肺组织MPO检测操作步骤_第1页
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肺组织MPO检测操作步骤_第3页
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文档简介

1、MP（测试盒（南京建成生物工程研究所）一、MPO活性测定原理中性粒细胞中存在 MPO每个细胞所包含的酶的量是一定 的，约占细胞总干重的5%,该酶具有使过氧化氢还原的能 力，利用这一特点可以分析酶的活力，并测定中性粒细胞的 数目。其具体原理是:MPOH2O2T复合体；复合体+AH（供氢 体）H20+MPO+产物。通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄 色化合物，在460nm处通过比色测定A产物的生成量，从而推 算出MP（的活力和H02减少的量和白细胞的数目。二、试剂组成与配制试剂一：缓冲贮备液35mlx 1瓶，按需要量配成缓冲应用 液，4。C保存。缓冲应用液的配制：贮备液：双蒸水 =1: 9。试剂二：

2、粉剂2支，临用时每支加缓冲应用液 60ml溶解， 可37 C加热溶解，4C保存。试剂三：粉剂3支，溶剂6mlx3支，用的时侯1支粉剂倒 入1支溶剂中溶解，最好提前一天配制，充分溶解后4C以下保存。试剂四：24ml溶液X1瓶，用前放入37C以上的水中摇晃 使其溶解至透明后方可使用，室温保存。试剂五：粉剂2支，4C保存。试剂六：溶液0. 5mlxl支，4C保存。显色剂的配制：临用时试剂五粉剂 1支加到100ml缓冲应 用液中，充分摇匀，待粉剂完全溶解后再加入试剂六 0.1ml, 充分混匀，配好后的显色剂 4C避光保存。试剂七：溶液6mlxl支，4C保存。三、肺组织匀浆的制备1. 取右肺下叶，滤纸吸

3、干污血渗液后-80 C冻存，以备打成肺组织匀浆测定肺髓过氧化物酶 （MP0活性。2. 取液氮冻存的肺组织，在冷生理盐水中漂洗，滤纸拭干；称取适量肺组织，加试剂二溶液制成5% （肺重量：试剂二溶液体积=1:19 ）的肺组织匀浆。四、操作步骤1.样本前处理：取5%组织匀浆0. 9ml加入试剂三0.1ml , 充分混匀后，37C水浴15分钟，取出后待测。2.操作表:试剂空白（可以不做）对照管测定管蒸馏水（ml）0.23样本（ml）0.20.2试剂四（ml）0.20.20.2显色剂（ml）33充分混匀，37 C水浴30分钟试剂七（ml）0.050.050.05混匀，60C水浴10分钟，取出后（未测管放于25-37 C热水 中保温，防止反应液出现凝固）立即在460nm处，光径lcm ,蒸馏水调零，测定各管的 0血。五、计算公式酶活力单位定义：每克湿片在37C的反应体系中H202被分为解l

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