保健食品中总黄酮的测定方法

1、作者简介肖香兰(1964-,女,主管检验技师,主要从事理化检验研究。【化学测定方法】保健食品中总黄酮的测定方法肖香兰,罗仁才,张楠(北京市疾病预防控制中心营养与食品卫生所,北京100013摘要目的:建立以石油醚作为洗脱剂测定保健食品中总黄酮的方法。方法:样品经甲醇提取,用聚酰胺粉吸附,经石油醚洗脱杂质后,在波长360n m处,用分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量。结果:采用石油醚作为洗脱剂,总黄酮浓度的含量在02010g/m l范围内与吸光度值呈良好的线性关系(r=019998,方法的检出限为215g。测定样品的相对标准偏差在4160%6149%之间,回收率在86167%101150%之间。

2、与用苯作为洗脱剂方法测定结果比较,两者无显著性差异。结论:该方法操作简便,重现性及稳定性好,线性范围宽,特别是减少了苯对检测人员和环境的污染,可用于保健食品中总黄酮的测定。关键词保健食品;总黄酮;t检验中图分类号R15515文献标识码A文章编号1004-8685(200706-1037-02D eter m i n a ti on of tot a l fl avono i ds i n hea lth foodX iao X iang2lan,L uo Ren2cai,Zhang N an(Beijing Center f or D isease Contr ol and Preventi

3、on,Beijing100013,ChinaAbstractO bjecti ve:To establish a method for deter m ining flavonoids in health food1M ethods:The t otal flavonoids in health f ood were deter m ined by s pectr ophot omet after the sa mp les were distilled by methanol and purified by petr oleu m ether1The detec2 ti on wavelen

4、gth was360n m1Results:Data bet w een the flavonoids content and abs orban had a better linear relati onshi p in the range of02010g/m l(r=0199981The deter m inati on li m its were215g1The relative standard deviati ons were bet w een 4160%6149%1The recoveries were in the range of86167%101150%1Purified

5、 by petr oleu m ether instead of benzene,the results had no obvi ous difference1Conclusi on:The method is si m p le,stable and accurate,and it has been app lied successfully t o deter m ine flavonoids in health food1Key wordsHealth f ood;Total flavonoids;t detecti on黄酮类化合物也称类黄酮,是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物,多以

6、甙类形式存在,也有一类以游离形式存在。黄酮类化合物泛指两个苯环通过中央三碳链相互连接而形成的一系列化合物,母体结构为二苯基色酮。许多黄酮类化合物都有重要的生物活性,如抗氧化、抗肿瘤、保护心血管、抗突变等功能。类黄酮以其独有的特性日益成为全世界研究的热点,在医学、食品、保健食品等领域得到广泛的应用。目前保健食品中总黄酮的测定通常方法有硝酸铝比色法和直接紫外测定法,在保健食品检验与评价技术规范中,采用的是直接紫外测定法,在测定中需以苯洗脱杂质,但是,苯的毒性很强且用量大,对环境极易造成污染,并对实验者造成伤害。因此本文用石油醚替代苯,实验结果满意。1材料与方法111仪器与设备7220型分光光度计,

7、恒温水浴箱,25m l具塞比色管,滤纸,漏斗,分析天平(万分之一。112试剂11211甲醇分析纯。11212石油醚沸程3060。11213总黄酮(以芦丁计标准溶液称取芦丁010100g,加甲醇溶解并定容至100m l,即得0110mg/m l。113测定方法11311标准曲线吸取芦丁标准溶液:0100、0105、0110、0120、0140、110、1150、2100m l于10m l比色管中,加甲醇至刻度,摇匀,于波长360nm比色,求回归方程,计算试样中总黄酮含量。11312样品处理。11313样品测定称取适量试样,加乙醇定容至2510m l,摇匀,80水浴提取23h,放冷,重新定容,吸取

8、上清液110m l 于蒸发皿中,加聚酰胺粉吸附,于水浴上挥去乙醇,转入层析柱,先用2010m l石油醚洗脱,然后用甲醇洗脱黄酮,定容至25m l。此液于波长360n m测定吸收值。2结果与讨论211波长选择黄酮类化合物是母体结构为二苯基色酮的一类化合物的(下转第1142页 和小批量样品的测定。其原理:样品的BP O经乙醚提取浓缩后,被KI还原成苯甲酸,在气相色谱上分离测定,与标准品比较定量。气相色谱仪附F I D检测器,色谱柱为玻璃柱2m3 312mm内装6080目Chr om s orb WAW DMCS涂以5%+ 11%DEGS+磷酸。方法的检出限为015mg/kg。方法的准确度和精密度为

