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文档简介
1、动物组织中动物组织中核酸的提取及其组成核酸的提取及其组成成分的鉴定成分的鉴定生物化学与分子生物学实验生物化学与分子生物学实验 CQMU 2008实验思路实验思路动物肝组织动物肝组织提取提取 (匀浆)(匀浆)核酸核酸分离分离 (离心)(离心)水解核酸水解核酸核酸沉淀物核酸沉淀物糖、磷酸、碱基糖、磷酸、碱基分别鉴定分别鉴定了解本实验设计思路了解本实验设计思路学习离心技术,掌握离心机的正确使用学习离心技术,掌握离心机的正确使用氨基萘酚磺酸氨基萘酚磺酸浓酸浓酸核糖核糖糖醛糖醛 + 3,5二羟甲苯(地衣酚)二羟甲苯(地衣酚)绿色复合物绿色复合物3H2O磷酸磷酸 + 钼酸铵钼酸铵磷钼酸磷钼酸还原还原钼兰钼
2、兰(兰色)(兰色)脱氧核糖脱氧核糖浓酸浓酸-羟基羟基-酮基戊醛酮基戊醛 + 二苯胺二苯胺3H2O兰色化合物兰色化合物【操作操作】1.1.制备匀浆制备匀浆 猪肝猪肝 + + 沙沙 + + 研磨匀浆研磨匀浆 + + 生理盐水生理盐水 2.2.分离抽提分离抽提肝匀浆倒入肝匀浆倒入刻度离心管刻度离心管立即加入立即加入2%2%三氯醋酸三氯醋酸4ml4ml搅匀搅匀静置、离心(静置、离心(30003000转转/ /分,分,3 3分钟)、倾去上清液分钟)、倾去上清液沉淀物中再加入沉淀物中再加入10%NaCl10%NaCl溶液溶液4ml4ml搅匀搅匀再置于沸水浴中再置于沸水浴中加热加热5 5分钟分钟,用玻棒不断
3、搅拌,用玻棒不断搅拌取出冷却后再离心取出冷却后再离心(30003000转转/ /分,分,3 3分钟)分钟)将上清液将上清液倒入小烧杯内倒入小烧杯内取取4ml 95%4ml 95%乙醇,逐滴加入小烧杯乙醇,逐滴加入小烧杯白色沉淀物,白色沉淀物,静置静置5 5分钟分钟,转入离心管,转入离心管再离心(再离心(30003000转转/ /分,分,3 3分钟)分钟)倾去上清液,即得到核酸纳的白色沉淀倾去上清液,即得到核酸纳的白色沉淀3.3.核酸水解核酸水解含有核酸离心管含有核酸离心管加入加入5%H2SO4溶液溶液4ml用玻棒搅匀,在沸水中加热用玻棒搅匀,在沸水中加热5 5分钟分钟核酸水解液核酸水解液4.RNA和和DNA成分鉴定成分鉴定1 1)磷酸鉴定:)磷酸鉴定:取试管取试管2 2支,分别标明测定管支,分别标明测定管与对照管,按讲义操作(观察颜色有何不同)与对照管,按讲义操作(观察颜色有何不同)2 2)核糖鉴定:)核糖鉴定:取试管取试管2 2支,分别标明测定支,分别标明测定管与对照管,按讲义操作(比较两管颜色)管与对照管,按讲义操作(比较两管颜色)离心机使用注意事项:离心机使用注意事项:1.1.记住离心管编号;记住离心管编号;2.2.离心管必须先平衡后才对称放入离心离心管必须先平衡后才对称放入离心机;机;3.3.避免液体洒在离心机上面或钻头中;避免液体洒在离心机上面或钻头中;4.4.启动
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