动植物检验检疫学试验教学大纲

1、动植物检验检疫学实验教学大纲1 .实验课程号：20710BO SY2 .课程属性：必修3 .实验属性：非独立设课4 .学时学分：总学时 54、总学分3、实验学时185 .实验应开学期：与理论课同时或稍后开设6 .先修课程：食品微生物学；食品微生物学实验技术；食品卫生微生物学检验；食品分析技术；食品现代分析与检测。一、课程的性质与任务1 .通过进行各项检验检疫诊断操作，具体观察不同标本，分析实验结果，完成实验作 业各环节，使学生巩固动植物检验检疫学课程所学的理论知识。2 .指导学生熟练掌握检疫诊断检疫性动物疫病和植物有害生物的最基本操作技能。培 养分析问题和解决问题的能力。3 .培养学生树立严谨

2、、细致、一丝不苟的工作作风，养成良好的实验习惯。二、实验的目的和基本要求1 . 了解动物检疫性重要疫病的病源特性，临床症状与病理变化特征、掌握其诊断与检 疫操作技术。掌握重要植物检疫性害虫的基本特征，掌握主要植物检疫性病源微生物的鉴定特征及生物学特性，在植物果实上的症状特点和检验方法。2 .要求学生做到课前预习。明确实验目的、原理、内容及操作中注意事项，以保证实 验的进度和效果。正确进行实验操作，得出可靠的结果，写出详尽、规范、完整的实验报告。 三、实验考核方式及办法1 .实验指导老师根据实验情况给出实验成绩，包括：出勤、预习提问、完成情况、实 验效果、打扫卫生情况、实验报告等。2 .实验成绩

3、按20-30%比例记入课程成绩。3 .缺做实验两次或缺交实验报告三次者，实验成绩已不及格论处， 实验成绩不及格者，不得参加理论课考试。四、实验项目一览表动植物检验检疫学实验项目一览表序号实验项目名称实验类型实验要求适应专业学时1布氏杆菌的实验室诊断（凝集反应）验证性必作食品质量与安全32炭疽的实验室诊断（沉淀反应）验证性必作食品质量与安全33鸡新城疫的诊断及抗体水平检测综合性必作食品质量与安全44真菌一般形态观察和临时玻片的制备实验综合性必作食品质量与安全45检疫性植物害虫的形态观察验证性选作食品质量与安全46鸡马立克氏病病毒的分离与初步鉴定综合性选作食品质量与安全4五、实验项目的具体内容：实

4、验一布氏杆菌的实验室诊断实验1 .目的和要求熟悉布氏杆菌的特点及其实验室诊断方法。用活布氏杆菌进行实验时，应严格遵守个人防护规则。2 .实验内容和原理2.1 .布氏杆菌的形态和染色特性取新鲜的布氏杆菌病料制成涂片，用鉴别染色法进行着染，如标本中含有布氏杆菌时，菌体可被染成红色，而其他细菌则被染成绿色或蓝色，便于区别。2.2 .平板凝集反应和乳汁环状反应取待检血清与平板凝集抗原以及待检乳汁与乳汁环状反应抗原（蓝色或红色）进行抗原抗体反应，并作对照，观察凝集反应的凝集片大小以及乳汁环状反应颜色的变化来进行诊断。3 .需用的仪器和试剂等显微镜、培养箱、水浴锅、移液枪、载波片、指形管、吸管等布氏杆菌平

5、板凝集抗原、环状乳汁反应抗原、布氏杆菌血清、布氏杆菌乳汁、改良萋一 尼氏法染色液 4.实验步骤样品涂片一一干燥一一固定一一改良萋一尼氏法染色一一干燥一一镜检待检血清分别置玻片上一一加布氏杆菌平板凝集抗原一一室温下混合一一30 c作用3-5min一一记录反应结果。另设阳性对照和阴性对照。待检乳汁1ml分别置反应管中一一加环状乳汁反应抗原0.05ml一一充分混合一一置37c水浴1h一一立即判定结果。另设阳性对照和阴性对照。5 .教学方式准备好实验器材，先介绍实验方法并演示，然后每个学生单独操作、观察、记录报告结果。6 .考核要求观察实验步骤和方法的掌握程度，评阅实验报告，综合评分。7 .实验报告要

