仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法研究 论文

1、仪器与纸片扩散检测耐甲氧西林葡萄球菌的方法研究 论文    摘要 目的：比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)仪器检测与纸片扩散检测的检出率。方法：采用KB纸片扩散法，全自动微生物分析仪法，并以琼脂稀释法为标准对临床分离的63株葡萄球菌进行检测，比较3种方法的检出率。 结果：对63株葡萄球菌(凝固酶阳性50株，凝固酶阴性13株)3种方法检出率分别为60.3%、57.1%、50.8%。含4% 氯化钠(NaCl) MH平板药敏纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定系统法差异无显著性(P0.05)，与琼脂稀释法差异无显著性(P>0.05)，而仪器法与琼

2、脂稀释法差异无显著性(P0.05)。 结论：KB纸片扩散法,仪器法和作为MRS检测推荐方法的含盐琼脂平板稀释法对MRS的检出率,三者差异均无显著性，仪器法与KB纸片扩散法均可用于临床常规实验室MRS的检测。Abstract Objective: A Comparative Analysis of methicillin-resistant Staphylococcus (MRS) detection equipment and disk diffusion rate of detection. Methods: KB disk diffusion method, fully automated

3、 microbial analysis method, and agar dilution method as a standard of 63 clinical isolates of Staphylococcus test, compared with 3 methods of detection rate. Results: 63 of staphylococcus (coagulase-positive 50, 13 coagulase-negative) 3 detection rates were 60.3% and 57.1%, 50.8%. With 4% sodium lu

4、nwen114chloride (NaCl) M H sensitivity flat disk diffusion method and VITEK 32 automatic identification system, micro-organisms law there was no significant difference (P> 0.05), and agar dilution method was no significant difference (P> 0.05), and equipment and agar dilution method was no sig

5、nificant difference (P> 0.05). Conclusion: KB disk diffusion method, apparatus and MRS as a detection method recommended by the salt agar plate dilution of the MRS detection rate of the three was no significant difference, apparatus and method KB disk diffusion method can be used for clinical MRS

6、 conventional laboratory testing. 关键词 耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法 Key words methicillin-resistant Staphylococcus aureus; disk diffusion method; law instruments; agar dilution method 耐甲氧西林葡萄球菌(Methicillinresistant Staphylococcus，MRS)所致院内感染已成为全球范围内一个越来越严重的问题，有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS，为临床合理

7、选择抗生素提供依据，因而快捷、准确的检测方法对快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病学调查十分重要。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、Etest法、仪器法及PCR技术检测mecA基因等，我们将临床分离的63株葡萄球菌用含4%氯化钠(NaCl) MH平板苯唑西林纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定仪法进行检测比较，并以含6g/ml苯唑西林的琼脂稀释法为标准，评价其准确性。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株及其来源自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规

8、分离得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50 株，凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。 1.1.2苯唑西林纸片购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。 1.1.3仪器法国生物梅里埃公司生产的VITEK32型鉴定系统及配套的GPSSV葡萄球菌药敏检测卡。 1.2方法 1.2.1含4

9、% NaCl MH平板纸片扩散法由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4% NaCl的MH平板，贴1 g/片苯唑西林药敏纸片，35 、24 h观察结果(CNS孵育48 h)金黄色葡萄球菌(SA)抑菌圈13 mm为敏感，11 mm12 mm为中介，10 mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌18 mm为敏感，17 mm为耐药。 1.2.2琼脂稀释法NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4% NaCl、6 g/ml苯唑西林MH平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35 、24 h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一

10、个菌落生长即判为MRS。 1.2.3仪器检测挑取待检菌落，严格参照GPSSV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPSSV药敏卡上机，用VITEK32型全自动微生物鉴定仪检测结果。 1.2.4质量控制以金黄色葡萄球菌ATCC(R)43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。  2结果 3种方法对MRS的检出率。 对3种方法MRS检出率进行2检验，含4% NaCl MH平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显著性(2=1.16，P>0.

11、05),VITEK32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显著性(2=0.51，P0.05),同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK32型仪器检测法MRS检出率差异也无显著性(2=0.13，P0.05)。 3讨论 目前国内外虽然用以检测MRS的方法很多，由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果看，纸片扩散法与被NCCLS推荐

12、为参考方法的琼脂稀释法对MRS检出率差异无显著性，因此可以用于临床常规微生物实验室,对MRS进行常规检测。VITEK32型GPSSV药敏卡方法简单、快捷，从结果看其MRS检出率与琼脂稀释法差异无显著性，虽然其与纸片扩散法MRS检出率也无明显差异，但其检测速度比纸片扩散法更快捷，可以及时给出准确的报告,节约了时间,因此评估GPSSV药敏卡的准确性，为临床找出一种准确而简单、快捷的筛选MRS的方法是极有意义的，且VITEK32型微生物鉴定药敏分析系统配套使用的GPSSV卡葡萄球菌药敏检测，其苯唑西林检测孔含有4% NaCl，符合NCCLS推荐的检测MRS的方法标准，因此，仪器法GPSSV卡可用于葡

13、萄球菌耐甲氧西林的检测，且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室MRS检测,但对有条件的实验室建议采用仪器法，目前也出现了一些更准确可靠的方法，即对耐甲氧西林葡萄球菌进行基因层次的分型检测，并也出现了商品化的几种mecA基因乳胶检测法，也是目前可采用的较好的方法。 参考文献： 1Mulligan ME.Murrayleisure KA.Ribner BS.et al.Methicillinresistant Staphylococcus aureus:a consensus review of the microbiology Pathogenesis and epidemiology with implications for prevention and management AM JJ.Med 1993;94:313. 2马纪平，苏建荣.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌J.中华检