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文档简介

1、实验八  绒毛细胞染色体标本的制备与观察实验目的1. 初步掌握绒毛细胞染色体标本的制备与观察。2. 了解人类染色体的形态和计数分析方法。实验原理人类细胞染色体标本制备常用的材料为外周血淋巴细胞、培养的体细胞和骨髓细胞等。而绒毛组织细胞具有活跃的增殖力，取材后不需经过体外培养的无菌处理，此时用有丝分裂阻断剂秋水仙素处理细胞，可使正在分裂的细胞停止在中期，再经低渗、固定等处理，便可得到较多可供分析的中期染色体。绒毛细胞是在受精卵分裂胚胎发育过程中形成的，其遗传物质与胎儿相同。在孕4555天绒毛细胞具有较高的分裂活性，可用其自然分裂细胞制备染色体标本，具有早期、快速、简便和准确的优点。适用

2、于临床的细胞遗传学的产前诊断研究等。实验用品1. 材料：绒毛组织。2. 器材：显微镜、离心机、恒温水浴箱、眼科镊子、眼科剪子、5ml离心管、吸管、试管架、玻璃笔、载玻片、吸水纸。3. 试剂：培养皿、rpmi-1640培养液、秋水仙素（2µg /ml）、0.075mol/l kcl溶液、无菌生理盐水、柠檬酸钠、60%冰乙酸、甲醇冰乙酸（31）固定液、giemsa染液、磷酸缓冲液（ph6.8）。实验内容与方法1. 秋水仙素处理：选取分芽多、末端粗钝的绒毛枝23枝剪下、用生理盐水漂洗、再将绒毛枝放入含有终浓度2µg /ml秋水仙素的5ml rpmi-1640培养液或hanks液的

3、离心管中、37温育处理约30分钟。2. 吸去培养液，加入37预热的1%柠檬酸钠和0.075mol/l kcl（11）低渗液4ml 37下处理1015分钟。3. 加入1ml固定液混匀后吸去上清液。4. 加入3ml固定液固定30分钟，（甲醇冰乙酸31）。5. 吸去上清液，加60%冰乙酸1ml解离1.52分钟再加入3ml甲醇，处理2分钟，吸出绒毛枝。6. 以800r/min离心5分钟，弃上清液。7. 加5滴固定液，混匀制成细胞悬液，冰湿片滴片、干燥。8. giemsa染色68分钟。9. 镜下观察25个分裂相并进行染色体计数及性别鉴定。注意事项1. 绒毛组织取出后应立即放入固定液中。2. 观察标本时，应选择成株的绒毛丝或分散的合体细胞进行检查。3. 可记数细胞应是胞浆、胞核着色清晰，如标本胞浆不透明或胞核肿胀，可能是由于：（1）酒精浓度不够，脱水不彻底；（2）酸化、碱化不当；（3）细胞本身已退变。4. 胞核染色不正常，而呈蓝色或黑色，则是染色时间过长。5. 如果胞浆着色不鲜艳，可能是染液配制不合适。实验报告与思考题绘图 绘制染色体核型图。思考题1

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