鲎试验法检查乳酸环丙沙星注射液的细菌内毒素限量

1、    鲎试验法检查乳酸 环丙沙星注射液的细菌内毒素限量        关键词细菌内毒素乳酸环丙沙星鲎试验法中分类号R944.1 乳酸环丙沙星注射液是我院最近开始生产的制剂，本文根据细菌内毒素检查的实验设计1里的方法，对乳酸环丙沙星注射液的细菌内毒素检验进行了实验研究。1材料鲎试剂(福建省福州东方鲎试剂厂，批号990308，标示灵敏度0.5Eu.ml-1，0.1ml/支；湛江安度斯生物有限公司，批号980729，标示灵敏度0.5Eu.ml-1，0.1ml/支)；细菌

2、内毒素工作标准品(湛江安度斯生物有限公司，批号981124，0.5Eu/支，10Eu/支)；细菌内毒素检查用水(湛江安度斯生物有限公司，批号980730，2ml/支)，乳酸环丙沙星注射液(本院制剂室，批号990504，990702，990719，规格100ml:0.2g)。2方法与结果2.1细菌内毒素限值(L)的确定乳酸环丙沙星注射液热原检查剂量按家兔体重每1kg注谢3ml2。静脉给药时无任何不良反应的内毒素阈剂量K=5Eu.kg-11。本品细菌内毒素理论限值L=5/3=1.6Eu.ml-1。2.2鲎试剂灵敏度的复核按中国药典1995年版“细菌内毒素检查法”操作，根据鲎试剂灵敏度的标示值(0.

3、5Eu.ml-1)，将细菌内毒素工作标准品(10Eu/支)用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即1.0Eu.ml-1，0.5Eu.ml-1，0.25Eu.ml-1，0.125Eu.ml-1，每稀释一步均置旋涡混合器上混合30秒钟。每一浓度平行做4管。结果两批鲎试剂反应结果相同，如表1所示。2.3样品无抑制浓度的确定以灵敏度=0.5Eu.ml-1的鲎试剂为基准，计算出样品的基准稀释倍数D=L/=1.6/0.5=3.2倍。用细菌内毒素检查用水将环丙沙星注射液样品稀释3.2倍，再按等比稀释将样品稀释为6.4，12.8，25.6，51.2倍，记为D系列样

4、品溶液。取D系列样品溶液分别稀释内毒素工作标准品(0.5Eu.ml-1)，并得到一系列含有2(1Eu.ml-1)内毒素的样品溶液，记为E系列阳性样品溶液。用E系列阳性样品溶液分别对两批鲎试剂做试验，每一样品浓度做2管阳性样品对照，并用相同浓度的D系列样品溶液做一支阴性对照。结果两批鲎试剂的反应结果相同，如表2所示。试验结果表明，在13.2倍时样品溶液已无抑制作用，所以样品可按13.2倍或更高倍数稀释做鲎试验检查。表1两批鲎试剂灵敏度复核情况内毒素浓度(Eu.ml-1)1.00.50.250.125阴性对照1(+)(+)(-)(-)(-)2(+)(+)(-)(-)(-)3(+)(+)(-)(-)

5、(-)4(+)(+)(-)(-)(-)     表2不同浓度样品溶液鲎试验结果样品稀释系列13.216.4112.8125.6151.2阳性样品对照(+)(+)(+)(+)(+)(含2内毒素)(+)(+)(+)(+)(+)阴性样品对照(不含内毒素)(-)(-)(-)(-)(-)     2.4抑制增强试验当样品按13.2倍稀释时，根据公式D=L/，计算得出做抑制增强试验的鲎试剂灵敏度=L/D=1.6/3.2=0.5Eu.ml-1,所以，我们采用灵敏度=0.5Eu.ml-1的鲎试剂做抑制增强试验。用细菌内毒素检查用水

6、将乳酸环丙沙星注射液稀释3.2倍，此样品溶液记为D3.2。将内毒素工作标准品(10Eu/支)用D3.2样品溶液溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即1.0Eu.ml-1，0.5Eu.ml-1，0.25Eu.ml-1，0.125Eu.ml-1，每稀释一步均置旋涡混合器上混合30秒钟，以此系列的样品分别对2批鲎试剂做抑制增强试验，以D3.2代替水做为阴性对照，测得了批样品的反应结果一致，如表3，表4所示。 表3抑制增强试验结果(鲎试剂批号990308)内毒素浓度(Eu.ml-1)1.00.50.250.125阴性对照1(+)(-)(-)(-)(-)2(+)(-)(-)(

7、-)(-)3(+)(-)(-)(-)(-)4(+)(-)(-)(-)(-)     表4抑制增强试验结果(鲎试剂批号980729)内毒素浓度(Eu.ml-1)1.00.50.250.125阴性对照1(+)(-)(-)(-)(-)2(+)(-)(-)(-)(-)3(+)(-)(-)(-)(-)4(+)(-)(-)(-)(-)     2.5样品的细菌内毒素检测结果将样品13.2稀释后，分别用2批鲎试剂进行检测每一个批号的样品作2管，阴性对照1管，阳性对照1管，样品阳性对照1管(以13.2倍样品溶液代替水稀释内毒素工作品)，最后的检测结果一致，如表5所示。 表5样品的细菌内毒素检测结果样品批号管号阴性对照阳性对照样品阳性对照12990504(-)(-)(-)(+)(+)990702(-)(-)(-)(+)(+)990719(-)(-)(-)(+)(+)     2.6家兔法热原检查按中国药典1995年版操作，结果3批样品热原检查均符合规定。 3讨论试验结果表明，将样品13.2稀释溶液对标示灵敏度为0.5Eu.ml-12批不同厂家生产的鲎试剂均无抑制增强作用。样品的细菌内毒素试验表明，将样品13.2稀释以标示灵敏度为0.5Eu.ml-1的鲎试剂可用于