葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度ppt课件

1、生物化学与分子生物学专业XXX邮箱:葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.1.掌握血糖测定原理，计算方法，参考正常值，临床意义。2.了解尿糖的测定及意义。1.搜集耳缘静脉血,制备血浆,葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度。2.搜集尿液,班氏法测定。一.实验要求 二.实验内容 .血糖blood glucose,BG指血浆清中的糖类物质，主要为葡萄糖。一.血糖的来源：食物、糖原的分解、糖异生。二. 血糖的去路：有氧氧化、转换成非糖物质、尿排出、糖酵解。血糖血糖.1.正常血糖浓度: 3.9-6.1 mmol/L(成年人空腹)2. 低血糖: 低于 2.8 mmol/L3. 高血糖: 超越 7.8 mmol/L4.2.

2、低血糖的要素：胰岛素、磺脲类药、饮酒、严重饥饿5. 高血糖的要素：进食、心情紧张时、糖尿病.6.3. 糖尿病的诊断和治疗监视、新生儿低血糖症等.肾上腺素由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素。肾上腺素升高血糖机制：在应激形状、内脏神经刺激和低血糖等情况下，肾上腺素被释放入血液循环，促进糖原分解并升高血糖，促进脂肪分解，促进非糖物质向血糖的转化，使血糖浓度增大。 肾上腺素肾上腺素adrenaline;epinephrine .一、血糖测定一、血糖测定福林-酚试剂法葡萄糖氧化酶法 邻甲苯胺法.葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶GO

3、D氧化，氧化，37oCH2O2 苯酚苯酚 4-氨基安替吡啉氨基安替吡啉H2O 红色醌亚胺红色醌亚胺 + O237oC 辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶PODTrinder反响反响溶液在505nm下有吸收峰,可用比色法测定,得出葡萄糖的浓度。.规范浓度法A标=KC标LA样=KC样L C样=A样A标C标.【试剂】 酶酚混合试剂PH7.0 5mmol/L葡萄糖规范运用液 班氏试剂【器材】试管、试管架、吸量管、移液枪、恒温水浴、722型分光光度计。实验前预备实验前预备【标本】1.血浆 应在血液采集1小时内尽早分别。 .详细操作详细操作1称重；称重；2取血：取血： 找到耳缘静脉，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林找到

4、耳缘静脉，二甲苯擦拭，涂薄层凡士林有何作用。有何作用。用三棱针刺破耳缘静脉放血用三棱针刺破耳缘静脉放血(自然血流自然血流)，将血，将血液搜集于草酸钠抗凝管内边接边摇液搜集于草酸钠抗凝管内边接边摇,以防凝以防凝固，取约固，取约5ml 。离心，离心，2000rpm，10min，取上清，编号；，取上清，编号；3注射激素后再取血注射激素后再取血:皮下注射肾上腺素皮下注射肾上腺素(0.4mg/kg体重体重)， 记录在记录在注射时间。注射时间。 30min后取血后取血5ml于抗凝管内于抗凝管内, 离心，离心，2000rpm，10min，取上清，编号。，取上清，编号。.4取4支试管，按下表参与试剂:规范规范

5、(ml)正常正常 (ml)注射后注射后(ml)空白空白(ml)血清样品血清样品葡萄糖规范液葡萄糖规范液蒸馏水蒸馏水酶酚混合试剂酶酚混合试剂0.023.000.023.000.023.000.023.00 将各管充分混匀，将各管充分混匀，37 水浴中保温水浴中保温15min；取出冷却；取出冷却至室温后，至室温后，505nm处比色；以空白管调零，读取规范管及测处比色；以空白管调零，读取规范管及测定管光密度值。定管光密度值。.计算： 测定管葡萄糖含量测定管葡萄糖含量mmol/Lmmol/L测定管光密度测定管光密度 规范管光密度规范管光密度51.注射前后的血糖浓度2. 注射后血糖浓度增高率A A肾肾-

6、A-A正正 A正 100%增高率增高率 =.结果记录结果记录规范规范(ml)正常正常 (ml)注射激素后注射激素后(ml)空白空白(ml)A血糖浓度血糖浓度增高率增高率.尿糖是指尿中的糖类，主要是指尿中的葡萄糖。正常情况下，肾小管能将肾小球滤过的葡萄糖全部重吸收回血液，当血糖肾糖阈8.96-10.08mmol/L,超越肾小管的重吸收才干,部分葡萄糖随尿排出。尿糖的测定虽然不能单纯作为糖尿病的诊断规范，但是从某种层面上也能反映一些问题。血血浆浆尿糖尿糖尿糖尿糖动脉血血细胞、大分子蛋白质等部分水、无机盐、葡萄糖、维生素、尿素等重吸收近端小管二、二、二、.1.班氏定性实验：2.葡萄糖氧化酶试纸法干化

7、学法：反响原理同血糖葡萄糖氧化酶法。尿糖测定尿糖测定.班氏定性实验原理：班氏定性实验原理：利用葡萄糖或其它复原性物质在碱性高温环境中，将反响液中利用葡萄糖或其它复原性物质在碱性高温环境中，将反响液中Cu2+Cu2+复原为亚铜离子复原为亚铜离子Cu+Cu+，构成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化，构成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化亚铜。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。亚铜。根据显色的程度，可对尿葡萄糖作定性及半定量检测。(CHOH)n(CHOH)nCHOCHOCH2OHCH2OH+ + 2Cu2+2Cu2+ + + 4OH-4OH-COOHCOOH(CHOH)n(CHOH)nCH2OHC

8、H2OH+ +2CuOH+ +H2OH2O2CuOHH2OH2O+ +Cu2OCu2O醛糖醛糖醛糖酸醛糖酸黄色或红色黄色或红色. 操作步骤20滴班氏剂A尿液2滴 B尿液2滴煮沸5min煮沸5min.葡萄糖含量葡萄糖含量(g/L)试管变化试管变化结果符号结果符号无糖试剂仍明晰呈蓝色，如有多量尿酸存在也能够少许蓝灰色沉淀微量0.5以下仅冷却后有少量绿色沉淀+少量0.51煮沸约1min后，出现少量黄绿色沉淀+中等量12煮沸约15s，即呈土黄色沉淀+多量2以上开场煮时，即呈多量红棕色沉淀 +.【本卷须知】操作到位，取量要准确，吸量管不能混用。血清分别后要及时的测定以免影响实验结果。试剂中含叠氮钠0.9

9、5 g/L为防腐剂。不可入口！防止接触皮肤及粘膜。 应采取必要的预防措施运用试剂。.结果分析三.测定的血糖浓度异常：反响不彻底引起的偏低葡萄糖规范溶液浓度有问题偏高或偏低移液器引起的偏高或偏低一.结果可报告范围：本法对葡萄糖的检测范围为0.0622.2 mmol/L。当样品测定值超越上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 4稀释，重新测定，结果乘以5。二.当样品中抗坏血酸浓度 852 mol/L，胆红素浓度 684 mol/L，血红蛋白浓度 2.00 g/L，甘油三酯浓度 22.6 mmol/L时没有察看到干扰。.本法测定葡萄糖非常特异，从原理反响式中可知第一步是特异反响，第二步特异性较差。误差往往发生在反响的第二步。一些复原性物质如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而耗费反响过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。1葡萄糖葡萄糖O2H2O葡萄糖酸葡萄糖酸H2O22H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚H2O 红色醌式物质红色醌式物质过氧化物酶过氧化物酶PODTrinder反反响响【讨论】.【思