乙肝病毒DNA的实验室检测ppt课件

1、LOREM IPSUM DOLOR1、荧光定量PCR技术2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA与临床荧光定量PCR技术荧光定量荧光定量PCR技术技术Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反响，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术经过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶TaqDNA聚合酶的作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。 每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸dNTP 实时荧光定量PCR技术，是指在反响体系中参

2、与荧光标志，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，经过规范曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进展定量分析的一种技术，是迄今对知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。荧光定量荧光定量PCR技术技术PCR 反响过程5533d.NTPsTaq 酶Primers5353535353535353反响组分反响组分变变 性性535353535353延延 伸伸53535353353TaqTaq55重重 复复退退 火火5353535355335353循环循环24个拷贝个拷贝循环循环38个拷贝个拷贝53535353535353535353533553535353荧光定量PCR原理插入染料法插入染料法

3、 SYBR Green I杂交探针法杂交探针法(最常用最常用) TaqManTaqMan探针5533d.NTPsTaq酶Primers5353535353535353反响体系变 性535353535353Taql53RQProbe53RQ535353RQ退 火531. 链取代Taq3QR5533QTaqR52. 水 解3. 聚 合53QTaqR354. 检测荧光533QTaqR5l乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染 一 乙型肝炎病毒构造及特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：维护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，普通不存在于血循环中HBcAb: 非维护性抗体，HBcAb-IgM提

4、示HBV处于复制形状HBeAg：HBV复制及强感染性的目的HBeAb：有一定的维护作用，预后良好乙肝病毒的感染1. “两对半 ：机体的免疫反响形状；2. “携带者、“大三阳、“小三阳等免疫学目的不能 反响体内病毒复制程度与感染程度。HBsAg()HBV-DNA() HBeAg ()HBV-DNA()3. 血清学目的()不能排除HBV感染。乙肝病毒的感染5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90左右 HBeAg与HBV DNA有着良好的相关性4. 也能够出现HBsAg()，HBV-DNA()。乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染慢性慢性HBV感染分期及相关实验室检测目的感染分期及相关实验室检测目的

5、鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研讨进展 2021 HBV DNA检测的临床意义HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV存在最直接的根据存在最直接的根据HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV复制的标志复制的标志HBV DNAHBV DNA是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志HBV DNAHBV DNA对乙肝两对半起补充作用对乙肝两对半起补充作用HBV DNAHBV DNA是目前判别乙肝抗病毒药物疗效最敏感的目的是目前判别乙肝抗病毒药物疗效最敏感的目的HBV DNAHBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎可检测出隐匿性慢性乙型肝炎有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断有利于

6、献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断提供直接证据缩短提供直接证据缩短“窗口期窗口期HBV DNA检测的临床意义 调查阐明并不是一切“大三阳的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是一切“小三阳的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV能否处于复制形状，最准确的方法还是经过检测HBV DNA来决议。HBV DNA检测的临床意义HBV DNA检测的临床意义干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。 目前尚无一种能迅速、直接杀死去除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能到达