猫松果腺提取物(MSTQW)对免疫缺陷

1、猫松果腺提取物（MSTQW）对免疫缺陷小鼠免疫功能的影响张世华 陈春林（重庆市养猪科学研究院 重庆·荣昌 402460）摘 要：连续注射猫松果腺提取物（MSTQW），观察其对免疫缺陷小鼠免疫功能的影响。结果表明，MSTQW对免疫器官肝、脾、胸腺的增重作用明显（P<0.01），能增强小鼠抗疲劳能力（P<0.01）；淋巴细胞比例升高（P<0.01），噬酸性白细胞、噬中性白细胞比例降低（P<0.01），巨噬细胞吞噬功能显著增强（P<0.01），淋巴细胞形成率、半数溶血素值上升（P<0.01）。提示出MSTQW对免疫缺陷小鼠的整体免疫功能具有显著的恢复作用

2、。关键词：松果腺 免疫缺陷小鼠 免疫功能 影响松果腺（Pineal gland，PND）是一个多功能器官，又称为神经内分泌传感器。褪黑素（Melatonin，MT、MLT）是松果腺分泌的一种重要激素，参与神经内分泌免疫系统的调控，除了参与性腺、昼夜节律、肾上腺、诱导睡眠等功能调节外，还具有免疫调节，抗氧化、抗衰老及抗肿瘤等功能；能从不同层次对免疫应答发挥上调作用1、2、3。对PND、MT免疫调节作用的深入探讨，有助于对免疫过程的认识和临床应用价值的了解，为此，我们采用猫的松果腺提取物，研究其对免疫缺陷型小鼠免疫功能的影响。现将实验结果报道如下：1 材料与方法1.1 试验动物 昆明系小白鼠，兼用

3、，体重18.022.0g，由四川泸州医学院动物实验中心提供；健康家猫，4070日龄，市购。1.2 药品与试剂 氢化可的松注射液（HC），西南药业股份有限公司；灭菌Alsever's溶液，无钙镁Hank's溶液，淋巴细胞分层液，1%新鲜鸡红细胞悬液，1%兔红细胞悬液，10%豚鼠新鲜血清，0.5%淀粉生理盐水；犊牛血清，成都生物药械厂。1.3 试验方法1.3.1 猫松果腺提取物（MSTQW）的制备 取健康家猫，避光4h后宰杀，无菌取下松果腺，冷冻3h，加灭菌生理盐水、甲醇（2:1）液充分溶解，氯仿脱脂，静置，吸上层液，离心10min，得粗品，40ºC避光蒸馏，配成含量为0

4、.01g/ml的溶液，置4ºC冰箱，备用。1.3.2 动物分组与给药方法 试验设正常对照模型组和免疫缺陷模型组。1.3.2.1 正常对照模型组的建立6、7 I组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射生理盐水，次1d，连续10d；II组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射生理盐水6d后，腹腔注射0.5%淀粉生理盐水4d，次1d；III组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射生理盐水6d后，腹腔注射1%兔红细胞（HRBC）4d，次1d。1.3.2.2 免疫缺陷模型组的建立6、7 IV组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射HC，3d后，生理盐水7d，次1d；V组：按0.4ml/只剂量，

5、小白鼠皮下注射HC 3d、生理盐水3d，腹腔注射0.5%淀粉生理盐水4d，次1d；VI组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射HC 3d、生理盐水3d，腹腔注射1%兔红细胞（HRBC）4d，次1d；VII组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射HC 3d后，MSTQW 7d，次1d；VIII组：按0.4ml/只剂量，小白鼠皮下注射HC 3d、MSTQW 7d后，腹腔注射0.5%淀粉生理盐水4d，次1d；XI组：小白鼠皮下注射HC 3d、MSTQW 7d后，腹腔注射1%兔红细胞（HRBC）4d，次1d。1.3.3 观察指标及方法1.3.3.1 肝、脾、胸腺指数测定 各组取小鼠10只，称重（P），

6、眼球无菌采血，肝素抗凝，备用；扑杀各小鼠，分别取肝、脾、胸腺，称重（Q），脏器指数=Q/P。1.3.3.2 抗疲劳能力的测定 随机各取小鼠5只，分别放于玻璃缸中（盛水约2/3），分别计时，以其挣扎时间长短来衡量其抗疲劳能力。1.3.3.3 白细胞分类记数：参照文献7外周血白细胞分离、淋巴细胞计数方法。1.3.3.4 巨噬细胞吞噬率及吞噬指数测定 、V、组小鼠在采血前0.5h腹腔注射1%鸡红细胞悬液0.4ml。颈椎脱臼处死小鼠，无菌取腹液涂片，瑞氏染色，镜检。每片计数200个巨噬细胞（macraphage，M）。吞噬率=（吞噬鸡红细胞的M/M总数）×100%吞噬指数=（被吞噬的鸡红细胞

