药物分析第11章抗生素类药物分析

1、第十一章第十一章抗生素类药物的分析抗生素类药物的分析 抗生素抗生素 是指由微生物所产生、是指由微生物所产生、极微量即具有选择性地抑制或杀灭其极微量即具有选择性地抑制或杀灭其他微生物的一类有机化合物。他微生物的一类有机化合物。一、抗生素药物的特点一、抗生素药物的特点 抗生素抗生素 在低微浓度下即可对某在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。化学物质的总称。第一节第一节 概述概述1. 生物合成生物合成（发酵）（发酵）2. 化学合成或半合成化学合成或半合成细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌 抗生素药物抗生素药物 具有选择性地抑制具有选择性地抑制或

2、杀灭其他微生物作用的药物。或杀灭其他微生物作用的药物。控制抗生素质量的复杂性控制抗生素质量的复杂性*分子结构多不稳定分子结构多不稳定*发酵过程不易控制发酵过程不易控制生产工艺复杂生产工艺复杂稳定性差稳定性差 发酵液中含有各种无机盐、脂肪、蛋白质、发酵液中含有各种无机盐、脂肪、蛋白质、降解产物、色素、热原、毒性物质降解产物、色素、热原、毒性物质 *发酵过程易受污染发酵过程易受污染*易降解易降解 疗效疗效 失效失效 毒副作用毒副作用二、抗生素药物的质量分析二、抗生素药物的质量分析（一）鉴别试验（一）鉴别试验1. 理化法理化法2. 生物学法生物学法（1）化学法）化学法 （2）仪器法）仪器法例例 青霉

3、素钠青霉素钠 Ch.P（2000） 【鉴别鉴别】（1）取本品与已知含量的青霉素适）取本品与已知含量的青霉素适量，分别加水制成每量，分别加水制成每1ml中约含中约含50m mg的溶液，各的溶液，各取取1ml，加入不少于，加入不少于200单位的青霉素酶溶液单位的青霉素酶溶液1ml,在在37灭活灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金黄色葡萄球菌黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003 的培养基上。的培养基上。在在37培养约培养约16小时后均无抑菌作用，而用同一小时后均无抑菌作用，而用同一

4、方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用.（二）检查（二）检查 一般杂质、特殊杂质一般杂质、特殊杂质常增加常增加“安全性检查安全性检查”【检查检查】异常毒性异常毒性 热原热原 细菌内毒素细菌内毒素 降压物质降压物质 无菌无菌 例例 盐酸四环素盐酸四环素 Ch.P（2005） 【检查检查】酸度酸度 溶液的澄清度溶液的澄清度 有关物质有关物质 干燥失重干燥失重 杂质吸光度杂质吸光度 热原热原 无菌无菌（三）含量测定（三）含量测定1. 生物学方法生物学方法 以生物学方法或生化方法测以生物学方法或生化方法测定生理活性物质，并按效价单位定生理活性物质，并按效价

5、单位（IU）计算的测定方法）计算的测定方法抗生素微生物检定法抗生素微生物检定法抗生素微生物检定法抗生素微生物检定法 以抗生素抑制微生物生长或杀死微以抗生素抑制微生物生长或杀死微生物的能力作为衡量效价的标准生物的能力作为衡量效价的标准Ch.P 管碟琼脂扩散法管碟琼脂扩散法比浊法比浊法USP例例 磺苄西林钠磺苄西林钠 Ch.P（2005） 【含量测定含量测定】 精密称取本品适量，用灭菌水精密称取本品适量，用灭菌水制成每制成每1ml中约含中约含1000单位的溶液，照抗生素微单位的溶液，照抗生素微生物检定法（附录生物检定法（附录 A）测定。）测定。1000磺苄西林单磺苄西林单位相当于位相当于1mg的的

6、C16H18N2O7S2。 例例 抗生素抗生素【含量测定含量测定】 Ch.P（2005） 抗生素微生物检定法（附录抗生素微生物检定法（附录 A） 红霉素、两性霉素红霉素、两性霉素B、杆菌肽、硫酸多黏菌、杆菌肽、硫酸多黏菌素素B、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲霉素、硫酸核糖霉素、硫酸链霉素、磺苄西林钠霉素、硫酸核糖霉素、硫酸链霉素、磺苄西林钠原料及制剂原料及制剂微生物检定法微生物检定法优点优点 *与临床效果一致与临床效果一致 *灵敏度高灵敏度高 *干扰物质少干扰物质少 *可用于未知药物可用于未知药物缺点缺点 *操作繁琐操作繁琐 *耗时耗时 *准确度、精

7、密度差准确度、精密度差 以理化方法测定主药含量，按有以理化方法测定主药含量，按有效物质的质量计算的测定方法效物质的质量计算的测定方法优点优点 * 准确度高准确度高 * 简便快速简便快速缺点缺点 * 不一定代表生物效价不一定代表生物效价 * 易受杂质干扰易受杂质干扰 * 仅用于己知药物仅用于己知药物2. 理化方法理化方法Ch.P（2005）【含量测定含量测定】 青霉素类青霉素类 滴定法滴定法 UV HPLC法法 微生物检定法微生物检定法头孢菌素类头孢菌素类 HPLC法法汞量法汞量法碘量法碘量法细菌细菌 枯草菌枯草菌真菌真菌 青霉素类、头孢类、青霉素类、头孢类、 灰黄霉素灰黄霉素放线菌放线菌 链霉