6、求实验报告包括题目、目的要求和原理、操作步骤、注意事项、实验结果和讨论。实验二炭疽杆菌的检出和鉴定实验1 .目的和要求掌握炭疽病组织涂片诊断的要点，学会诊断炭疽病的实验方法。用活炭疽杆菌进行实验时，应严格遵守个人防护规则。2 .实验内容和原理2.1 .炭疽杆菌的涂片标本观察炭疽杆菌在组织中表现为单个砖头状或2-5个短链的竹节状杆菌，用美蓝染色可以观察。2.2 ,串珠试验炭疽杆菌遇有微量青霉素存在时，可生长成L型，菌体成串珠状，而类炭疽杆菌由于对青霉素不敏感，则不具有此特性。因此可鉴定诊断。2.3 . Ascoli氏沉淀反应实验将炭疽杆菌可疑检样制备成抗原，与已知高效价炭疽沉淀血清反应，根据其沉

7、淀环的有无可进行鉴定。3 .需用的仪器和试剂等显微镜、培养箱、水浴锅、移液枪、载波片、指形管、吸管等高效价炭疽沉淀血清、炭疽杆菌病理组织、青霉素、美蓝染色液、革兰氏染色液等4 .实验步骤病理组织一一涂片一一美蓝染色液染色一一镜检一一绘图取2m137 c孵育3-18h的待检菌肉汤培养液一一加入0.1-0.2单位青霉素溶液一一混合均匀一一37c孵育90-120min 涂片一一革兰氏染色一一镜检一一绘图制备抗原一一加入到含有高效价炭疽沉淀血清沉淀管中一一37 c放置15-30min 观察结果。另设阳性对照和阴性对照。5 .教学方式准备好实验器材，先介绍实验方法并演示，然后每个学生单独操作、观察、记录

8、报告结果。6 .考核要求观察实验步骤和方法的掌握程度，评阅实验报告，综合评分。7 .实验报告要求实验报告包括题目、目的要求和原理、操作步骤、注意事项、实验结果和讨论。实验三鸡新城疫的诊断及抗体水平检测实验1 .目的和要求掌握病毒血球凝集和血球凝集抑制试验的原理和操作要点。2 .实验内容和原理鸡新城疫血球凝集和血球凝集抑制试验有些病毒能凝集某种动物的红血球， 其凝集性可为相应的特异性抗体所抑制。 根据病毒 的血球凝集和血球凝集抑制反应， 可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体，也可用已知血清来检定未知病毒。3 .需用的仪器和试剂等玻璃仪器、病毒、已知阳性血清、被检血清、鸡血球4 .实验步骤被检血

9、清梯度稀释 （10管）一一分别加入适量鸡血球一一充分混匀一一室温静置15min-每过5min观察结果，至60min时结束 记录血球凝集价已知阳性血清、已知阴性血清梯度稀释（各 10管）一一分别加入病毒被检血清和鸡血 - 室温静置 15min- 每过5min观察结果，至 60min时结束 记录血清抑制价 5.教学方式准备好实验器材并作介绍，讲解实验方法并演示，然后每个学生单独操作、 观察、记录报告结果。6 .考核要求将操作和结果记录下来，评价学生是否达到了预期效果。7 .实验报告要求实验报告包括题目、目的要求和原理、操作步骤、注意事项、实验结果和讨论。实验四 真菌一般形态观察和临时玻片的制备实验

10、1 .目的和要求通过观察，认识植物病源真菌的营养体及其变态，认识真菌的菌丝体、 有性繁殖、无性繁殖产生的各类抱子。2 .实验内容和原理病源真菌的营养体、有性繁殖、无性繁殖产生的各类抱子的制片及镜检。真菌种类很多，其菌丝有无隔及颜色的变化，菌丝异型化结构的有无，有性繁殖、无性繁殖产生的抱子形态是进行分类鉴定的依据。3 .需用的仪器和试剂等挑针、刀片、木板、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、乳酚油、二甲苯、显微镜 病源真菌培养无及病理组织。4 .实验步骤用挑针挑起培养皿内的瓜果腐霉病菌和立枯丝核病菌或镰刀菌的菌丝体，用蒸储水或 乳酚油作浮载剂，制临时玻片镜检，观察菌丝有无隔或颜色。取小麦矮腥黑穗

