生化实验常用溶液配制

1、生化实验常用溶液的配制 一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白 （BSA ）:加 100mg 的牛血清蛋白 （组分 V 或分子生物学试剂级， 无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中

2、，而不是将水加入蛋白） ，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶 解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20Co1mol/L二硫苏糖醇（DTT ）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。 或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl ）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium aceta

3、te）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约 90ml水中，用冰乙酸调溶液 的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L ）,混合后形成 EDTA的三 钠盐。或称取 186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （）,然后用水 定容至 100ml 。1mol/L HCl :加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IP

4、GT （异丙基硫代-0D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份 贮存于 -20C。1mol/LMgCI2:溶解20.3g MgCI2 6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟） 于足量的异丙醇中， 定容到10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20C。20mg/ml蛋白酶 K （proteinase K）:将200mg的蛋白酶 L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直 至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNase f

5、ree RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N 氢氧化钠 （NaOH ）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中 （磁力搅拌器搅拌） ， 氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10% SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅 拌器搅拌直至

6、完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。 100%三氯乙酸（ TCA） :在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直 至完全溶解。 （稀释液应在临用前配制）2.5% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚一3半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰 胺（DMF ）,用铝箔包裹装液管，贮存于 -20 C。100 Denhardt 试剂（Denhardts regent）100 Denhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度

7、配制100ml溶液各成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20C贮存。10 标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCI2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选） 水5ml 1mol

8、/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80C可贮存至少 6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmo

9、l/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20% PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量|300mmol/L柠檬酸三钠（二88.2g水）175.3g3mol/L氯化钠补足1L水溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9

10、L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为 0.1%。在37C温浴至少12h,然后 在15 psi条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用 DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide ）直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（pho

11、sphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4 H2O）贮液： 溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4 ）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为 1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93

12、906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存 DNA ）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl ( pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCl buffer ）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388

13、.2468.0567.8667.671.37.4767.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液50 Tris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱 1mol/L乙酸 100 mmol/L EDTA 水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 补足1L5 Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L

14、EDTA (pH 8.0) 补足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue )加1g水溶性钠型溴酚蓝于 100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1%二甲苯青 FF （xyle ne cyan ole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide ）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗

15、糖（400型）0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)1.8g15mg25mg 补足到10ml6 聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量6 碱性凝胶上样液（室温贮存）0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)1.5g 补足到10ml6 x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.

16、25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型） 水2.5ml 1 %溴酚蓝2.5ml 1 %二甲苯青 FF1.5g补足到10ml6 甘油凝胶上样液（4 C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)3ml3.9ml6 蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量n0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1

17、 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)4g补足到10ml10 十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1% SDS50%甘油水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 % SDS5ml补足到10ml二.常用培养基I D拉关苴LB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼

18、脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培 养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培 养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水 中，再用水补足到 100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB 培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取

19、物24g甘油|4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中， 使终体积为100ml。 高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2 YT 培 养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂 粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培 养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖2

20、0g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭 菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin ） （100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素( carbenicillin )( 50mg/ml )溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓

21、度添加于生长培养基。甲氧西林( methicillin )( 100mg/ml )溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以37.5ug/ml终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素( kanamycin )( 10mg/ml )溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以10ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。氯霉素( chloramphenicol )( 25mg/ml )溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以

22、12.5ug/ml 25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。链霉素( streptomycin )(50mg/ml )溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以 10ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸( nalidixic acid )( 5mg/ml )溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。四环素( tetracyyline)(10mg/ml)溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中， 或者将无碱的四环素溶于无水乙醇

23、， 定容至 10ml。 分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20 C贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。一、常规溶液(一 )1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution , PBS) 甲液： 1/15mol/L Na2HPO4 溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至 1000ml乙液： l/15mol/L KH2PO4 溶液KH2P049.07g蒸馏水加至 1000m1分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液 ,见下表 :pH甲液 ml乙液 mIpH甲液 ml乙液

24、 mI5.292.597.56.8150.050.05.595.095.06.9860.040.05.9110.090.07.1770.030.06.2420.080.07.3880.020.06.4730.070.07.7390.010.06.6440.060.08.0495.05.0(二) 0.3台盼兰染液100ml 生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸称取台盼兰 (Trypan blue) 粉 0.3 克，溶于 过滤除渣，装入瓶内室温保存。（三）0.5酚红指示剂酚红 0.5g0.1N（0.4 ）NaOH15ml双蒸水 85ml将 0.5 克酚红置研钵中，缓漫滴加 0.1NNaOH 溶液边