9、:过氧化苯甲酰浓度在0102012g/kg范围内,回收率为8318%9410%,RSD为315%511%。线性范围在每毫升含有过氧化苯甲酰20200g。3建议鉴于从1999年2002年6月,3年半时间内各地及国家质检总局检测BP O使用状况,建议:(1禁止添加过氧化苯甲酰于面粉中,因为0106g/kg限量对面粉增白效果不理想。(2如不能禁止使用,则应对小面粉加工厂采取严管措施,实施卫生许可制度,对不具备有添加设备的小企业不允许向小麦中添加过氧化苯甲酰,对具有添加设备的企业,要求有专人负责,并增加对产品的检测频次,以确保添加量控制在国家标准限量之内。(3建议企业使用过氧化苯甲酰替代品,如使用生物

10、酶与乳化剂结合而增白等。(4加强市场监督管理力度。(5加大宣传力度,暴光有问题的面粉,使老百姓在政府的指导下,选购合格面粉,将不合格面粉从市场淘汰出局。参考文献1G B2760-19961食品添加剂使用卫生标准S12F AO/nyo食品卫生标准法典M1第1版1北京:中国轻工业出版社,1993118013郭万春,陆守政1市售面粉中过氧化苯甲酰添加和残留量的检测与分析J1中国公共卫生,1999,15(6:51914王燕1面粉中过氧化苯甲酰含量的检测报告J1中国公共卫生,2000,16(2:11215丁鸿简,李林,杨其富1高效液相色谱测定面粉中面粉中过氧化苯甲酰J1中国公共卫生,2001,17(11

11、:104716Official Methods of A ss ociati on of official Che m ists14th ED,AOAC,VA,1984;Sec14:03817王萌国1HP LC测定过氧化苯甲酰J1环境与健康杂志,1999,16(1:9818刘仁凤,易小军,祁世凯,等1面粉中过氧化苯甲酰含量检测与分析J1中国公共卫生,2001,17(增刊:1201(收稿日期:2007-02-05(上接第1037页总称,包括:黄酮、黄酮醇、脱氢黄酮、异黄酮和查耳酮等,这一类化合物有两个紫外吸收区,即240280n m和300 400n m,本方法测定的是在300400n m有吸收

12、的黄酮,某些在该波长无吸收的黄酮成分不包括在内,如异黄酮。212溶剂选择包括甙和甙原形式的黄酮化合物都有较强的极性,易溶于甲醇、乙醇等溶剂。使用乙醇作为提取液在80水浴提取2h可提取完全。213准确度实验采用不同种类的样品,进行了高低两浓度的加标实验,3种不同样品高低两浓度的平均回收率分别为:93160%、97147%和96176%,见表1。表1准确度实验结果(n=6样品加标量(mg测定结果(mg回收范围(%平均回收率(%硬胶囊3216721712190216121642160861679810089183 6518751795192517251855190951339816797136软胶囊

13、33111310231242198310731008916710016796172 6611261095198610261095193941510115098122茶叶32184219621973103217921858813310110095183 6518851945191518451775181961179913397169214精密度实验对不同种类的样品,分别测定6次,其RSD分别为5127%、6149%、4160%,见表2。215线性范围在本实验条件下,黄酮浓度在020g/m l的范围内,线性关系良好,r=019998。表2精密度实验结果(n=6样品测定结果(mg/g平均结果(mg/

14、gsRSD(%硬胶囊91429140813371898186811981680146885127软胶囊11118136141291513014125191261312617812276149茶叶181721121914201320181918201030192234160216与保健食品检验与评价技术规范所载方法的比较采用5种不同的样品,分别用保健食品检验与评价技术规范所载方法和本法进行测定,结果表明,两种测定方法测定结果无显著性差异,见表3。表3两种测定方法的t检验结果均无显著性差异样品规范方法测定结果(mg/g本方法测定结果(mg/gt 硬胶囊9126912391379155913491149142914081337189811981862111软胶囊1101895149217961591181261312614109151101412519941498101109茶叶181618121917211219141915181721122013191419182