8、素链霉素1. 按产生菌分类按产生菌分类 三、抗生素的分类三、抗生素的分类 广谱广谱 青霉素、头孢类青霉素、头孢类G+ 红霉素（金葡菌）红霉素（金葡菌） G- 卡那霉素、庆大霉素卡那霉素、庆大霉素绿脓杆菌绿脓杆菌 阿莫西林阿莫西林2. 按抗菌谱分类按抗菌谱分类3. 按作用机制分类按作用机制分类抑制转肽酶交联方式抑制转肽酶交联方式 青霉素青霉素抑制蛋白质合成过程抑制蛋白质合成过程 红霉素红霉素影响细胞膜通透性影响细胞膜通透性 多粘菌素多粘菌素4. 按化学结构和性质分类按化学结构和性质分类-内酰胺类内酰胺类 多烯大环类多烯大环类氨基糖苷类氨基糖苷类 多肽类多肽类四环素类四环素类 苯烃胺类苯烃胺类大环

9、内酯类大环内酯类 蒽环类蒽环类等等 第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类青霉素钠青霉素钠（钾）（钾）氨苄西林氨苄西林（钠）（钠）阿莫西林阿莫西林（钠）（钠）普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢菌素类头孢菌素类头孢氨苄头孢氨苄头孢羟氨苄头孢羟氨苄头孢拉啶头孢拉啶头孢噻吩钠头孢噻吩钠RCONSCH3CH3COOHOHN青霉素类青霉素类RCONONHSCH2R1COOH头孢菌素类头孢菌素类一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构氢化氢化噻唑环噻唑环氢化氢化噻嗪环噻嗪环 -内酰胺环内酰胺环RCONSCH3CH3COOHOHNRCONONHSCH2R1COOH青霉素类青霉素

10、类头孢菌素类头孢菌素类123456712346578RCONSCH3CH3COOHOHN青霉素类母核青霉素类母核6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸（6-APA） -内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺侧链侧链酸性酸性手性手性CCH2COHNNSOCH3CH3COOH青霉素青霉素G（苄青霉素）（苄青霉素）HONNOSHHCH3CH3HOOH青霉素钾青霉素钾KNa 青霉素钠青霉素钠ONNOSHHCH3CH3HOOKH青霉素钾青霉素钾（lidocaine hydrochloride）ONNOSHHCH3CH3HOONaH青霉素钠青霉素钠（Benzylpenicillin sodium）COHNNSOCH3CH3COO

11、HCHNH2氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）（ampicillin）ONNOSHHCH3CH3HNH2HONaOHCOHNNSOCH3CH3COOHCHNH2HO阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）（amoxicillin）NHONH2NHOSHCH3CH3HOOOHHH,3H2OCH2COHNNSOCH3CH3COOHNH2(C2H5)2NCH2CH2OOC普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素（procaine benzylpenicillin）ONCH3H3CH2NOONSNOHHHCH3CH3OHOHCOHNNSOCH3CH3COONaCHSO3Na磺苄西林钠磺苄西林钠（

12、sulbenicillin sodium）HONNOSHHCH3CH3HONaOOOONaS头孢菌素类母核头孢菌素类母核RCONONHSCH2R1COOH7-氨基头孢烷酸氨基头孢烷酸（7-ACA）酰胺酰胺侧链侧链 -内酰胺环内酰胺环酸性酸性手性手性CSNH2CHONCOHNCH3COOH头孢氨苄头孢氨苄（cefalexin）HSOHCH3ONNH2NHOHOH,H2OSNH2CHONCOHNCH3COOHHO头孢羟氨苄头孢羟氨苄（cefadroxil）HSOHCH3ONNH2NHOHOHHO,H2OHSOHCH3ONNH2NHOHOHSNH2CHONCOHNCH3COOH头孢拉定头孢拉定（ce

13、fradine）SSCH2ONCOHNCH2OCOCH3COONaHNNOOHHSONaOOCH3OS头孢噻吩钠头孢噻吩钠（cefalotin）（二）性质（二）性质 *与碱金属成盐与碱金属成盐 易溶于水易溶于水pKa=2.52.81. 酸性酸性羧基羧基*与有机碱成盐与有机碱成盐 难溶于水难溶于水RCONSCH3CH3COOHOHNRCONONHSCH2R1COOH难溶于水难溶于水易溶于有机溶剂易溶于有机溶剂青霉素青霉素易溶于水易溶于水难溶于有机溶剂难溶于有机溶剂K+ Na青霉素钾青霉素钾青霉素钠青霉素钠 H溶解性溶解性NOS2. 旋光性旋光性（5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 18 24）20

