宫颈鳞状细胞癌局部淋巴管生成与浸润转移及预后的关系

1、宫颈鳞状细胞癌局部淋巴管生成与浸润转移及预后的关系<                 作者：林岷, 江忠清, 连成瑛, 郑秀, 吴桂珠, 曾赛凡【摘要】  目的 探讨宫颈鳞状细胞癌（SCC）局部淋巴管生成与 临床 病理特征及预后的关系。 方法 采用免疫 组织 化学SP法检测28例正常宫颈上皮(NCE)、36例宫颈上皮内瘤变(CIN)和68例SCC中血管内皮生长因子受体(VEGFR)-3、微淋巴管密度(LMVD)、Ki-6

2、7增殖指数(PI)和CD34微血管密度(MVD)。 结果 LMVD在NCE、CIN及SCC组分别为(2.24±3.82),(6.37±5.69)和(8.29±2.80)。从NCE,CIN到SCC,LMVD显著升高(P<0.01)。SCC组LMVD与盆腔淋巴结转移、间质浸润及预后密切相关(P<0.05),与年龄、FIGO分期、组织学分级、脉管浸润、PI及MVD无显著相关(P>0.05)。SCC有盆腔淋巴结转移及突破深肌层间质浸润者,其LMVD分别显著高于无盆腔淋巴结转移及未突破深肌层间质浸润者(P<0.05)。高LMVD的SCC患者生存率显著

3、低于低LMVD者(P<0.001)。 结论 SCC局部LMVD升高可能预示肿瘤进展及不良预后。 【关键词】  宫颈肿瘤,病 理学 ; 微淋巴管密度; 血管内皮生长因子受体-3; 转移; 预后; 免疫组织化学    ABSTRACT:  Objective  To investigate the association of regional lymphangiogenesis and clinico-pathologic characteristics and prognosis in cervical squamous cel

4、l carcinoma.  Methods  The lymphatic microvessel density(LMVD) labeled by vascular endothelial growth factor receptor-3（VEGFR-3）, proliferation index(PI) of cancer cells labeled by ki-67 and microvessel density(MVD) labeled by CD34 in 28 cases of normal cervical epithelium(NCE), 36 cases o

5、f cervical intraepithelial neoplasm(CIN) and 68 cases of squamous cell carcinoma of cervix(SCC) were detected by immunohistochemistry SP method.  Results  The LMVD in NCE, CIN and SCC group were (2.24±3.82), (6.37±5.69) and (8.29±2.80), respectively. The LMVD increased remar

6、kably from NCE to CIN and SCC accordingly(P<0.01).  In SCC, the LMVD correlated with pelvic lymph node metastasis, stroma involvement and prognosis(P<0.05), but not correlated with patient's age, FIGO staging, histological grading, intravascular infiltration, PI and MVD(P>0.05).

7、60; In the cases with pelvic lymph node metastasis and deeper stroma involvement, the LMVD were significantly higher than that in those without the conditions mentioned above(P<0.05).  The patients with higher LMVD in SCC had significantly lower survival rate than that in those with the lowe

8、r LMVD(P=0.001).  Conclusion  The higher LMVD in SCC may predict cancer progression and bad prognosis.    KEY WORDS:  cervical neoplasm,pathology; lymphatic microvessel density; vascular endothelial growth factor receptor-3; metastasis; prognosis; immunohistochemistry&#

9、160;   血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3),又称Flt4(fms like tyrosine kinase 4),属于血管内皮生长因子(VEGF)酪氨酸激酶受体家族成员,是VEGF-和-D的特异受体,在胚胎发育期表达于能生成淋巴管的静脉内皮,随着胚胎的发育,VEGFR-3在血管内皮细胞的表达下降,主要表达于淋巴管内皮细胞1。VEGFR-3与配体结合,引起胞内区酪氨酸磷酸化,导致淋巴管内皮细胞增殖、分化等一系列生物学效应的发生1。近年来 研究 表明,VEGFR-3在肿瘤淋

10、巴管生成及淋巴结转移中发挥关键作用2-4。笔者采用免疫组织化学SP法检测宫颈鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma of cervix,SCC）局部VEGFR-3标记的微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD),探讨其与局部血管生成、癌细胞增殖、侵袭转移及预后的关系。1  材料与方法1.1  对象 选择1998年3月-2005年6月在福建医科大学附属第一 医院 手术的宫颈上皮内瘤变(CIN)36例和SCC患者68例作为研究对象，年龄中位数45岁(2472岁),<45岁30例,45岁38例。所有患者

