大黄灵仙胶囊对慢性肝损伤后胆结石形成的干预作用研究

1、大黄灵仙胶囊对慢性肝损伤后胆结石形成的干预作大黄灵仙胶囊对慢性肝损伤后胆结石形成的干预作用研究用研究作者：唐乾利，俞渊，黄名威，关中正，高善辉【摘要】【摘要】目的探讨大黄灵仙胶囊对慢性肝损伤家兔胆结石形成的干预作用及其作用机制。方法将 46 只家兔随机分为正常组、慢性肝损伤组、肝硬化组、大黄灵仙胶囊大剂量组、大黄灵仙胶囊小剂量组。采用皮下注射 CCl4 方法进行慢性肝损伤造模,各组同时进行不同处理。最后观察各组胆囊成石率，肝脏功能生化指标，肝组织病理改变、超微结构改变，胆汁成分改变。结果慢性肝损伤组、肝硬化组胆石形成阳性检出率较正常对照组显著增加（P0.05 或 P0.01）。大黄灵仙胶囊大剂

2、量组、大黄灵仙胶囊小剂量组胆石阳性检出率较肝硬化组有显著降低(P0.01 或 P0.05)。各模型组中肝脏超微结构均发生不同程度异常改变，大黄灵仙胶囊大、小剂量治疗组肝脏病理改变、肝细胞超微结构改变较模型组比较均有改善，大剂量组尤为明显。第一论文范文网 编辑。大黄灵仙胶囊大、小剂量组血清 AST，ALT，-GT，非结合胆红素均明显低于肝硬化组（P0.05 或 P0.01）；总胆红素、间接胆红素、钙离子大黄灵仙胶囊大、小剂量组较肝硬化组明显降低（P0.01），大剂量组较小剂量组明显降低（P0.01）。结论大黄灵仙胶囊对慢性肝损伤后胆结石形成具有明显的预防效果，其作用机制主要与抑制 CCl4 所致

3、肝脏损伤的作用有关，同时与大黄灵仙胶囊在多层次、多途径调节参与结石形成各因素关系密切。【关键词】【关键词】慢性肝损伤； 肝硬化； 大黄灵仙胶囊； 胆结石； 肝脏超微结构Abstract：ObjectiveTo study the interference effect and itsmechanism of Dahuanglinxian Capsules on gallstone formation afterchronic liver injury of rabbits. Methods46 rabbits were randomlydivided into 5 groups, respec

4、tively named by group A (normal controlgroup), group B (chronic liver injury group), group C (livercirrhosis group), group D (group fed with large dose Dahuanglinxiancapsule) and group E (group fed with large dose Dahuanglinxiancapsule). The chronic liver injured rabbits were induced bysubcutaneous

5、injection with CCl4 and each group was treated bydifferent factors at the same time. The gallstone formation rate,liver function biochemical index, pathological changes in livertissues, ultrastructural changes, and biliary component change wereobserved by the methods of biochemical and pathological

6、technology.ResultsThe gallstone formation rate of group B and C were obviouslyhigher than group A (P0.05 or P0.01). The gallstone formationrate of D and E were obviously lower than group C (P0.05 or P0.01). There were abnormal ultrastructural changes to certainextent in models B and C. Compared with

7、 the model groups, the D and Egroups improved the ultrastructural changes and pathological changes in liver tissues,especially D group. The level of AST，ALT，r-GT and indirectbilirubin in serum of groups D and E were obviously lower than groupC (P0.05 or P0.01). At the same time, the content of total

8、bilirubin, indirect bilirubin, Ca2+ of groups D and E were obviouslylower than group C (P0.01), the same of group D was lower than groupE (P0.01). ConclusionThe Dahuanglinxian capsules have significanteffect of preventing gallstone formation due to its protective effectto liver injury which is induc

9、ed by CCl4, and its association withregulations to many factors participating in the gallstone formationon multiple levels and ways.Key words： Chronic liver injury；Cirrhosis ofliver；Dahuanglinxian Capsule；Gallstones；Ultrastructure本实验利用 CCl4 皮下注射诱发家兔慢性肝损伤，在此基础上观察胆囊结石形成率，并用大黄灵仙胶囊组方煎剂进行灌胃，通过观察结石形成率，肝脏细

10、胞超微结构的病理学改变，测定实验动物肝功能及胆汁成分并进行胆汁培养，以探讨大黄灵仙胶囊对家兔慢性肝损伤胆结石模型的干预治疗作用。第一论文范文网 WWW.11665.COM 整理。1 1材料与仪器材料与仪器1.1材料、仪器健康家兔，体质量 2.53.0 kg，雌雄不拘，普通级，广西中医学院实验动物中心提供，合格证号 20060820。各生化试剂盒分别购于上海申能德赛诊断技术有限公司和伊利康生物技术有限公司。奥地利Biocell2010 酶标仪、日立 H-500 透射电镜、BX-50-32001 奥林巴斯光学显微镜、HPIAS-1000P 病理图文分析系统等分别由广西医科大学中心实验室、广西中医学