14、D 手性手性CNSONOS3. UV共轭体系共轭体系NSO4. 不稳定性不稳定性水溶液水溶液 不稳定、易开环失效不稳定、易开环失效干燥纯净干燥纯净 较稳定较稳定 -内酰胺环内酰胺环四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 不稳定不稳定性因素性因素RCONSCH3CH3COOHOHNRCONONHSCH2R1COOH降解、失效降解、失效青霉素类青霉素类酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶温度温度氧化剂氧化剂（头孢噻吩钠水溶液（头孢噻吩钠水溶液2524h失活失活8%）降解、失效降解、失效头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内酰胺酶内酰胺酶 （青霉素钠水溶液（青霉素钠水溶液3024h失

15、活失活56%）Cu2+、Pb2+、Hg2+、Ag+青霉素的降解反应青霉素的降解反应青霉烯酸青霉烯酸pH4pH2脱羧青霉脱羧青霉噻唑酸噻唑酸H+-CO2青霉素青霉素青霉噻唑酸青霉噻唑酸OHHgCl2HgCl2青霉二酸青霉二酸H+or醇醇青霉胺青霉胺orHgCl2H+青霉醛青霉醛H+不同不同pH条件下青霉素钠降解情况条件下青霉素钠降解情况240.4 1.4 12 92 336 218 125 31.2 9.3 1.4半衰期半衰期(h) 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11pH温度对青霉素钠稳定性的影响温度对青霉素钠稳定性的影响pH2，30 温度温度 5 26 37% 6 77 97二、鉴别试

16、验二、鉴别试验 （一）呈色反应（一）呈色反应1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 内酰胺内酰胺羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物头头孢孢菌菌素素类类青青霉霉素素类类盐盐酸酸羟羟胺胺OH-红、棕、褐色红、棕、褐色Fe3+/3H+CNSNHOOH HClNOHH2OH-Fe3+/3H+CNSNHOOFe3+3红、棕、褐红、棕、褐NSO例例 磺苄西林钠磺苄西林钠 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约20mg，加水，加水15ml溶溶解后，加盐酸羟胺试液与氢氧化钠试液各解后，加盐酸羟胺试液与氢氧化钠试液各2ml，放置放置5分钟后，加盐酸溶液（分钟后，加盐酸溶液（1100）3ml与三氯与三氯化铁试液

17、化铁试液1ml，随即振摇，即显赤褐色。，随即振摇，即显赤褐色。例例 头孢哌酮头孢哌酮 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约10mg，加水，加水2ml与盐与盐酸羟胺溶液酸羟胺溶液取取34.8%盐酸羟胺盐酸羟胺1份，醋酸钠份，醋酸钠-氢氧氢氧化钠溶液（取醋酸钠化钠溶液（取醋酸钠10.3g与氢氧化钠与氢氧化钠86.5g，加水，加水溶解使成溶解使成1000ml）1份，乙醇份，乙醇4份，混匀份，混匀3ml，振，振摇溶解后，放置摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml,摇匀，显红棕色。摇匀，显红棕色。2. 类似肽键的反应类似肽键的反应双缩脲反应双缩脲反应

18、 碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜内内酰酰胺胺类类紫色紫色开环，开环，H例例 阿莫西林阿莫西林 Ch.P（1995） 【鉴别鉴别】（2）取本品约）取本品约10mg，加水，加水6ml溶解溶解后，加碱性酒石酸铜试液后，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，即显紫色。，即显紫色。例例 氨苄西林钠氨苄西林钠 Ch.P（1995） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约10mg，加水，加水6ml溶解溶解后，加碱性酒石酸铜试液后，加碱性酒石酸铜试液0.5ml，即显紫色。，即显紫色。 茚三酮反应茚三酮反应 茚茚三三酮酮内内酰酰胺胺类类蓝紫色蓝紫色CCOCNOCOCC氨基酸结构氨基酸结构类似类似 例例 阿莫西林阿莫西林 Ch.

19、P（2000） 【鉴别鉴别】（4）TLC法法 对照品法对照品法 显色剂显色剂 0.3%茚三酮茚三酮-乙醇溶液乙醇溶液 （90加热加热15分钟）分钟）3. 其他呈色反应其他呈色反应*与重氮苯磺酸盐反应与重氮苯磺酸盐反应*与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应* H2SO4-HNO3反应反应*与铜盐反应与铜盐反应1. K+、Na+的火焰反应的火焰反应 附录附录K+火焰火焰 紫色紫色+0.1%四苯硼钠四苯硼钠+HAc白白（二）各种盐的反应（二）各种盐的反应Na+火焰火焰 鲜黄色鲜黄色+醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌例例 青霉素钠青霉素钠 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（4）本品显钠盐的火焰反应（附录）本品显钠

20、盐的火焰反应（附录 ）。）。 例例 青霉素钾青霉素钾 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（3）本品显钾盐的火焰反应（附录）本品显钾盐的火焰反应（附录 ）。）。 2. 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳香第一胺类反应芳香第一胺类反应普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素重氮化重氮化红色红色 HClNaNO2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素碱性碱性-萘酚萘酚（偶合）（偶合）例例 普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 Ch.P（2000） 【鉴别鉴别】（3）本品显芳香第一胺类的鉴别反）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录应（附录）。）。3. 沉淀反应沉淀反应 白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H碱金属盐碱金属

