皮肤科免疫荧光技术ppt课件

1、皮肤科免疫荧光技术皮肤科免疫荧光技术1;.免疫荧光技术概述免疫荧光技术概述n原理原理n 将不影响抗原抗体活性的荧光色素标志在抗体或抗原上，与其相应的抗将不影响抗原抗体活性的荧光色素标志在抗体或抗原上，与其相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反响。原或抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反响。n分类分类n直接法：将荧光素标志的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反响。直接法：将荧光素标志的抗体与标本中的抗原直接结合进而荧光反响。n间接法：将荧光素标志的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反响，构成抗原间接法：将荧光素标志的抗抗体与相应的特异性抗体抗原复合物反响，构成抗原-

2、抗体抗体-抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反响。抗抗体复合物体系，进检测的一种特异性荧光反响。2免疫荧光原理表示图免疫荧光原理表示图3临床常用荧光素染料临床常用荧光素染料异硫氰酸荧光素FITC吸=490-495nm 、发=520-530nm、黄绿色荧光 四乙基罗丹明RIB200吸=570nm、 发=595600nm、呈橘红色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明TRITC吸=550nm、 发=620nm、呈橙红色荧光4皮肤直接免疫荧光检测皮肤直接免疫荧光检测n顺应症：顺应症：n非感染性大疱性皮肤病非感染性大疱性皮肤病n天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA大疱性皮

3、病、获得性大疱性表皮松解大疱性皮病、获得性大疱性表皮松解等等n结绨组织病：如红斑狼疮等结绨组织病：如红斑狼疮等n各种血管炎各种血管炎n皮肤肿瘤皮肤肿瘤n某些感染性皮肤病某些感染性皮肤病5皮肤间接免疫荧光检测皮肤间接免疫荧光检测顺应症：顺应症：血清中各种抗微生物抗体测定血清中各种抗微生物抗体测定如：梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等如：梅毒螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、疱疹病毒等血清中各种本身抗体的测定血清中各种本身抗体的测定系统性疾病：如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等系统性疾病：如红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病等大疱性皮肤病：如天疱疮抗体等大疱性皮肤病：如天疱疮抗体等糖尿病：如抗胰岛细

4、胞抗体等糖尿病：如抗胰岛细胞抗体等6操作方法及流程操作方法及流程放入生理盐水送放入生理盐水送检检手术取材手术取材外观正常未受累外观正常未受累皮肤皮肤直径直径1-2mm带疱皮带疱皮损损米粒大小水疱米粒大小水疱直接荧光患者标本采集直接荧光患者标本采集7操作方法及流程操作方法及流程n冰冻切片、染色、镜检冰冻切片、染色、镜检组织修材，成组织修材，成适宜冰冻包埋适宜冰冻包埋块的大小块的大小冰冻切片冰冻切片抗原与荧光抗抗原与荧光抗体结合体结合荧光显微镜下荧光显微镜下镜检及成像，镜检及成像，打印报告打印报告8操作方法及流程操作方法及流程9n间接免疫荧光染色步骤间接免疫荧光染色步骤操作方法及流程操作方法及流程

5、10实验室操作图片实验室操作图片直接荧光组织修材直接荧光组织修材冰冻切片冰冻切片11实验室操作图片实验室操作图片荧光染色荧光染色水浴箱孵育水浴箱孵育12实验室操作图片实验室操作图片荧光显微镜镜检荧光显微镜镜检13免疫荧光镜下天观天疱疮患者标本免疫荧光镜下天观天疱疮患者标本IgG抗体抗体镜下描画： 镜下可见荧光抗体IgG于表皮棘细胞间呈网状堆积，荧光阳性。14免疫荧光镜下天观类天疱疮患者标本免疫荧光镜下天观类天疱疮患者标本C3补体补体荧光镜下： 镜下可见荧光标志的C3补体于表皮基底膜带呈线状堆积，荧光阳性。15免疫荧光在大疱性皮肤病中的意义免疫荧光在大疱性皮肤病中的意义大疱性皮肤病大疱性皮肤病沉

6、积部位沉积部位荧光抗体荧光抗体沉积形状沉积形状靶抗原靶抗原寻常型天疱疮寻常型天疱疮细胞间细胞间IgG、C3（少数有（少数有IgM和和IgA）网状网状Dsg3可有可有Dsg1增殖型天疱疮增殖型天疱疮细胞间细胞间同上同上网状网状Dsg3可有可有Dsg1落叶型天疱疮落叶型天疱疮细胞间细胞间IgG或或IgG、C3网状网状Dsg1副肿瘤性天疱疮副肿瘤性天疱疮细胞间（少数细胞细胞间（少数细胞间和表皮下）间和表皮下）IgG或或IgG、C3网状或线网状或线状状少数少数BP230IgA天疱疮天疱疮细胞间细胞间IgA（偶有（偶有C3、IgG和和IgM）网状网状-疱疹样天疱疮疱疹样天疱疮细胞间细胞间IgG、C3网状网状-大疱性类天疱疮大疱性类天疱疮基底膜带基底膜带IgG、C3或仅有或仅有C3（少数有（少