7、数/M总数）×100%。1.3.3.5 E-玫瑰花环形成率测定 、组小鼠，连续观察7日后，眼眶采血，肝素抗凝，用淋巴细胞分层液分离淋巴细胞，Hank's液洗涤23次，测定EA%。1.3.3.6 外周血溶血素测定 、组小白鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液0.2ml进行免疫，免疫后第7d，小白鼠眼眶采血，分离血清，测定溶血素含量。1.3.4 数据处理 以上各组数据均采用t检验。2、结果2.1 对肝、脾、胸腺的影响：HC对小鼠肝、脾、胸腺均具有极显著的损伤作用（P<0.01），致使脏器肿大明显；MSTQW使肝、脾的脏体比显著增大（P<0.01），但与正常对照组相比，差异不显著

8、性（P0.05）。（结果见表1）表1 肝、脾、胸腺的脏体比值（n=10，X±S ）组别 药物 剂量（ml） 脏/体（10-2） 肝 脾 胸腺 生理盐水 0.4 4.36±0.70 0.39±0.09 0.62±0.06 HC+生理盐水 0.4 5.21±0.231 0.56±0.081 0.75±0.071 HC+MSTQW 0.4 5.85±0.272 0.65±0.082 0.60±0.023注：与正常组对照比较1P<0.01，与模型对照比较及正常对照比较2P<0.01， 与模型

9、对照比较3P<0.01，2.2 对小鼠抗疲劳能力的影响 HC使小鼠抗疲劳能力大大降低（P<0.01），但在给予MSTQW后，其抗疲劳能力得到明显的恢复（P<0.01）。（结果见表2）表2 MSTQW对小白鼠抗疲劳的作用。（n=5 X±S）组别 药物 剂量（ml/只） 抗疲劳时间值(hr) 生理盐水 0.4 8.11±0.48 HC+生理盐水 0.4 5.44±0.681 HC+MSTQW 0.4 12.58±0.842注：与正常对照比较1P<0.01，与模型及正常对照比较2p<0.012.3 对外周血白细胞的影响 HC使淋巴

10、细胞下降明显(P<0.05)。MSTQW使淋巴细胞比例增高（P<0.01）；嗜中性白细胞降低低于模型对照组（P<0.01）；嗜酸性白细胞下降（P<0.01）；嗜碱性白细胞呈下降趋势。表3：MSTQW对外周血白细胞的作用（n=10 X±S）组别 药物 剂量(ml/只) 淋巴细胞（%） 嗜中性白细胞（%） 嗜酸性白细胞（%） 嗜碱性白细胞（%） 生理盐水 0.4 65.8±4.1 28.3±4.8 3.8±0.4 0.51±0.07 HC+生理盐水0.4 60.7±6.84 34.4±2.81 5.4&#

11、177;0.81 0.42±0.03 HC+MSTQW 0.4 72.2±5.42 26.4±5.53 3.2±0.52 0.41±0.091注：与正常对照比较1P<0.01，与模型及正常对照比较2P<0.01，与模型对照比较3P<0.01，与正常对照比较4P<0.052.4 对腹腔巨噬细胞功能的影响 HC使巨噬细胞吞噬率及吞噬指数降低（P<0.01）；MSTQW则显著升高(P<0.01)，且明显高于正常对照组的吞噬功能(P<0.01)。表4 MSTQW对巨噬细胞的吞噬功能的影响（ X±S）组

12、别 鼠数（N） 药物 剂量(ml/只) 吞噬率（%） 吞噬指数 10 生理盐水+淀粉 0.4 75.35±0.90 2.03±0.12 8 HC+生理盐水+淀粉 0.4 68.47±1.001 1.90±0.081 9 HC+MSTQW+淀粉 0.4 87.48±1.882 2.45±0.142注：与正常对照比较1P<0.01，与模型及正常对照比较2P<0.12.5 对T淋巴细胞形成率的影响 HC可致T淋巴细胞形成率降低（P<0.01）；MSTQW能明显拮抗HC的免疫损害作用（P<0.01），结果见表5。表5

13、MSTQW对Erosettes形成的关系（X±S）组 别 鼠数（N） 药物 剂量(ml/只) 形成率（%） 9 生理盐水 0.4 34.18±4.72 8 HC+生理盐水 0.4 20.28±7.821 9 HC+MSTQW 0.4 33.46±3.782注：相对于正常对照1P<0.01，相对于模型对照2P<0.012.6 对体液免疫功能的影响 HC组小鼠的半数溶血素数值水平显著下降，P0.01；MSTQW组小鼠的半数溶血素数值水平显著升高，P0.01。（结果见表6）表6： MSTQW对溶血素值的影响（ X±S）组别 鼠数（N） 药

14、物 剂量(ml/只) 半数溶血素数值(HC50) 10 生理盐水+HRBC 0.4 59.82±7.31 8 HC+生理盐水+HRBC 0.4 43.44±8.651 10 HC+MSTQW+HRBC 0.4 62.50±5.012注：相对于正常对照1P0.01，相对于模型对照2P0.013 讨论3.1 在动物模型建成以后，免疫缺陷组小鼠肝、脾和胸腺明显萎缩，脏体比减小（P0.01，这种由糖皮质激素引起的肝、脾、胸腺萎缩现象与文献6、18的报道一致；但是7d后，免疫缺陷组小鼠脏体比增大（P0.01，可能是由于组织变性（如脂肪变性等），或因萎缩而致的一种代偿性增生反