21、盐溶于过量溶于过量HCl或或有机溶剂有机溶剂例例 青霉素钠青霉素钠 青霉素钾青霉素钾 Ch.P（2000） 【鉴别鉴别】（2）取本品约）取本品约0.1g，加水，加水5ml溶解溶解后后，加稀盐酸，加稀盐酸2滴，即生成白色沉淀；此沉淀能在乙滴，即生成白色沉淀；此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中溶解醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中溶解.（三）光谱法（三）光谱法1. IR法法1OCcm17401815V -内酰胺环上的羰基伸缩振内酰胺环上的羰基伸缩振动增强而向高波数方向位移动增强而向高波数方向位移例例 青霉素钠青霉素钠 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱

22、应与对）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集222图）一致。图）一致。例例 青霉素钾青霉素钾 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集223图）一致。图）一致。2. UV-Vis法法A/AEminmax%1cm1 光光谱谱图图样品样品或或分解产物分解产物青霉素青霉素V钾钾 268、274 1.201.25头孢唑林钠头孢唑林钠 272 264292头孢氨苄头孢氨苄 262 220245max %1cm1E头孢噻肟钠头孢噻肟钠 262 400440A/Anm339HA 苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸

23、酸苯苯唑唑青青霉霉素素钠钠Cu2+pH3.8CNCH3ONOOHNCH3CH3SHCOOHNOCONHCH3NOSCH3CH3COONa Cu2+（四）色谱法（四）色谱法1. TLC法法2. HPLC法法对照品法对照品法比较比较Rf和斑点颜色和斑点颜色比较比较tR例例 头孢拉定头孢拉定 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品与头孢拉定对照品适量）取本品与头孢拉定对照品适量,分别加水溶解并稀释制成每分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含中约含6mg的溶液的溶液.作为供试品溶液和对照品溶液，照薄层色谱法（作为供试品溶液和对照品溶液，照薄层色谱法（附录附录 B）试验，吸取上述两种溶液各）试验，

24、吸取上述两种溶液各5m ml，分别，分别点于同一硅胶点于同一硅胶G薄层板上，以薄层板上，以0.1mol/L枸橼酸溶枸橼酸溶液液-0.2mol/L磷酸氢二钠溶液磷酸氢二钠溶液-丙酮（丙酮（60:40:1.5）为）为展开剂，展开，于展开剂，展开，于105加热加热15分钟后，检视，供分钟后，检视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的颜色与位置相同。液所显主斑点的颜色与位置相同。例例 头孢拉定头孢拉定 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（2）在含量测定项下记录的色谱图）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液中

25、，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。主峰的保留时间一致。 例例 头孢氨苄头孢氨苄 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。主峰的保留时间一致。 （2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集（光谱集1090图）一致。图）一致。 （五）微生物检定法（五）微生物检定法例例 青霉素钠青霉素钠 Ch.P（2000） 【鉴别鉴别】（1）取本品与已知含量的青霉素适量，分）取本品与已知含量的

26、青霉素适量，分别加水制成每别加水制成每1ml中约含中约含50m mg的溶液，各取的溶液，各取1ml，加入不，加入不少于少于200单位的青霉素酶溶液单位的青霉素酶溶液1ml，在，在37灭活灭活1小时后，小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多取灭菌滤纸片，分别用上述溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金色黄色葡萄球菌余的液体，置摊布金色黄色葡萄球菌CMCC(B)26003的的培养基上，在培养基上，在37培养约培养约16小时后均无抑菌作用，而用小时后均无抑菌作用，而用同一方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用。同一方法检查未经青霉素酶灭活的溶液均有抑菌作用。对照品对照法对照

27、品对照法三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查*高分子聚合物高分子聚合物*吸光度杂质吸光度杂质*有关物质有关物质*异构体异构体例例 青霉素钠青霉素钠 【检查检查】青霉素聚合物青霉素聚合物例例 青霉素钾青霉素钾 【检查检查】青霉素聚合物青霉素聚合物例例 阿莫西林阿莫西林 【检查检查】阿莫西林聚合物阿莫西林聚合物（青霉噻唑蛋白（青霉噻唑蛋白 + 青霉素、青霉噻唑多肽类）青霉素、青霉噻唑多肽类）例例 头孢他啶头孢他啶 【检查检查】头孢他啶聚合物头孢他啶聚合物例例 头孢曲松钠头孢曲松钠 【检查检查】头孢曲松聚合物头孢曲松聚合物例例 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 【检查检查】头孢哌酮聚合物头孢哌酮聚合物例例 青霉

28、素钠青霉素钠 Ch.P（2005） 【检查检查】青霉素聚合物青霉素聚合物 照分子排阻色谱法（附录照分子排阻色谱法（附录 H）测定。）测定。 填充剂填充剂 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10（40120m） 流动相流动相A 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（pH7.0） 0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39) 流动相流动相B 水水 流速流速 1.5ml/min 检测波长检测波长 254nm例例 头孢他啶头孢他啶 Ch.P（2005） 【检查检查】头孢他啶聚合物头孢他啶聚合物 照分子排阻色谱法（附照分子排阻色谱法（附录录 H）测定。）测定。 填充剂填充剂