11、病小麦粒50g,用无菌水吐温 20或其他表面活性剂处理后，离心沉淀 收集沉淀液，制片镜检，观察冬抱子形态。取玉米霜霉病病组织作徒手切片，挑几块切片置滴加了乳酚油的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，使病组织透明，盖上盖玻片、镜检，观察卵抱子形态。5 .教学方式试验前分别接种好待检病源真菌和准备好病组织，首先让学生观察记录真菌形态和病组织特征，在按要求制备各种标本片进行镜检，记录结果，写出报告。6 .考核要求观察学生操作，评阅实验报告，恰当评分。7 .实验报告要求实验报告包括题目、目的要求、操作步骤、注意事项、实验结果和讨论。实验五检疫性植物害虫的形态观察实验1 .目的和要求了解不同类群检疫性害虫

12、的形态特征，危害方式，掌握重要检疫性害虫的特点并能够进行区别。2 .实验内容和原理观察不同类群害虫的标本检疫性害虫主要包括昆虫、蛾类和软体动物，其中昆虫中的实蝇甲虫蛾类等均为重要 的类群，他们的形态特征、分布、生物学特性及危害方式各有不同。3 .需用的仪器和试剂等昆虫、蛾类和软体动物的标本及幻灯片。4 .实验步骤鞘翅目检疫性害虫、 双翅目检疫性害虫、 同翅目检疫性害虫、 鳞翅目检疫性害虫、 检疫 性植物寄生线虫观察，描述及绘图。5 .教学方式讲解各类害虫的基本知识，指导学生观察标本及幻灯片，鉴别种类，完成作业。6 .考核要求根据学生的观察和掌握程度以及实验报告综合评分。7 .实验报告要求实验报

13、告包括题目、目的要求，代表性害虫的描述及绘图。实验六鸡马立克氏病的诊断1 .目的和要求熟悉鸡马立克氏病病毒的采集及琼脂扩散试验初步鉴定方法。以鸡马立克氏病为例，熟悉双向琼脂扩散反应的操作技术，对沉淀反应结果纪录，阳性的判断有一个较明确的印象。2 .实验内容和原理从鸡马立克氏病病鸡拔取羽毛根， 经适当处理后作为抗原， 与相应的已知的鸡马立克氏 病病毒抗体在制备的琼脂板上进行双向琼脂扩散反应，如有沉淀线出现，则证明抗原为鸡马立克氏病病毒，病鸡患有鸡马立克氏病。3 .需用的仪器和试剂等可疑马立克氏病病鸡、已知马立克氏病抗原及抗体培养箱、水浴锅、移液枪、平皿、琼脂粉、打孔器、注射器4 .实验步骤4.1

14、 .病料的处理拔取病鸡的幼嫩羽毛，剪下羽髓丰富的毛根，给用。4.2 .琼脂板的制备用含有80 g/L氯化钠的0.01 mol/L pH 7.2的PBS配制的10 g/L琼脂溶液，置水浴中加 温，使其充分融化后，经脱脂棉滤过，倒入平皿中，厚度为 3 mm4 mm,凝固后移入冰箱 中备用。4.3 .打孔用打孔器在琼脂平板上打 7个孔，其中央孔1个，孔径为4 mm,外周6个孔，孔径为3 mm,孔与孔之间为4 mm,用注射器或移液枪吸取抗体于中央孔中，用另一个注射器或移 液枪吸取抗原于1孔6孔中，加抗原、抗体时，以加满不溢出为度，将加完样的琼脂平板 加盖后，在室温静置片刻，待抗原稍微扩散而液面下陷后，

15、平放于带盖的湿盘中， 置于37 C的温箱中，于24 h观察;八上录沾果。琼脂扩散试验在分离物的待测孔和阳性抗体孔之间出现了明显的白色沉淀线，并且完全融合，说明分离物中含仃马立克氏病毒。5 .教学方式准备好实验器材，先介绍实验方法并演示，然后每个学生单独操作、观察、记录报告结果。6 .考核要求观察实验步骤和方法的掌握程度，评阅实验报告，综合评分。7 .实验报告要求实验报告包括题目、目的要求和原理、操作步骤、注意事项、实验结果和讨论。六、实验教材和主要参考资料1 .实验教材本课程为新开课程，内容涉及面广，课时少，未见有出版的合适教材，申请自编教材。2 .主要参考资料1.1. 许伟琦主编，畜禽检疫检验手册，上海科学技术出版社，2000年1.2. 北京植物保护站主编，植物医生手册，中国农业出版社，1998年1.3. 徐志刚主编，普通植物病理学试验指导，中国农业出版社，1997年七、教改说明及其他1 .本大纲偏重于动植物微生物源疫病的检疫检验，植物虫害稍有涉及，这主要是由