丹参酮IIA对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

1、丹参酮IIA对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响         10-02-04 11:06:00     作者：朱春霞，白育庭    编辑：studa20【摘要】  目的 研究丹参酮IIA对大鼠肺缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡以及相关蛋白表达的干预作用。方法 健康SD大鼠60只随机分成四组，除对照组外，均建立肺缺血再灌注模型，其中两组分别加丹参酮IIA和生理盐水干预，检测肺组织湿/干重比、细胞凋亡率、Bcl2及

2、Caspase3的表达等指标。结果 肺缺血再灌注组与对照组相比，肺组织湿/干重比明显增高，流式细胞仪检测出现大量的凋亡细胞，证明该模型制备是成功的;肺缺血再灌注组显示有统计学意义的凋亡，Bcl2降低和Caspase3增高与对照组比较有统计学意义;丹参酮组与未干预组和生理盐水组比较，Bcl2增高和Caspase3降低均有统计学意义。结论 丹参酮能够改善由肺缺血再灌注引起的细胞凋亡，其机制可能与丹参酮能干预肺组织Bcl2和Caspase3蛋白的表达有关。 【关键词】  肺;缺血再灌注;凋亡;Bcl2;Caspase3;丹参酮ABSTRACT：Objective To investigat

3、e the effects of Tanshinone on apoptosis and the related proteins during lung ischemia reperfusion injury(LIRI) of rats.Methods Sixty rats were randomly divided into four groups.Apoptotic cells in lung tissue was inspected by flow cytometry and Hematoxylin and Eosin staining,and the expression of Bc

4、l2 and caspase3 was detected by RTPCR and western blot.Results Compared with normal control group,apoptotic cells and the expression of Bcl2 and Caspase3 in LIRI model group were markedly increased(P<0.01).Compared with model group,tanshinone could significantly inhibite cell apoptosis and the ex

5、pression of apoptosisrelated proteins in lung tissues(P<0.05).Conclusion Tanshinone can protect lung from ischemia reperfusion injury by modulating the expression of apoptosisrelated proteins Bcl2 and Caspase3.KEY WORDS:Lung;Ischemia referfysion injury;Apoptosis;Bcl2;Caspase3;Tanshinone肺缺血再灌注损伤(l

6、ung ischemia reperfusion injury，LIRI)过程中细胞凋亡过度是导致肺损伤的重要原因之一，凋亡作为LIRI的早期事件，参与了LIRI的病理生理过程1,2。丹参酮IIA因其具有毒副作用小、“多靶效应”等特点而广泛应用于临床，尤其在防治缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)损伤方面，具有明显的保护作用3。本实验首先建立大鼠肺IR模型，然后观察丹参酮IIA对LIRI后肺组织Bcl2、Caspase3表达和细胞凋亡的影响，探讨丹参酮IIA对LIRI中细胞凋亡的保护作用及其可能机制。1 材料与方法1.1 实验动物分组成年雄性健康SD大鼠(湖北省实验动物

7、中心提供)60只，体质量300±25g。随机分为正常对照组(A组，n=6)，除不作缺血处理外，余同其它组;肺缺血再灌注组(B组，n=18);缺血再灌注加生理盐水组(C组，n=18)，腹腔注射生理盐水，缺血1h，再灌3h;肺缺血再灌注加丹参酮组(D组，n=18)，腹腔注射丹参酮，剂量为15mg/kg,缺血1h，再灌3h。B、C、D每组又分为三个亚组，再灌时间分别为1h、2h、3h，每个亚组6只大鼠。1.2 大鼠肺缺血再灌注模型的建立实验模型的制备采用Eppinger方法，参考Sekido等模型4。取健康SD大鼠，20%水合氯醛(300350)mg/kg腹腔注射麻醉后，仰卧位固定。行颈部

8、正中切口，分离出气管、右侧颈静脉和颈动脉，气管切开、插管，接动物呼吸机行机械通气(吸入室内空气，呼吸频率40次，潮气量10ml/kg，吸呼比为12)，右侧颈静脉插管、固定，接微量注射泵;然后经左侧第5肋间开胸，游离左肺门，静脉注射肝素100U。静息5min后，于呼气末用无创血管夹阻断左主支气管、左肺动脉和左肺静脉。1h后开放，进行再灌注1h、2h、3h。1.3 标本制备及检测指标在缺血和再灌注的不同时间点取左肺组织，立即冻存于液氮中备用。自液氮中取出组织样品，检测肺组织湿/干重比、细胞凋亡率、Bcl2及Caspase3的表达等指标。肺组织细胞凋亡率用流式细胞仪检测;Bcl2的表达采用Weste

9、rn Blot方法检测(武汉晶美Western Blot试剂盒);Caspase3的表达采用PCR方法检测。1.4 统计学分析实验数据以均数±标准差记录，采用SPSS13.0统计软件包行单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。2 结 果2.1 各组肺组织W/D与A组比较，B组W/D在1h亚组即有升高，2h达到高峰，第3h组下降;与B组比较，C组没有统计学意义的差异;与B、C组比较，D组W/D的表达下降，差异具有统计学意义(P<0.01);与A组比较，D组没有统计学意义的差异。(表1)表1 各组大鼠肺组织W/D比较与A组比较,*P<0.01;与D组比较,P<0.012.2 肺组织细胞凋亡率流式细胞仪检测结果B、C组2h肺组织细胞凋亡率分别为30.5%±2.3%、35.0%±7.7%，3h肺组织细胞凋亡率分别为22.1%±1.2%、20.3%±1.3%，其余