29、葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10（40120m） 流动相流动相A 含含3.5%硫酸铵硫酸铵0.1mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 (pH7.0)0.1mol/LNa2HPO4-0.1mol/LNaH2PO4(61:39) 流动相流动相B 水水 流速流速 0.8ml/min 检测波长检测波长 254nm例例 头孢呋辛酯中异构体检查头孢呋辛酯中异构体检查SNH2CHONCOHNCH3COOH例例 头孢氨苄中头孢氨苄中“有关物质有关物质”的检查的检查-苯甘氨酸苯甘氨酸（对照品法）（对照品法） 1%7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸氨基去乙酰氧基头孢烷酸(对照品法对照品法) 1%其他杂质其他杂质（高低浓度对比法

30、）（高低浓度对比法） 1%CH2CH3CH3COOHSNHCONOH例例 青霉素钠青霉素钠 Ch.P（2005） 【检查检查】吸光度吸光度 取本品，加水制成每取本品，加水制成每1ml中中含含1.80mg的溶液，照紫外的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录可见分光光度法（附录 A），在），在280nm的波长处测定吸光度，不得大的波长处测定吸光度，不得大于于0.10；在；在264nm的波长处有最大吸收，吸光度的波长处有最大吸收，吸光度应为应为0.800.88。CH3NSOHNCH3COONaOCCH2*内酰胺类不直接与碘反应内酰胺类不直接与碘反应*内酰胺类碱水解产物可与碘内酰胺类碱水解产物可与碘发生

31、定量反应发生定量反应1. 原理原理（一）碘量法（一）碘量法（剩余碘量法）（剩余碘量法）四、含量测定四、含量测定例例 注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 Ch.P（2000） 【含量测定含量测定】取装量差异项下的内容物，精密取装量差异项下的内容物，精密称取约称取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加，置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液（醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml,精密加入

32、碘滴定液（精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇，密塞，摇匀，在匀，在2025暗处放置暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴分钟，用硫代硫酸钠滴定液（定液（0.01mol/L）滴定，）滴定，近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘，置碘瓶中，加醋酸瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密，精密加入碘滴定液（加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（分钟，用硫代硫酸

33、钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。法测定作对照，算出供试品的含量。2. 讨论讨论 酸酸 *Na2S2O3 SO2 + S（1）弱酸性环境）弱酸性环境pH4.5*普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐下会产生复盐碱碱 IOIIOH2（2）温度）温度2426温度温度 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘（3）氧气的干扰）氧气的干扰OH2I2OI422H2 碘瓶碘瓶（4）反应时间）反应时间* 长时间放置使空气氧化作用加强长时间放置使空气氧化作用加强20* 反应反应20

34、后，后， 耗碘量随时间耗碘量随时间 的变化较小，的变化较小， 可减小测定误可减小测定误 差。差。（5）空白试验）空白试验A. 消除样品已降解产物的干扰消除样品已降解产物的干扰B. 消除样品中其他消耗碘的杂质的消除样品中其他消耗碘的杂质的 干扰干扰C. 消除碘挥发造成的误差消除碘挥发造成的误差以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定（6）采用对照品平行测定）采用对照品平行测定A. 可消除温度、可消除温度、pH、操作、环、操作、环 境等条件的影响境等条件的影响B. 使本法测定结果与微生物检定使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致例例 注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 Ch.P

35、（2000） 【含量测定含量测定】取装量差异项下的内容物，精密取装量差异项下的内容物，精密称取约称取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置，置碘瓶碘瓶中，加中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液（醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml,精密加入碘滴定液（精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇，密塞，摇匀，在匀，在2025暗处放置暗处放置20分钟分钟，用硫代硫酸钠滴，用硫代硫酸钠滴定液（定液

36、（0.01mol/L）滴定，）滴定，近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘，置碘瓶中，加醋酸瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密，精密加入碘滴定液（加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为）滴定，作为空白空白。同时用青霉素钠对照品。同时用青霉素钠对照品同同法法测定作测定作对照对照，算出供试品的含量。，算出供试品的

37、含量。（二）电位配位滴定法（二）电位配位滴定法汞量法汞量法*内酰胺类不直接与汞盐反应内酰胺类不直接与汞盐反应*内酰胺类水解产物可与汞盐内酰胺类水解产物可与汞盐 发生定量反应发生定量反应1. 原理原理青青霉霉胺胺青青霉霉噻噻唑唑酸酸青青霉霉素素类类 OHOH水解水解水解水解青霉胺络汞青霉胺络汞 2Hg6 . 4pHCh.P（2000）青霉素钾青霉素钾青霉素钠青霉素钠苯唑西林钠苯唑西林钠普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素氯唑西林钠氯唑西林钠CH2COHNNOSCOONaCH3CH3NaOHCH2COHNCNSCOONaCH3CH3ONaOpH4.6脱羧脱羧CH2CONHCH2NSCOOHCH3CH3CH

