几种花生根瘤菌菌剂保藏效果的比较

1、几种花生根瘤菌菌剂保藏效果的比较王宝林,詹火元,陶佳喜,郑永良(黄冈师范学院生命科学与工程学院,湖北黄冈438000摘要将土壤与农家有机肥按64比例混合成肥土,肥土与草木灰按一定比例混合成不同的吸附剂,加入菌液后即成为不同菌剂。将菌剂密封隔绝空气,室温条件下保藏,定时测定其菌量。保藏150d时,测得肥土1号、肥土2号、肥土3号、液体、草木灰5种菌剂的菌量依次为9.1亿、7.5亿、3.3亿、1.1亿和0.3亿/g;菌体存活率依次为85%、69.4%、30.3%、10.2%和2.8%。为比较与研究的方便,引入了存活率和存活率曲线的概念,并对吸附剂的功能和质量要求问题进行了讨论。关键词花生根瘤菌;菌

2、剂保藏;存活率曲线中图分类号Q93-336文献标识码 A 文章编号0517-6611(200619-4985-021材料与方法1.1 材料花生根瘤菌(华中农业大学提供;草木灰(无杂质,过80目筛;土壤(菜园土,晒干,去杂质,打碎,过80目筛;农家有机肥料(完全腐熟,含土量低,过80目筛;肥土(过筛土壤与过筛有机肥按64比例混合而成1。1.2 方法1.2.1 菌种的制备。制备YM A培养基,接种7号花生根瘤菌;制备黄豆饼浸出液培养基,接种8号花生根瘤菌。菌种28振荡培养84h。经显微直接计数法测定7号菌菌液的菌量为10.8亿/m l,8号菌菌液的菌量为32.2亿/m l。1.2.2 吸附材料的p

3、H值调节和持水量测定。用4%H C l调节草木灰的pH值至6.87.0,肥土不进行pH值调节。经测定,肥土的持水量为0.5m l/g,草木灰的持水量为2.2m l/g。1.2.3 吸附材料的装瓶与灭菌。准备洁净干燥的200m l三角瓶25个,分成5组,每组5个。按表1第1栏内容贴上标签。按表1第2、3栏内容装入吸附材料2。装好后加棉塞,包扎好,160170干热灭菌2h。表15种菌剂各瓶中内容物的名称、数量及计算所得菌量菌剂名称肥土数量g草本灰数量g7号菌液数量m l8号菌液数量m l菌液总量m l总重量g计算所得菌量亿/g肥土1号10000505015010.7肥土2号681721.843.2

4、6515010.8肥土3号42.528.542.536.57915010.9液体00150015015010.8草木灰050752510015010.8注:肥土1号指肥土草木灰=10,肥土2号指肥土草木灰=82,肥土3号指肥土草木灰=64。1.2.4 添加菌液,密封,保藏。添加菌液在超净工作台上按表1第4、第5栏要求进行。加菌液后,用宽胶带严密封口,确保隔绝空气,黑暗处室温下保藏5个月2。1.2.5 菌量的测定方法。零时的菌量以计算所得菌量为准(表1。零时以后菌量每30d测定1次,采用平板菌落计数法计数。2结果与分析2.1 菌量、测定结果和存活率如前述,零时的菌量以计算所得菌量为准,因为它与实

5、测结果差别不大,且不影响对保藏效果的评价。每次测定所得菌量除以零时菌量即得出相对应时间菌体的存活率3。5种菌剂各次的测定结果及计算后得出的相对应存活率见表2。表2花生根瘤菌5种菌剂在不同保藏期的菌量及相对应的存活率测定日期保藏天数d肥土1号菌量亿/g存活率%肥土2号菌量亿/g存活率%肥土3号菌量亿/g存活率%液体菌量亿/g存活率%草木灰菌量亿/g存活率%2004-11-20010.7100.010.8100.010.9100.010.8100.010.8100.0 2004-12-203019.6183.214.9138.012.4113.89.386.57.771.2 2005-01-196

6、018.8175.714.0129.912.0110.08.578.3 6.257.4 2005-02-189016.9157.112.6116.811.0100.17.469.0 4.339.8 2005-03-2012013.9130.210.698.17.770.6 3.734.4 1.817.0 2005-04-191509.185.07.569.4 3.330.3 1.110.20.3 2.82.2存活率曲线以时间(保藏天数为横坐标,以存活率(0200%为纵坐标绘制而成的曲线,称为存活率曲线。存活率曲线是一种不规则的曲线,由于保藏期的前、后两段气温稍高,存活率变化较大,中间一段时间气

7、温较低,存活率变基金项目湖北省教育厅重点研究项目(2003A002。作者简介王宝林(1944-,男,河南许昌人,副教授,从事微生物教学与研究工作。收稿日期2006-06-19化幅度较小,故存活率曲线一般略呈不规则的“S”型。通过存活率曲线可清晰直观地对多种菌剂的保藏效果进行对比和评价,也便于对同一菌剂不同时间段的保藏效果进行研究。5种菌剂的存活率曲线见图1。2.3 保藏效果的比较与判定由表2和存活率曲线可知:肥土1号的保藏效果最好,保藏150d的菌量和存活率分别是9.1亿/g和85%,与宋玉清报道的草炭制剂的保藏效果安徽农业科学,J ou rn a l o f A n h u i A g r

8、i.S c i.2006,34(19:4985-4986责任编辑孙红忠责任校对孙红忠相似4,可进行5个月以上的保藏5。肥土2号和肥土3号的保藏效果排在第2、第3位,保藏150d 的菌量依次是7.5亿、3.3亿/g ,存活率依次是69.4%和30.3%,可进行45个月的保藏。液体菌剂的保藏效果位居第4,保藏90d 的菌量为7.4亿/m l ,存活率为69%,与周平贞报道的存活率70%80%的结果接近;保藏150d 的存活率为10.2%,与宋玉清等报道的144d 存活率38%41.4%的结果相差较远4。液体菌剂适于3个月以内的保藏。草木灰菌剂的保藏效果最差 ,没有实用价值。图1 5种菌剂的存活率曲

9、线3 讨论花生根瘤菌的推广应用有2项技术难题:一是工业化生产的问题,二是提高质量、降低价格的问题6。吸附剂是固体菌剂的生产原料,它的质量和价格影响产品的质量和价格。应加强吸附剂的功能、质量要求诸方面的研究工作。笔者认为,吸附剂有3个方面的功能:一是载体功能;二是营养功能,向菌体提供水分和其他营养物质,使菌体得以适度增殖或维持低水平代谢而不招致死亡;三是对保藏环境中的pH 值、渗透压、温度变化等起缓冲作用,吸收有害的代谢产物,稳定菌体的生存环境。陈华葵指出:“吸附剂的要求是通气良好,持水量高”,“在以泥炭作吸附剂时,尽可能采用有机质含量在30%以上的高品位中性泥炭”7。据此,可对吸附剂指出4项初步的要求:一是通气良好,二是持水量高,三是有机质含量在30%以上,四是酸碱度中性。有必要进行吸附剂主要化学成分、主要物理性状与产品质量、保藏效果之间相关性的研究,对吸附剂提出更具体全面的质量要求。参考文献1姚瑞林,李健宝.花生根瘤的应用技术及其肥效(二J.花生科技,1989(2:17.2周平贞,胡济生.我国花生根瘤技术应用与研究进展J.土壤学报,1990,27(4:25-29.3宋玉清,马麟祥,江木兰.花生根瘤菌剂及其接种效应J .辽宁农业科学,1993(2:52.4宋玉清.花生根瘤菌剂的贮存试