第2节-基因工程及其应用上课(1)

1、1.1.概念：又叫做概念：又叫做基因拼接技术基因拼接技术 或或 DNA重组技术重组技术 通俗的说，就是按照人们的意愿，把通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物一种生物的某种基因的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物另一种生物的细胞的细胞里，里，定向定向地改造生物的地改造生物的遗传性状遗传性状。一一 基因工程基因工程2.2.原原 理：理：3.3.操作水平：操作水平：5.5.结结 果：果：基因重组基因重组DNADNA分子水平分子水平定向定向地改造生物的地改造生物的遗传性状遗传性状，获得人类所需要的品种获得人类所需要的品种4.4.操作环境：操作环境：生

2、物体外生物体外（一（一 ） 基因工程的概念基因工程的概念3）实例）实例:EcoR 该限制酶只能识别该限制酶只能识别GAATTC的序列，并在的序列，并在G和和A之间将这段序列切开。之间将这段序列切开。黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端PPPPC CT TA AG GP4 41 13 35 52 2oP4 41 13 35 52 20PPA AC CG GT T磷酸脱氧核糖反向平行反向平行含氮碱基DNA的平面结构的平面结构3，5磷酸二酯键磷酸二酯键被同一种限制酶切断的几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA是否具有相同是否具有相同的黏性末端？的黏性末端？黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端具有具有具有相

3、同的黏性末端的具有相同的黏性末端的DNADNA分子会相互黏合起来。分子会相互黏合起来。C T T A AG A A T T C G具有相同的黏性末端的具有相同的黏性末端的DNADNA分子会相互黏合起来。分子会相互黏合起来。C T T A AG A A T T C GCTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAAAATTCCGTAG 练习使用练习使用EcoRI 剪切剪切目的基因目的基因CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAAAATTCCGTAG 目的基因目的基因黏性末端黏性末端黏合只能使互补

4、的碱基连接起来黏合只能使互补的碱基连接起来问问: : 黏性末端黏合的是什么部位？黏性末端黏合的是什么部位？问：问：基因的针线基因的针线-DNA-DNA连接酶连接酶连接的是什么部位连接的是什么部位? ? 脱氧核糖与磷酸交替链接而构成脱氧核糖与磷酸交替链接而构成DNADNA骨架上的缺口骨架上的缺口（3,53,5磷酸二酯键）磷酸二酯键）使用使用DNADNA连接酶制作重组连接酶制作重组DNADNA分子分子甲片段甲片段CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段乙片段GGCATCTTAAAATTCCGTAG 重组重组DNADNA分子分子GGCATCTTAAAATTCCGTAG 实质：拟核或细胞核以外的能够自主复制的小型环状DNA分子二二 基因工程的基因工程的“四步曲四步曲”1.提取提取目的基因目的基因12.目