38、3CCHCH3SH NH2COOH6 . 4pHHg(NO3)2pH4.6HgRS2）（2:1突跃突跃11:1突跃突跃2CH3CCHCH3SNH2COOHgHg(NO3)2pH4.6青霉胺络汞青霉胺络汞 青霉胺与硝酸汞发生络合反应。先按青霉胺与硝酸汞发生络合反应。先按2分子青分子青霉胺与霉胺与1分子汞离子的比例络合，发生第一次滴定分子汞离子的比例络合，发生第一次滴定突跃，但突跃范围很小，变化比较平缓，不宜用突跃，但突跃范围很小，变化比较平缓，不宜用于做终点，于做终点，继续用硝酸汞滴定时，青霉胺分子与继续用硝酸汞滴定时，青霉胺分子与汞离子按汞离子按1:1的比例络合，生成稳定的络合物的比例络合，生

39、成稳定的络合物青霉胺络汞，发生第二次滴定突跃。青霉胺络汞，发生第二次滴定突跃。其突跃范围其突跃范围较大，变化较急剧，宜于确定终点。较大，变化较急剧，宜于确定终点。2. 方法方法 总总总总样样V233NOHgHNONaOH醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液滴定滴定水解水解pH4.6 降降醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液降降样样V23NOHgpH4.6滴定滴定3. 讨论讨论（1）电位法指示终点，以第二次滴定）电位法指示终点，以第二次滴定 突跃为终点突跃为终点 反应摩尔比反应摩尔比1:1 （2）空白试验）空白试验 用未降解样品测定用未降解样品测定（3）优点）优点 不需标准品不需标准品例例 青霉素钠青霉素钠 Ch.P（

40、2000） 【含量测定含量测定】取本品约取本品约50mg，精密称定，加，精密称定，加水水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，摇匀,放置放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝酸溶液硝酸溶液5ml，醋酸盐缓，醋酸盐缓冲液冲液（pH4.6）20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴，摇匀，照电位滴定法（附录定法（附录 A）, 用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞-硫硫酸亚汞电极为参比电极，在酸亚汞电极为参比电极，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液（定液（0.02mol/L）缓慢滴定，（控制滴定过程约）缓慢滴定，（控制滴定过程约为为15分钟），不计第一

41、个等当点，计算第二个等分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。当点时消耗滴定液的量。每每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于）相当于7.128mg的总青霉素（按的总青霉素（按C16H17N2NaO4S计算）。计算）。 另取本品约另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，振摇使完全溶解，在室温下,立即用硝酸汞滴定液（立即用硝酸汞滴定液（0.02mol/L）滴定，滴定终）滴定，滴定终点判断方法同上。每点判断方法同上。每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）

42、相当于）相当于7.128mg的降解物（按的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。每计算）。每1mg的的C16H17N2NaO4S相当于相当于1670青霉青霉素单位。素单位。1. 硫醇汞盐法硫醇汞盐法 青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素类类2HgCl降解，咪唑降解，咪唑（1）原理）原理催化剂催化剂nm345324max 青霉素族青霉素族（三）紫外（三）紫外-分光光度法分光光度法 HgCl咪唑咪唑HgClCH3CH3COONaSNHCONOCH2CH2CONSOHNCOONaCH3CH3（降解）（降解）2. 讨论讨论（1）咪唑催化的降解率高，且硫醇汞）咪唑催化的降解率高，且硫醇汞

43、盐稳定盐稳定（3h） （2）侧链有）侧链有-NH2时，需加醋酐先将其时，需加醋酐先将其 乙酰化后才能发生上述反应乙酰化后才能发生上述反应CH3NSOCH3COOHCHCONHNH2 OCHCH223pH9CHCONHNHCOCH3NSOCH3COOHCH32HgCl咪唑咪唑HgClCH3CH3COONaSNHCONOCHNHCOCH3例例 青霉素青霉素V钾片钾片 Ch.P（2000） 【含量测定含量测定】取本品取本品10片（如为糖衣片则除去糖衣）片（如为糖衣片则除去糖衣）,精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V0.15g）置置250ml量瓶中

44、，加水量瓶中，加水150ml，振摇使溶解，加水稀，振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置，置25ml量瓶中，加量瓶中，加咪唑咪唑溶液至刻度，摇匀，置溶液至刻度，摇匀，置60水浴中水浴中加热加热30分钟，取出放冷至室温，照分光光度法（附录分钟，取出放冷至室温，照分光光度法（附录 A ）,在在325nm的波长处测定吸收度；另取青霉素的波长处测定吸收度；另取青霉素V对照对照品，同法测定，计算。品，同法测定，计算。CH3NSOHNCH3C

45、OOKOCCH2O青霉素青霉素V钾钾 C16H17N2O5SK 388.48576CH2OCONSOHNCH3COOHCH3青霉素青霉素V C16H18N2O5S 350.39964青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族 4pH水解水解2. 酸水解酸水解-铜盐法铜盐法JP青霉素族青霉素族螯合物螯合物（不稳定）（不稳定）max320360nm（稳定剂）（稳定剂） 2Cunm320max SHHCCNCCOOHCCH3CH3HHNOCH2COC3. 羟肟酸比色法羟肟酸比色法USPJP-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH2内内酰酰胺胺类类红棕色红棕色羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物 3/Fe3H+（四）（四