11、院一附院病理实验室提供。1.2药品造模用药：CCl4 分析纯（将 CCl4 与花生油以 12.5 比例混合，37加热使充分溶解，制成 40CCl4 溶液，）、胆固醇分析纯，均为上海国药集团产品。受试用药：大黄灵仙胶囊1 (生大黄 150 g，威灵仙 300g，芒硝 100 g，金钱草 300 g，枳壳 120 g，鸡内金 100 g，泽兰 150 g，柴胡120 g，郁金 120 g，磁石 120 g，黄芪 300 g，甘草 50 g)，以上共计 1 930 g生药，由广西中医学院第一附属医院制剂室提取 965 ml 浓缩药液，并无菌密封瓶装（生药量为 2 g /ml）。2 2方法方法2.1动

12、物分组及处理方法健康家兔 46 只，体质量 2.53.0 kg，雌雄不拘，适应性喂养 1 周后随机分为 5 组，即正常对照组 10 只、慢性肝损伤组 8只、肝硬化组 8 只、大黄灵仙胶囊大剂量组 10 只（用药量相当于成人用量的 3倍）、大黄灵仙胶囊小剂量组 10 只（用药量相当于成人用量）。正常对照组普食喂养，每日灌服生理盐水 4 ml/kg；慢性肝损伤组采用“慢性肝损伤兔动物模型”的建立2，普食喂养 10 周后，每日灌服生理盐水 4 ml/kg；肝硬化模型组造模方法2：家兔称重后以 2 ml/kg 体质量，将 40CCl4 溶液颈后皮下注射，每 4 天 1 次，以形成皮下丘状突起为宜3。造

13、模后第 10 周开始每日灌服生理盐水 8 ml/kg；大黄灵仙胶囊大、小剂量组第 10 周起每日灌服胆通胶囊提取液 8 ml/kg，4 ml/kg。普食喂养。2.2检测指标及方法2.2.1胆囊结石成石观察结石判定标准为正常胆囊胆汁内无有形成分。肉眼观察胆汁内有无棕黑色成型颗粒或泥沙样沉淀；镜下观察有无结石微粒或结晶。2.2.2生化指标检测天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、-谷氨酰转肽酶(-GT)采用速率法检测；血清中总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、血清总胆固醇、总胆汁酸、胆汁总胆汁酸、总胆固醇采用化学比色法检测；钙离子含量采用乙二胺四乙酸二钠法检测；磷脂含量酶显色法

14、检测。2.3统计学处理所有数据采用 SPSS14.0 统计软件进行分析，计量资料以s 表示，两组间均数比较用 t 检验；两组间率的比较采用卡方检验；P0.05认为有统计学意义。3 3结果结果3.1家兔胆囊结石发生情况结果见表 1。表 1胆石发生情况（略）3.2家兔肝脏病理改变光镜下观察，慢性肝损伤组（见图 1，2）：纤维组织增生，肝细胞水肿，局部气球样变，胆管增生，少许淋巴细胞浸润，汇管纤维间隔稍增宽。第一论文范文网 整理。肝硬化组（见图 34）：见假小叶形成，小叶内中央静脉缺如，细胞排列紊乱，多数细胞水肿，局部气球样变，小胆管增生、伴有淋巴细胞浸润。大黄灵仙大剂量组（见图 56）：细胞排列规

15、则，少数肝细胞水肿，小叶结构清晰，汇管区结构正常，无炎性细胞浸润，未见小胆管增生。大黄灵仙小剂量组（见图 78）：肝细胞排列规则，中度水肿，局部气球样变，汇管区纤维增宽，胆管增生，少量淋巴细胞浸润。3.3家兔电镜肝细胞超微结构的改变电镜观察：大黄灵仙小剂量治疗组图（见图 912）：正常结构可见，大量滑面内质网、大量胶原纤维。线粒体固缩，嵴可见。大黄灵仙大剂量治疗组(见图 1316)：正常结构可见，糖原多，滑面内质网多，粗面内质网少，大量胶原纤维。核模较完整，线粒体多正常。3.4家兔血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、-谷氨酰转肽酶(r-GT)含量分析结果见表 2。表

16、 2血清 AST，ALT，-GT 含量比较（略）3.5血清总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）含量分析结果见表 3。表 3血清 TBIL，LDBI，LIBIL 含量比较（略）3.6家兔血清总胆固醇（TC）、总胆汁酸（TBA）、磷脂（PL）含量分析结果见表 4。表 4血清 TC、TBA、PL 含量比较（略）3.7家兔胆汁总胆固醇（TC）、磷脂（PL）、钙离子(Ca2+)含量分析结果见表 5。表 5胆汁 TC、PL、Ca2+含量比较（略）3.8家兔胆汁总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、间接胆红素（IBIL）的含量分析结果见表 6。表 6胆汁 TBA、TBIL