15、应引起的。朱建军等（1998）1报道，MT可增加免疫器官的重量，试验组的肝脏/体重值增大（P0.01，与许建明等11报道，0.110mg/·d的MT可使血浆转氨酶及肝匀浆丙二醛含量明显下降的结果一致，通过抗脂质过氧化环节而保护肝脏，促肝细胞更新增殖。徐峰等12报道，叙利亚仓鼠皮下注射MT（25ug），持续10周，实验鼠脾的相对或绝对重量均增加，这一结果在本实验中得到进一步证实。胸腺的脏/体值变化不大（P0.05），可能与MT主要作用于胸腺髓质，而对皮质影响不大13有关。3.2 李俊，徐叔云等17给小鼠连续注射MT1、3、5、7d，均能明显增加淋巴细胞的数量；Mmaestroni20报

16、道，MT能诱导T淋巴细胞的增殖，并增强其活性；Carcieo MC等（1992）15每天给予MT（10mg/），持续4d，体外测得T淋巴细胞的活力能大大增强。MSTQW使淋巴细胞比例增高（P<0.01），Erosettes形成率显著高于模型对照组（P0.01），表明MSTQW具有促进T淋巴细胞的增殖，能恢复免疫缺陷小鼠T淋巴细胞的活力。3.3 M是MT的靶细胞之一，且MT能促进M的抗原递呈，进而增强M活性和吞噬功能19。据徐峰等（1996）14报道，MT能拮抗异常光照对小鼠吞噬细胞功能的影响，能显著提高其吞噬能力。HC使巨噬细胞吞噬率及吞噬指数降低（P<0.01）；MSTQW则显著

17、升高(P<0.01)，与文献14、19、21的结果是一致。3.4 T淋巴细胞是MT作用的靶细胞之一，受MT的诱导15，产生免疫因子IL1、IL4和IFN；MT能直接促使淋巴细胞释放出内源性阿片肽，增强体液免疫的机能20；李俊、徐叔云等17发现MT（1g×3d，ih）对小鼠腹腔M IL1有明显的促进作用；魏伟等（1992）19发现松果腺能间接诱导大鼠产生IL1；Maestroni等20研究表明，IL1还参与抗原或丝裂原对T淋巴细胞的激活、IL2的产生及IL2受体的表达，均能增强B淋巴细胞产生抗体。HC组小鼠的半数溶血素值水平显著下降（P0.01）；MSTQW组小鼠的半数溶血素值水

18、平显著升高（P0.01），表明，MSTQW可使免疫缺陷小鼠的体液免疫状况得到有效的改善。3.5 据魏伟，徐叔云报道3，低剂量（10ug，10d）MT可使T淋巴细胞功能低下者得以恢复，使过高的IL1降低；朱金华等15认为，松果腺分泌的MT可从不同层次对免疫应答发挥主调作用，且MT能拮抗很多免疫损伤效应，使其免疫功能得以恢复。本试验采用猫松果腺提取物替代MT，持续用0.4ml（0.4个剂量单位）MSTQW连续投药，对免疫功能缺陷型小鼠的整体免疫功能有极显著的增强作用。Extralt Of Pineal Gland Of Cat Effect Of Immune Defect Mouse Zhang

19、 Shihua Chen Chunlin(Chongqing Swine Science Academy Rongchang 402460)Abstrat: Injecting extralt of pineal gland of cat continuously in 0.4ml(0.4 dose unit) , to study the effect of immune on mouse。 The rsult showed,that weight of liver,spleen or thymus indexnuber increased significantly (P<0.01)

20、；the lymphocyte prortion most heighten significantly(P<0.01)，but acidlity leucocyte proportion decreased；the faction of phagoyte vitality of lymphocyte and half value of serum hemolysin increase significantly(P<0.01) 。 Key Word: Pineal Gland Immune Defect Mouse Immune Faction Effect注：原文发表于贵州畜牧

21、兽医2002年第3期（总99期）参考文献：1.朱建军。褪黑素的合成及其生理和药理活性，国外医学药学分册1998;25(5):2662702.沈玉先、矜德意、魏伟等。松果腺及褪黑素与衰老J.中国药理学通报.1999;15(5):3873403.魏伟.褪黑素的神经内分泌免疫作用及其应用前景.中国药理学通报.1997;13(3):1962004.徐叔云、卞如濂、陈修主编.药理实验方法学M.人民卫生出版社.1982:9389895.王世若、王兴龙、韩文瑜主编.现代动物免疫学M.吉林科学技术出版社.3954046.郭培京。“强盾”冲剂用于细胞免疫缺陷小鼠的试验.免疫学杂志.1996;(10):37397.朱立平、陈学清主编.免疫学常用实验方法.人民军医出版社.175186。8杜念兴,主编.兽医免疫学M.中国农业出版社.1998:1962219.张淼涛.中草药对小白鼠巨噬细胞吞噬力的影响J.黑龙江畜牧兽医.2000;(12):2610.中国生化药物杂志.1998;19(3):12112311.许建明.褪