46、）RP-HPLC法法特点特点 快速快速 高效高效 灵敏度高灵敏度高 专属性强专属性强 重现性好重现性好 一法多用一法多用(鉴别、检查、含测鉴别、检查、含测)Ch.P例例 头孢克洛头孢克洛 Ch.P（2005） 【含量测定含量测定】 填充剂填充剂 C18 流动相流动相 磷酸二氢钾溶液（磷酸二氢钾溶液（pH3.4）-乙腈乙腈 （92:8） 检测波长检测波长 254nm 对照品对照品 头孢克洛、头孢克洛头孢克洛、头孢克洛-3-异构体异构体 （两者分离度应大于（两者分离度应大于1.5）例例 头孢他啶头孢他啶【鉴别鉴别】 【检查检查】头孢他啶聚合物头孢他啶聚合物 【含量测定含量测定】托西酸舒他西林托西酸

47、舒他西林【鉴别鉴别】 【检查检查】有关物质有关物质 【含量测定含量测定】阿莫西林阿莫西林【鉴别鉴别】 【检查检查】有关物质、阿莫西林聚合物有关物质、阿莫西林聚合物 【含量测定含量测定】（五）生物样品中（五）生物样品中-内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 的分析的分析色谱法，微生物法，放射免疫法色谱法，微生物法，放射免疫法例例 HPLC法测定人血浆中阿莫西林法测定人血浆中阿莫西林 填充剂填充剂 YWG C18 流动相流动相 0.033mol/L磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pH7.2）- 甲醇甲醇 （85:15） 检测波长检测波长 229nm 对照品对照品 阿莫西林阿莫西林 内标内标 替硝唑替硝唑 除蛋白除

48、蛋白 HClO4第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素氨氨基基糖糖苷苷苷苷元元氨氨基基糖糖缩缩合合 一、结构与性质一、结构与性质（一）结构（一）结构碱性环己多元醇碱性环己多元醇OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3H链霉素链霉素（streptomycin）链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺（氨基糖）（氨基糖）链链霉霉双双糖糖胺胺巴龙霉素巴龙霉素（paromomycin）H2H2H2ONH2OHOHONOOHOHOHNOOOHNHOOOHNH2脱氧链霉胺脱氧链霉胺D-核糖核糖D-葡萄糖胺葡萄糖胺（氨基糖）氨基糖）巴龙霉糖巴龙

49、霉糖（氨基糖）（氨基糖）巴龙胺巴龙胺巴龙二糖胺巴龙二糖胺H3HOCONH2OHNH2NH2NHCH3COOHOOR2HNR3R1庆大霉素庆大霉素（gentamycin）（C复合物）复合物）（氨基糖）（氨基糖）绛红糖胺绛红糖胺（氨基糖）（氨基糖）加洛糖胺加洛糖胺脱氧链霉胺脱氧链霉胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R1、R2=CH3 R3=H 庆大霉素庆大霉素C2 R1=CH3 R2=R3=H 庆大霉素庆大霉素C1a R1、R2、R3=H 庆大霉素庆大霉素C2a R1=R2=H R3=CH3H3HHONH2ONH2OHNH2NNHCH3COOHOOCH3奈替米星奈替米星（ne

50、tilmicin）脱氧链霉胺脱氧链霉胺（氨基糖）（氨基糖）绛红糖胺绛红糖胺（氨基糖）（氨基糖）加洛糖胺加洛糖胺2. 性质性质（1）溶解性与碱性）溶解性与碱性溶解性溶解性 -OH 水溶性水溶性碱性碱性 -NH2 可与酸成盐可与酸成盐 临床上多用硫酸盐临床上多用硫酸盐OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3HH2H2H2ONH2OHOHONOOHOHOHNOOOHNHOOOHNH2巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素H3HOCONH2OHNH2NH2NHCH3COOHOOR2HNR3R1H3HHONH2ONH2OHNH2NNHCH3COOHOOCH3庆大霉素庆大

51、霉素奈替米星奈替米星（2）旋光性）旋光性 手性手性C硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素12110720D 硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素555020D 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素11010220D 50mg/ml水溶液水溶液（3）稳定性）稳定性 链霉素链霉素pH57.5稳定稳定链霉双糖胺链霉双糖胺链霉胍链霉胍链霉素链霉素 HOH-N-甲基甲基葡萄糖葡萄糖胺胺链霉糖链霉糖OH-麦芽酚反应麦芽酚反应坂口反应坂口反应反应反应OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3H坂口反应坂口反应麦芽酚反应麦芽酚反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应（4）UV链霉素链霉素max=230n

52、mOOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3H（一）茚三酮反应（一）茚三酮反应 -氨基醇、羟基胺类氨基醇、羟基胺类茚三酮茚三酮氨基糖苷类氨基糖苷类蓝紫色蓝紫色二、鉴别试验二、鉴别试验水合茚三酮水合茚三酮2OHCCOCOCHH2NCOOHR-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式CNCH2RCOCOCOHCHRNCCOH2OCOHNH2CCO+缩合缩合COCONCCOCOHC例例 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约5mg，加水溶解后，加水溶解后，加加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶

53、液茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶与吡啶0.5ml，在水浴中加热，在水浴中加热5分钟，即显紫蓝色。分钟，即显紫蓝色。例例 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约5mg，加水溶解后，加水溶解后，加加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶与吡啶0.5ml，在水浴中加热，在水浴中加热5分钟，即显蓝紫色。分钟，即显蓝紫色。（二）（二）Molisch反应反应呈呈色色羟羟甲甲基基糠糠醛醛糠糠醛醛六六碳碳糖糖五五碳碳糖糖萘萘酚酚 H水解水解或蒽酮或蒽酮例例 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品

54、约）取本品约1mg，加水，加水2ml溶解溶解后，加后，加0.2%蒽酮的硫酸溶液蒽酮的硫酸溶液4ml，在水浴中加热，在水浴中加热15分钟，冷却，即显蓝紫色。分钟，冷却，即显蓝紫色。例例 硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约10mg，加水，加水2ml溶解溶解后，加后，加0.1%蒽酮的硫酸溶液蒽酮的硫酸溶液3ml，即显蓝至蓝绿，即显蓝至蓝绿色。色。（三）（三）N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛 H+樱桃红色樱桃红色（Elson-Morgan反应）反应）乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺

55、氨氨基基糖糖苷苷类类 NH水解水解链霉素链霉素庆大霉素庆大霉素奈替米星奈替米星OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3HN-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应COCH3CH3NNCOCH3CH3H3CH3CHNCHH对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛 H+HNCH3COCH3HOCH2CHOH3OH- (缩合缩合)乙酰丙酮乙酰丙酮例例 硫酸新霉素硫酸新霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约10mg，加水，加水1ml溶解溶解后，加盐酸溶液（后，加盐酸溶液（9100）2ml，在水浴中加热，在水浴中加热10分钟，加分钟，加8%氢氧化钠

56、溶液氢氧化钠溶液2ml与与2%乙酰丙酮乙酰丙酮水溶液水溶液1ml，置水浴中加热，置水浴中加热5分钟，冷却后，加对分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液1ml，即显樱桃红色。，即显樱桃红色。（四）麦芽酚反应（四）麦芽酚反应链霉素特征反应链霉素特征反应 麦麦芽芽酚酚链链霉霉糖糖链链霉霉素素分分子子重重排排3FeOHH+紫红色紫红色（Maltol反应）反应）麦芽酚反应麦芽酚反应OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH3H/3+3OOCH3OFeH+ Fe3+ OHOOCH3OH分子重排分子重排麦芽酚麦芽酚例例 硫酸链霉素硫酸链霉素 Ch.P（

57、2005） 【鉴别鉴别】（2）取本品约）取本品约20mg，加水，加水5ml溶解溶解后，加氢氧化钠试液后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热，置水浴上加热5分钟分钟,加硫酸铁铵溶液（取硫酸铁铵加硫酸铁铵溶液（取硫酸铁铵0.1g，加，加0.5mol/L硫酸溶液硫酸溶液5ml使溶解）使溶解） 0.5ml，即显紫红色。，即显紫红色。（五）（五）坂口反应坂口反应链霉胍特征反应链霉胍特征反应链链霉霉胍胍链链霉霉素素 OH水解水解（Sakaguchi反应）反应）次溴酸钠次溴酸钠 8-羟基喹啉羟基喹啉（或（或- 萘酚）萘酚）OOHHOOHNHOOOOHOCHOCH3OHCOHNHNHH2NNH2NHNHH

58、3H坂口反应坂口反应NOOBrNOH BrOOBrRNHCONHNN+ BrORNCNNH2OH-例例 硫酸链霉素硫酸链霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取本品约0.5mg，加水，加水4ml溶解溶解后，加氢氧化钠试液后，加氢氧化钠试液2.5ml与与0.1%8-羟基喹啉的乙羟基喹啉的乙醇溶液醇溶液1ml，放冷至约，放冷至约15，加次溴酸钠试液，加次溴酸钠试液3滴滴,即显橙红色。即显橙红色。（六）（六） 反应反应 24SO例例 【 鉴别鉴别】显硫酸盐的鉴别反应显硫酸盐的鉴别反应 Ch.P（2005） 硫酸新霉素硫酸新霉素 硫酸链霉素硫酸链霉素 硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素 硫酸依

59、替米星硫酸依替米星 硫酸奈替米星硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 硫酸西索米星硫酸西索米星 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素 硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素（七）色谱法（七）色谱法TLC，HPLC法法例例 【鉴别鉴别】HPLC法法 Ch.P（2005） 硫酸依替米星硫酸依替米星 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 硫酸奈替米星硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 硫酸西索米星硫酸西索米星 硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素 妥布霉素妥布霉素例例 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（3）HPL

60、C法法 【检查检查】小诺霉素组分小诺霉素组分 HPLC法法例例 硫酸依替米星硫酸依替米星 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（2）HPLC法法 【含量测定含量测定】HPLC法法例例 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素 Ch.P（2005） 【鉴别鉴别】（2）HPLC法法 【含量测定含量测定】HPLC法法例例 【鉴别鉴别】TLC法法 Ch.P（2005） 硫酸依替米星硫酸依替米星 硫酸奈替米星硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 硫酸西索米星硫酸西索米星 硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 妥布霉素妥布霉素（八）光谱法（八）光谱法IR 法法例例 【鉴别鉴别】红外