25、加边磨，并不断吸出已溶解的酚红 液，直至全部溶解，然后加入 85ml 双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。（四）5.6 NaHCO3 溶液称 NaHCO35.6 克，溶于 100ml 蒸馏水中，室温保存即可 （ 如需要也可 10 磅 15 分钟高压 灭菌，4 C冰箱保存）（五）10卩/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4 C冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。（六）0.4 % KCl-0.4 %柠檬酸钠低渗液将 0.4KCl 和 0.4柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。（七）2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠 2 克，加 100ml 双

26、蒸水即可，室温保存。（八）0.2%次甲基兰染液称次甲基兰（Methylene blue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。（九）0.5%醋酸洋红 （Aceio Carmine） 染液洋红lg醋酸90ml蒸馏水110ml将 90ml 醋酸加入 110ml 蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入 1 克洋红，使之迅速冷 却过滤，加饱和氢氧化铁 （媒染剂 ）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉 淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。（十）1%甲苯胺兰 （Toluidine blue）称取甲苯胺兰 1 克，加蒸馏水 lOOml 。（十一）1/3000 中性红染液取

27、中性红（Neutral red）0.1克，加蒸馏水 300ml。室温保存。（十二 ）Giemsa 染液1 贮备液Giemsa 粉1g纯甘油66ml甲醇66ml先将 Giemsa 粉置于研钵中加少量甘油， 充分研磨， 呈无颗粒的糊状。 再将全部甘油加入， 放入56C温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。2工作液临用时将贮备液与 pH6.8 的磷酸缓冲液按照 1:20混合。（十三 ）埃利希 （Ehrlich） 苏木精染液苏木精 1.0g乙醇50ml醋酸5ml甘油 50ml 硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘

28、油 加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇； 硫酸铝钾需研磨并加热， 然后溶解于蒸馏水中，将 其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经 常摇动以加速其成熟，成熟约需 4 周左右，成熟的染液为深红色。、细胞化学和细胞组分分离溶液（一）M 一缓冲液 眯唑 （Imidazole） KCIMgCI2 6H2OECTAEDTA 巯基乙醇 甘油 蒸馏水0.07mI3.404g3.7g101.65mg380.35mg29.224mg297mI加至 1000mI考马斯亮兰 蒸馏水0.2g 加至 100mI用 INHCI 调 pH 至 7.2 室温保存。（二）2% Trito

29、n X 一 量取 2mlTriton X100溶液一 100（聚乙二醇辛基苯基醚 ）液，加 M 缓冲液 98ml 即可。三） 0.2考马斯亮兰 R-250 染液甲醇醋酸46.5ml7.0ml（四）A . 0.1 %碱性固绿染液（pH8.08.5）10.1固绿水溶液固绿（Fast green）0.1g蒸馏水100mI20.05% Na2C03 溶液Na2C0350mg蒸馏水100mI用时按 1:1 体积混合即可。B . 0.1%酸性固绿染液（pH2.2）10.1%固绿水溶液。2. mol/LX75盐酸液 盐酸（比重 1.19）0.109mI 加蒸馏水至 100mI 用时按 l:1 混合。（五）甲

30、基绿一哌咯宁染液1.1molL 醋酸缓冲液 （pH4.8）：（1）醋酸17ml蒸馏水加至 200ml（2）醋酸水13.5g蒸馏水加至 lOOml用时分别取两液 40ml、60ml 混匀即可。2甲基绿一哌咯宁（methyl green Pyrcnln）5%哌咯宁水溶液6ml2%甲基绿水溶液6ml蒸馏水16mllmol/L 醋酸缓冲液16mllmol/L 醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。（六）Schiff试剂将碱性品红0.5克加入100ml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50C时过滤到棕色瓶中，加 1N HC11O毫升，冷却至25C时加入1克NaHSO3，此时需很好的振荡， 避光过夜。次

31、日取出 （呈淡黄色 ）加 0.25 克活性炭剧烈振荡 1 分钟。过滤后即得 Schiff 试剂。 避光低温保存。（七）联苯胺混合液联苯胺 （4.4 Diamino benzidine） 0.2g95乙醇lOOml3过氧化氢2 滴此液临用时配制。（八）1 %番红水溶液番红 （Safranin）1.0g蒸馏水100ml（九）1 % SDS（十二烷基硫酸钠 Sodium dodecyl sulfate,SDS）SDS10g45%乙醇100ml（ 十 ）1mol LTris（ 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 /盐 酸 缓 冲 液 Trihydroxy methylaminomethane Tris/H

