V -D N A 。1. 2. 3P C R 检测法按P C R 检测法要求用专用棉拭子置于宫颈口与黏膜交界处取脱落细胞标本, 用p H 7. 0、66m m o l /L磷酸盐缓冲液洗涤, 离心后用蛋白酶K 于55水浴作用3h , 再于9510m i n 灭活蛋白酶K 、收集离心后的上清液,-20冰箱保存备用, H P V 检测试剂用量及实验步骤按说明书:试剂用量为每50l 反应体系中,

5、 含各型引物50m o l /L, 4种脱氧三磷酸核苷各200m o l /L, T a q D N A 聚合酶1. 5U , 模板用量10l , 反应步骤为9260s 变性、55120s 复性、7290s 引物延伸, 共进行35个循环。每次设试剂空白管和已知阳性模板管对照, 扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳, 溴乙锭染色, 在紫外光下观察结果并照相记录。可检测2个高危型1. 2. 4仪器的选择HC-法:选用美国代因公司的型号D M L 2000;P C R 方法:选用型号美国P E 5700;H P V 检测试剂盒购自伊利康生物技术有限公司, 试剂用量及实验步骤按说明书进行。1. 3统计学处理采

6、用2检验, 对比两种方法的H P V 感染检出率及其分型, 检验H C -与P C R 的结果是否存在差异。2结果1700例病例, 以P C R 检测法检测H P V 感染490例, 以H C-检测法检测出H P V 感染478例, 两种方法检测均阳性的有471例, 两种方法检测的结果不存在明显的差异(P>0. 01 。3讨论3. 1目前检测H P V 的方法有聚合酶链反应(P C R 法、斑点杂交法、细胞学检测法、第二代杂交捕获法等。而第二代杂交捕获法(H C- 检测人乳头瘤病毒(H P V D N A 是目前国际公认的子宫颈H P V (人乳头瘤病毒 感染的最佳方法3, 4。H C-

7、是一种采用免疫技术并通过化学发光使基因信号放大的检测方法, 能同时检测13个型H P V (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45,51, 52, 56,58, 59和68 , 国外已常规用于子宫颈癌的筛查5。P C R 只能检测出H P V (16, 18两种高危型H P V ; 斑点杂交法操作繁琐, 不适于临床应用;细胞学检测法阳性率低, 只有30%50%。3. 2H C -I I 是筛查宫颈癌及癌前病变的首选方法第二代基因杂交捕获技术, 又称为基因杂交信号放大技术, 是一种免疫技术通过化学发光使基因杂交信号放大的检测方法, 具有高度敏感性和特异性。H C-无需基因扩增, 可

8、检测13种H P V 高危型, 它是唯一取得美国F D A 认证的快速检测H P V 高新技术, 其检测的敏感性为88%100%,特别是阴性预测值高达99%,H C-(- 就可以确认没有H P V 感染, 而且检测还可以报告病毒负荷(V i r u sL o a d 以追随其消长。因此, H C-取材方便, 依从性好, 有高的敏感性和特异性, 低的假阴性和假阳性, 重复性好, 检测设备易于操作, 适合于大人群筛查。33P C R 虽然P C R 强, 可·974·中国妇幼保健2008年第23卷以检测微量D N A 的含量, 但不能混有任何蛋白酶、核酸酶及T a q 酶抑制剂

9、。取材较复杂, 检验工序比H C-I I 复杂, 需要引物的合成, 引物是决定P C R 结果的关键, 且需基因扩增, P C R 只能检测出H P V (16, 18 两种高危型H P V 。从本文结果可以得出, 通过对比两种方法的H P V 感染检出率及其分型。第二代杂交捕获法(H C- 检测人乳头瘤病毒(H P V D N A 检出率要达98%以上, 与P C R 检出率基本相符, 通过统计学方法检验无差异性, H C-H P VD N A 检测可成为一种广泛应用的临床检验技术, 作为筛查宫颈癌及癌前病变的首选方法。4参考文献1B o s c hF X , L o r i n c z A

10、 , M u ñoz Ne t a l . T h ec a u s a l r e l a t i o nb e t w e e nh u -m a np a p i l l o m a v i r u sa n dc e r v i c a lc a n c e r .JC l i nP a t h o l , A p r , 2002,55:2442652崔满华, 郑鹏生, 黄冰玉e t a l . 尖锐湿疣及子宫颈癌组织人乳头状瘤病毒D N A 的比较研究. 中华妇产科杂志, 1996,31(3 :1633Wa l b o o m e r s J M M, M a r c e