17、 、IBIL 含量比较（略）4 4讨论讨论胆结石的发病机制至今仍未完全阐明，既往研究表明，胆结石的形成是多种因素综合作用的结果。因此研究慢性肝损伤与胆石症发生之间的关系有重要意义。胆结石伴有肝脏的组织学改变，尤其是胆管结石。可能的主要机制是胆道内压力升高，通过胆道炎症、胆道梗阻等原因，使胆囊内压力升高，继发胆道压力升高，从而造成肝内胆汁淤滞，导致肝细胞损害4,5。有学者认为胆囊结石病伴随的肝脏损害，很可能是胆囊结石的成因，它可能先于胆囊结石而存在，而胆囊结石病的反复发作可能反过来加重原发性肝损害， Chignard N6进一步提出肝细胞合成分泌胆汁机制受损有可能是胆囊结石患者所存在的一系列肝胆

18、道病理状态的启动扳机。而肝脏的损害首先就表现在肝细胞的超微结构的改变上，滑面内质网的减少和代偿性增生表明催化胆固醇转化为胆汁酸的 7羟化酶数量和活力有可能受到影响，以致于胆汁酸合成减少，从而造成胆汁中胆固醇与胆汁酸比例增高，增加了成石的机率7。本次实验发现各模型组家兔的肝脏超微结构均伴有不同程度的改变，存在有不同程度的膜破裂，质浆中的粗面内质网和高尔基复合体水肿、变性，线粒体坏死，双层模结构消失，部分甚至有空泡样变，滑面内质网减少，粗面内质网部分断裂，颗粒减少，溶酶体增加，肝细胞边界模糊不清，细胞质电子密度减少等各种相应结构改变。肝硬化组表现尤其明显，AST 较慢性肝损伤组有著性差异（P0.0

19、1）；-GT 较慢性肝损伤组有明显差异（P0.05）。本实验结果显示，肝硬化家兔胆囊结石发生率为 83.3，慢性肝损伤组胆囊结石发生率为 63，而正常对照组为 0。前两者与正常对照组比较均有显著差异（P0.05，P0.01）。肝硬化组与慢性肝损组比较，胆囊结石阳性检出率没有明显差异，但肝硬化组胆囊胆汁可见有形成分较慢性肝损组明显居多，且后者胆汁中以胆泥为主。目前已有实验证明胆泥形成是胆石形成的必经阶段8，肝硬化的病程越长，合并胆囊结石的危险性越大，本次实验结果更进一步证实了这一结论。本实验光镜、电镜观察发现：慢性肝损伤组与肝硬化组动物中形成的结石为棕绿色和黄褐色，胆石中存在较多的是胆色素颗粒而

20、仅有少量胆固醇结晶，不同于高胆固醇膳食组，这一结论提示：在慢性肝损伤状态下胆石的成因机制中，胆色素类结石是其形成机制之一。实验中发现慢性肝损伤组家兔胆囊几乎均为针尖样胆沙，而随着造模时间的延长，肝硬化组家兔胆囊中出现 1 mm 左右大小的结石，光镜观察不同于高胆固醇膳食组的胆固醇结晶。第一论文范文网 编辑。结合对其胆汁成分的分析，我们发现胆固醇组胆汁中的胆固醇含量显著高于正常对照组（P0.05），慢性肝损伤组与肝损伤胆固醇组与正常组没有明显差异，而肝硬化组胆固醇含量低于正常组。肝硬化组胆汁胆红素高于其他各组（P0.05）。此结果提示：饮食中的胆固醇过量，可导致胆汁中形成胆固醇过饱和，随后胆固醇

21、结晶，结晶析出逐渐形成结石。中医学认为肝胆互为表里，肝主疏泄，胆汁的排泄有赖于肝的疏泄功能，肝的疏泄功能直接控制和调节胆汁的排泄。肝失疏泄主要表现为气机不畅、气机郁结之病理变化，也称“肝气郁结”。情志不畅，饮食不洁、虫积或痰浊瘀血内结于肝胆等原因均可引起肝胆疏泄失常，导致肝胆气郁，郁久化热，湿浊内生，湿热内盛，蕴结肝胆，湿热熏蒸，煎熬胆汁而导致胆石。此病机正同西医认为的“肝脏功能障碍，特别是肝细胞功能障碍而致病理性胆汁分泌和排胆功能障碍是胆结石形成的基础” 之理论相一致。同时中医认为胆汁排泄不畅，亦会影响肝之疏泄，即所谓的“胆病及肝”，这与西医的“肝细胞功能损害与胆结石可能是互为因果”理论相一致。大黄灵仙胶囊为治疗胆石病的有效中药制剂，方中大黄、芒硝攻下导滞、利胆排石；金钱草、郁金、柴胡、枳壳、泽兰相伍，既有清热利湿之功，又有理气祛痰之效；鸡内金、金钱草、威灵仙为排石佳品；威灵仙、磁