三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨

1、三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨<                     作者：马陶陶 张群林 李俊 孟晓明 黄成 陈玉璞【摘要】   目的探讨以芦丁作为对照品，采用三氯化铝（ ）比色法测定中药总黄酮含量的专属性，并建立比色法测定中药总黄酮含量的最优条件。方法通过对几类典型结构的黄酮类及多酚类化合物显色前后的吸收峰（ ）进行比较，分析以芦丁为对照品的 比色法测定中药总黄酮的

2、合理性。结果 显色后，部分黄酮类物质在 处有较强吸收。结论采用 比色法测定中药总黄酮的含量具有合理性，并建立了 比色法测定中药总黄酮含量的最优条件。 【关键词】   比色法 总黄酮 芦丁Abstract：Objective on MethodsTo m structure measure Results ， flavonoid-like compounds showed Conclusion the Key words： c；   ；      黄酮类化合物（）是以 结构为基本母核的色原烷或色原酮的衍生物，以其广泛的药理作用

3、倍受青睐，而中药材中总黄酮的含量测定成为近年来研究黄酮化合物所关注的焦点。中药总黄酮的含量测定一般采用比色法、高效液相色谱法等 。比色法是被 中国 药典所采用的最常见的总黄酮测定方法，其中又以 （ ） 比色法常用 。这种方法以 （ ） 为显色剂，在碱性条件下，利用其与黄酮物质生成红色铝螯合物为特征，以芦丁为对照，在 处测定吸光度，从而得到待测物质总黄酮的含量。郭亚建等 曾对这种方法的专属性进行了讨论，发现具有邻二酚羟基的非黄酮类物质在芦丁显色的最大波长处（ 左右）也有较强吸收，而黄酮类成分黄芩素、山柰酚在此波长处没有吸收，从而说明采用 （ ） 比色法，以芦丁作为对照，不能排除非黄酮类物质的干扰

4、，这种方法测定中药总黄酮含量的专属性不强。    因此，本实验采用另一种常用的比色法： 比色法，对几类典型结构的黄酮类化合物（芦丁、儿茶素、木犀草素、鼠李素、山柰奈酚、槲皮素、葛根素、金丝桃苷、橙皮苷）及多酚类化合物（， 二羟基苯甲酸，绿原酸，和厚朴酚，阿魏酸） 显色前后的吸收峰（ ）进行比较，分析以芦丁为对照品的 比色法测定中药总黄酮的合理性，并对芦丁显色的 值， 浓度、显色温度等条件进行优化研究。 1  仪器与试药    紫外分光光度计； 精密 计（上海雷磁仪器厂）。    试剂：芦丁，葛根

5、素， 二羟基苯甲酸，绿原酸，和厚朴酚，阿魏酸，儿茶素，木犀草素，异鼠李素，山柰奈酚，槲皮素，金丝桃苷，蒙花苷、橙皮苷均购自中国药品生物制品检定所。三氯化铝，醋酸钠，冰醋酸，甲醇均为分析纯，水为双蒸水。 2  方法 2.1  供试品的制备以芦丁为例，精密称取芦丁标准品（ 烘干至恒重） ，甲醇定容至 ，配成 的芦丁母液。2.2  显色试剂的配置精密称取 ，甲醇定容至，配成 的溶液。精密称取 · ，双蒸水溶解至 ，配成 的溶液。精密量取 冰醋酸， 双蒸水稀释至 配成 的醋酸溶液， 。2.3  芦丁紫外吸收峰的扫描精密量取 芦丁母液溶液，置于 容量瓶，

6、加入 的 溶液，甲醇定容，充分显色 ，在 范围扫描，记录吸光度值。2.4  供试品紫外吸收峰的扫描精密量取 供试品（芦丁，葛根素， 二羟基苯甲酸、绿原酸、阿魏酸、和厚朴酚、儿茶素、木犀草素、异鼠李素、山柰奈酚、槲皮素、金丝桃苷、蒙花苷、橙皮苷），按“” 项下方法，在 扫描样品的紫外吸收峰。2.5  标准曲线及可行性考察从芦丁母液中精密移取， 溶液，平行两份，第 份直接加入 的 显色 ；第 份加入 ， 为 的 缓冲溶液，水浴显色 ，分别做标准曲线，并以金丝桃苷为样品，考察方法的可行性。 3  结果 3.1  芦丁显色的紫外光谱图在黄酮类化合物的紫外光谱图上，主要有苯甲酰基部分引起的吸收带 （ ）和桂皮酰基部分引起的吸收带 （ ），加人铝盐可使黄酮类化合物与铝离子形成稳定的络合物，带 红移，吸光度明显增大。当加入 充分显色后，芦丁吸收峰从 红移至 ，且吸光度有所增加。见图。图  芦丁加入 前后的紫外光谱图（略）3.2  比色法专属性探讨在 对几种典型结构的黄酮类物质及多酚类物质 显色前后的紫