11、 l V J , M i c h e l e M e t a l .H u m a np a p i l l o m a v i r u si san e c e s s a r yc a u s eo f i n v a s i v ec e r v i c a l c a n c e rw o r l d w i d e . JP a t h o l , 1999, 189:12194徐铃, 齐凤菊, 黄扬中. 肛门生殖器区肿瘤组织中H P V 的快速检测和分型. 病毒学报,1999, 15:3483525C u z i c kJ , B e v e r l e y E , H o Le

12、t a l .H P Vt e s t i n gi n p r i m a r ys c r e e n i n go fo l d e r w o m e n . B r i t J C a n c e r , 1999,81:554558(2006-10-24收稿编校邹庆红M M P -9、P C N A 在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义孙淑娥田立粮于红丽哈尔滨医科大学附属第五医院妇产科(黑龙江大庆163317中国图书分类号R737. 3文献标识码B文章编号1001-4411(2008 07-0975-03【摘要】目的:探讨M M P -9、P C N A 在卵巢上皮性肿瘤中的表达和他

13、们在卵巢上皮癌的浸润和转移中的作用。方法:选择临床病理资料齐全的卵巢上皮性肿瘤蜡块标本76例, 利用S -P 免疫组化方法检测M M P-9、P C N A 在其中的表达。结果:两者在卵巢上皮癌组织中的阳性表达明显高于交界性、良性肿瘤, 呈正相关(P<0. 05 ; M M P-9在卵巢上皮性恶性肿瘤的表达与肿瘤的分化程度有显著相关性。结论:MM P-9、P C N A 在卵巢上皮性肿瘤中的表达明显上调;M M P -9与卵巢上皮癌的浸袭、转移有关, 可作为预测转移潜能的指标, P C N A 可作为卵巢癌增殖的指标。【关键词】卵巢肿瘤MM P-9PC N A 免疫组化V a l u e

14、 o f MMP -9a n dP C N Ae x p r e s s i o ni ne p i t h e l i a l o v a r i a n t u m o rS U NS h u -E , T I A NL i -L i a n g , Y UH o n g -L i . T h e F i f t hA f f i l i a t e dH o s p i t a l o f H a r b i nM e d i c a l U n i v e r s i t y , D a q i n g 163317, C h i n aAb s t r a c t Ob j e c

15、t i v e :To i n v e s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n o f M M P-9a n d P C N Ai n e p i t h e l i a l o v a r i a n t u m o r a n d t h e i r e f f e c t i n t h e i n v a -s i o n a n d m e t a s t a s i so f e p i t h e l i a l o v a r i a nc a n c e r . Me t h o d s :Se l e c t e d 76p a r

16、a f f i nb l o c k so f e p i t h e l i a l o v a r i a nt u m o r sw i t hc o m p l e t e c l i n i c a l p a t h o l o g i c a l d a t a , a n d u s e d S -Pi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y t o m e a s u r e t h e e x p r e s s i o no f M M P-9a n dP C N Ai nt h e m . R e s u l t s :T h e i

17、 r p o s i t i v e e x p r e s s i o nr a t e i n e p i t h e l i a l o v a r i a nc a n c e r w e r e o b v i o u s l yh i g h e r t h a ni nb o u n d a r ya n db e n i g nt u m o r s , s h o w i n g p o s i t i v ec o r r e l a t i o n(P<0. 05 . T h e e x p r e s s i o n o fM M P -9i n e p i t

18、h e l i a lo v a r i a n t u m o r s w a s s i g n i f i c a n t l y c o r r e l a t i v e w i t h t h e d i f f e r e n t i a t e d l e v e lo f t u m o r s . C o n c l u s i o n :Th e e x p r e s s i o n s o f M M P -9a n dP C N Ai ne p i t h e l i a l o v a r i a nt u m o r a r e o b v i o u s l y i n c r e a s e d ; M M P -9i s r e l a t e dt o t h e i n v a s i o n a n dm e t a s t a s i s o f e p i t h e l i a l o v a r i a n c a n c e r , a n di t m a ys e r v e a s a p r e d i c t i n gf a c t o r o f m