HPLC测定短瓣金莲花中两种黄酮苷的含量

1、HPLC测定短瓣金莲花中两种黄酮苷的含量摘要：目的研究短瓣金莲花及不同部位中两种黄酮苷的含量情况。方法采用RP-HPLC，测定其中所含的两种黄酮苷荭草苷和牡荆苷的含量。 结果短瓣金莲花中荭草苷和牡荆苷的平均含量分别为1.9%和0.46%。结论对短瓣金莲花中的黄酮应该加以研究和开发利用，短瓣金莲花可能 是中药金莲花的一种代用新药源。关键词：高效液相色谱法；短瓣金莲花；荭草苷；牡荆苷中分类号：R284文献标识码：A文章编号：1001-2494(2000)10-0658-02Determination of two flavone glycosides in Trollius ledebourli

2、by HPLCHUANG Wen-zhe,LIANG Xu(China Pharmaceutical University,Nanjing 210038,China)ABSTRACT：OBJECTIVETo investigate the contents of two flavo ne glycosides contained in Trollius ledebourli Reichb.METHODSReverse phase HPLC was used to determine the two flevone glycosides orient in and vitexin.RESULTS

3、The content of orientin was 1.90% and the content of vitexin was 0.46%.CONCLUSIONThe flavono ids contained in Trollius ledebourli Reichb.should be studied and further us ed.Trollius ledebourli Reichb. will be a new medicinal plant resource.KEYWORDS：HPLC;Trollius ledebourli Reichb.;orientin;vit exin近

4、年来，人们在寻找抗病毒感染药物的过程中，发现金莲花具有很好的抗菌、抗病毒作用， 其所含的黄酮类化合物荭草苷(orientin)和牡荆苷(vitexin)为主要活性成分1， 并相继开发了一系列以金莲花为主的复方抗感冒新药，如金莲清热冲剂、金莲片、金莲润喉 片等，展示了金莲花良好的应用价值和开发前景。目前，在同属10余种金莲花植物中做药用 的仅有金莲花(Trollius chinesis Bge.)和亚洲金莲花(T.asiaticus L.)两种 2，而且资源分布有限。为了综合开发利用药用植物资源，寻找金莲花的新药源，我 们首次对短瓣金莲花及其不同部位进行了质量评价。结果显示其花中荭草苷的含量达1

5、.90% 。提示短瓣金莲花可能是中药金莲花一种重要的代用新资源。1仪器、试剂与药品1100高效液相色谱仪(美国惠普)，1100系列可变波长检测器，1100系列四元泵(美国惠普)； HSV 4.0工作站(杭州英谱科技开发公司)荭草苷及牡荆苷对照品均由本校中药资源研究室提供，HPLC测定其含量为98.7%，乙醇、石 油醚为分析纯试剂，四氢呋喃、异丙醇、乙腈为色谱纯试剂。金莲花采自河北省承德市，由本校中药资源研究室周荣汉教授鉴定为短瓣金莲花(Trolliu s ledebourli Reichb.)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：ODS 5 m (4.6 mm150 mm)，柱温：45。流动相：

6、0.1%磷酸水溶液-四氢呋喃 -异丙醇-乙腈(46230249)。流速：0.5 ml.min-1。检测波长：340 nm。以 荭草苷计，理论塔板数不小于6000。2.2线性范围精密称取荭草苷和牡荆苷对照品分别为1.52 mg和1.44 mg，用体积分数为95%的乙醇定容于1 0 ml量瓶中制成标准储备液，其中荭草苷和牡荆苷的含量分别为152 g.ml-1和144 g.ml-1。吸取1 ml标准储备液定容至2 ml，再从该2 ml量瓶中吸取1 ml定容至2 ml，以此类推。得到荭草苷和牡荆苷分别为152，144 g.ml-1；76，72 g.ml -1；38，36 g.ml-1；19，18 g.

7、ml-1；9.5，90 g.ml-15 份标准液。分别进样20 l，按上述色谱条件测定。以峰面积积分值为横坐标，浓度为纵坐 标，绘制标准曲线。对照品的色谱见1。回归方程为：荭草苷：Y1=1145.73c1-843.90，r=0.9999；牡荆苷：Y1=1180.36c1-2416.48，r=0.99961荭草苷和牡荆苷的色谱A-荭草苷和牡荆苷对照品；B-金莲花供试品；1-荭草苷；2-牡荆苷2.3回收率的测定准确称取已知荭草苷含量的金莲花样品2.0 g，加入一定量的荭草苷对照品，按“样品的含 量测定”项下的方法提取，测定，计算回收率。结果平均回收率为99.68%，RSD为1.36% (n=5)。

8、2.4精密度试验取金莲花供试品溶液，重复进样7次，荭草苷和牡荆苷的峰面积积分值的RSD分别为1.02 %和1.87%。2.5样品的含量测定2.5.1荭草苷和牡荆苷的提取精称60干燥3 h的金莲花的茎 叶、花各2，0.5 g，置于滤纸筒中，于100 ml圆底烧瓶中加入70 ml石油醚提取至提取液无 色(3 h)，回收石油醚。滤纸筒及药渣、索氏提取器烘干(65)，另取一烧瓶加入体积分数 为95%的乙醇70 ml，索氏提取至提取液无色(5 h)，回收溶剂，残渣以体积分数为95%的乙醇 溶解并定容至50 ml，备用。2.5.2样品测定吸取金莲花的茎叶、花各供试液，在上述色 谱条件下进样测定，见1。根据

9、对照品的峰面积和标准曲线求出其含量，结果见表1。表1金莲花及茎叶中荭草苷和牡荆苷的平均含量.%样品荭草苷牡荆苷样品荭草苷牡荆苷990810(茎叶)0.5250.123000705(花)1.9340.462990810(花)1.9180.458000706(茎叶)0.5170.119000705(茎叶)0.5190.126000706(花)1.9250.4533讨论 3.1提取时间的确定通过HPLC检测体积分数为95%的乙醇提取 4，5，6 h的样品液，确定索氏提取5 h即可提取完全。3.2检测波长的选定将供试品液进行紫外扫描，荭草苷和牡 荆苷分别在343 nm及338 nm处有最大吸收，故选用340 nm波长来测定，结果灵敏准确。3.3由实验结果初步看出，短瓣金莲花中所含有的具有抑菌和 抗病毒活性的荭草苷及牡荆苷的量均较高，这可初步为短瓣金莲花的应用提供依据。黄文哲(中国药科大学，江苏 南京 2