11、术前均未接受化疗、放疗及免疫 治疗 ,均经病理确诊。选取正常宫颈上皮(normal cervical epithelium,NCE)28例作为对照。CIN和组织学分级及FIGO分期参照 文献 5。CIN，级分别为12,11和13例(其中原位癌4例)。FIGO分期期32例,期36例;SCC，级分别2,19和47例;脉管浸润34例(脉管浸润的判断标准参照文献6),盆腔淋巴结转移17例;镜下早期浸润癌5例,浸润癌63例(浅、深肌层浸润分别15,48例)。截止到2006年12月底,对本组68例患者进行随访,共随访53例,随访率77.94%,随访时间平均54.8月（593月）。随访中死亡14例,3年生存

12、率74.51(38/51),5年生存率67.44(29/43)。1.2  试剂 浓缩型兔抗人VEGFR-3多克隆抗体(ZA-0267, 工作 浓度1100,北京中杉金桥生物技术有限公司)。即用型鼠抗人Ki-67单克隆抗体(克隆号MIB1)、即用型鼠抗人CD34单克隆抗体(克隆号QBEnd/10)、超敏免疫组织化学染色试剂盒和DAB染色剂（福州迈新生物技术有限公司）。1.3  方法 所有新鲜标本均经4%甲醛溶液固定,48 h内取材,石蜡包埋,连续35 m切片。采用免疫组织化学SP法检测CIN和SCC组织中VEGFR-3，Ki-67和CD34的表达情况。步骤

13、按说明书操作。VEGFR-3，Ki-67和CD34均采用枸橼酸缓冲液高压热力修复抗原,DAB显色,苏木精对比染色。用已知阳性片作为阳性对照,用PBS代替第一抗体作为阴性对照。1.4  结果判断 VEGFR-3阳性染色主要位于肿瘤边缘及间质微淋巴管内皮细胞质,呈棕黄色染色,可见微淋巴管内皮细胞围成壁薄、形态不规则的管腔结构,内无红细胞。低倍镜下观察4个淋巴管密集区域,200倍视野下计数淋巴管数,取其平均数作为LMVD7。Ki-67标记的增殖指数(proliferation index,PI):Ki-67在细胞核表达,阳性染色者呈棕黄色。在光镜下随机观察10个高倍视野(

14、5;400),每个视野记数100个肿瘤细胞, 计算 总阳性标记细胞数。CD34标记的微血管密度(microvessel density,MVD):CD34表达于血管内皮细胞质,呈棕黄色染色。MVD记数判断标准参照文献6。1.5  统计 学处理 定量资料以x±s表示,采用SPSS 10.0统计 软件 包,方差 分析 ,变量间的关系采用相关分析,生存情况采用Kaplan-M Ei er曲线表示,Log rank检验。检验水准=0.05,以P<0.05为差别有统计学意义。2  结  果2.1  NCE、CIN及SCC组LMVD

15、0;在NCE、CIN和SCC组,VEGFR-3标记的LMVD分别为(2.24±3.82),(6.37±5.69)和(8.29±2.80)。NCECINSCC,LMVD显著升高(P<0.01,表1)。CIN,的LMVD显著高于CIN(P<0.01,表1)。NCE和CIN组VEGFR-3主要表达于基底膜附近微淋巴管内皮细胞质。SCC组VEGFR-3主要表达于肿瘤组织周边或间质淋巴管内皮细胞质,部分表达于肿瘤细胞质(图1A)。表1  NCE、CIN及SCC组LMVD（略）2.2  Ki-67和CD34在NCE，CIN及SCC组的表达

16、60;NCE，CIN及SCC组Ki-67标记的PI分别为(96.04±54.60),(300.03±157.13)及(378.72±199.56)。NCECINSCC,PI显著升高(P<0.001)。Ki-67在NCE主要表达于上皮基底层细胞核,在CIN主要表达于异形细胞核,在SCC主要表达于癌细胞核（图1B）。CD34标记的MVD在NCE，CIN及SCC组分别为(6.3±2.9),(18.0±4.7)及(58.2±19.6)条。NCECINSCC,MVD显著升高(P<0.001)。CD34在NCE和CIN主要表达于上皮基底膜附近微血管内皮细胞质,在SCC主要表达于癌巢间质微血管内皮细胞质（图1C）。2.3  CIN及SCC组LMVD与PI及MVD的关系 将CIN及SCC组LMVD以中位值为界分为高水平和低水平组。在CIN组,LMVD高水平者PI与低水平者比较无统计学意义(P>0.05),但LMVD高水平者MVD与低水平者比较有统计学意义