32、CL）pH7.8Tris蒸馏水12.114glOOml先将 Tris 溶于少量蒸馏水，用 HCI 调 pH 至 7.8，然后加水至 100ml （ 十一 ）Ringer Solution65克）0.9 克0.042 克0.025 克100ml氯化钠 （冷血动物用 0氯化钾氯化钙蒸馏水（ 十二 ） 淀粉肉汤培养基蛋白2g淀粉6g牛肉汤100ml用 10% NaHCO3 调 pH 至 7.07.2（十三）0.25mol / L蔗糖一 0.003mol / L氯化钙溶液 蔗糖85.5g氯化钙0.33g蒸馏水1000ml （十四）1%詹纳斯绿 B 染液取詹纳斯绿 （Janus green B）1.0g

33、 Ringer 氏液 100ml（十五 ）1刚果红染液刚果红1g蒸馏水100ml（ 十六 ）Gomori 硝酸铅作用液 0.05mol L 醋酸缓冲液 （pH5）lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水 200ml，取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠2g醋酸铅2g5氯化镁5ml以上作用液在临用时配制，最终在 pH55.2,过滤使用。（王世藩 汇编 ）三、细胞培养和细胞融合溶液（一）0.01mol / LPBS（磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer Saline , PBS）pH7.2。0.2mol L 磷酸氢二钠液 （甲液 ）：NaH2PO4

34、12H2O35.814g双蒸水加至 500ml0.2mol L 磷酸二氢钠液 （乙液 ）:NaH2PO4- 12H2O15.601g双蒸水加至 500ml取甲液36ml，乙液14ml和NaCI8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经 高压灭菌后保存于 4C冰箱备用。（二）50 % PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500）称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37 C予热的MEM培养液，混匀，保温在 37 C水浴中待用。（三）MEM 培养液（含10%小牛血清）MEM 培养液 （日本制药株式会社 ）9.4g双蒸水1000mlNa

35、HCO31.5g谷氨酰胺 （L-glutamin）0.292g56 C灭活30分钟的小牛血清110mlMEM 粉末加水溶解后,用 NaHCO3 调 pH 到 7.1（因在抽滤过程中 pH 升高 0.20.3）,然 后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置 4C冰箱保存备用。（四）0.25%胰蛋白酶一胰蛋白酶 （Trypsin） 粉EDTA 粉0.01molL PBS0.02% EDTA 混合消化液0.25g20.0mg100ml然后将先用少量PBS溶解胰蛋白酶，1 小时左右 （待彻底溶解,液体呈透明为止（ 五 ）Hanks 液1 原液甲NaClKClEDTA粉末

36、和剩下的液体加入混合，置37C水浴中），用G5抽滤，分装置4C冰箱中保存。160g8gMgSO4- 7H2O2gMgCI2 -6H2O2g溶于 800ml 馏水中。CaCI2（无水）溶于 100ml 蒸馏水中。 将两种液体混合后，加水至 原液乙2.8g1000mI 用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4 C冰箱备用。Na2HPO4- 12H2O3.04g1.2gKH2PO4葡萄糖20.0g溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5%酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。2使用液甲乙两液各 1 份，双蒸水 1 8份，混匀分装包扎好瓶口， 经10磅15分钟

37、高压灭菌后置 4C 冰箱中保存。使用时用 5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。（六）1640 培养液 （含 lO %小牛血清 ）RPMI-1640 粉10.39g双蒸水加至 1000ml双抗 1 万 u/ml 灭活小牛血清 混匀上述液体，立即用通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。用NaHCO31.5 克调 pH 值到 7.2。10ml110mlG6抽滤除菌分装，置 4C冰箱备用。（七）青、链霉素溶液青霉素钠盐（40万u/瓶）5瓶链霉素（100万u/瓶）2瓶-30 C保存。双抗在培养基中的终浓度将两者溶于200ml0.9 %的无菌生理盐水，分装小瓶, 为各 lOOu 为宜。（八）二甲基亚砜诱导 HL-60 细胞分化使用的终浓度为 1。 4%。（九）BrdU 溶液（200ug/m1）用无菌青霉素瓶，在室温下称取 1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。（十）2 SSC溶液用分析天平称取氯化钠 17.53克，柠檬酸钠 8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至 1000毫升。 （十一） 3%琼脂：取琼脂粉 3克，加入双蒸水到 100毫升，搅匀，高压消毒后 （15磅 20分钟），冷藏备用，使 用前重新加热煮沸 （贮存时间不宜过长 ）。