蕨菜总黄酮抗宫颈癌作用及机理研究

1、蕨菜总黄酮抗宫颈癌作用及机理研究    英文题名 Study of Effect of Flavonoids from Pteridium Aquilinum on Cervical Cancer and Its Mechanism  关键词 蕨菜总黄酮; 宫颈癌; 免疫调节; 抗氧化; 细胞凋亡; 英文关键词 Flavonoids from pteridium aquilinum; Cervicalcancer; Immunomodulating; Antioxidant; Cell apoptosis; 中文摘要 宫颈癌是一种严重危害妇女健

2、康和生命的生殖系统恶性肿瘤,病因目前尚未完全明了,可能是多种因素综合作用的作用。由于宫颈癌的发病原因和发病机理多种多样,防治很难一蹴而就,在治疗(如化疗)过程中容易产生毒副作用和多药耐药性,因而抗宫颈癌药物尤其是植物性抗宫颈癌药物的筛选成为肿瘤药理学和毒理学研究者的重要任务。从多角度系统地研究蕨菜黄酮抗宫颈癌效果,目前尚未见报道。本研究利用小鼠U14宫颈癌细胞和人宫颈癌Hela细胞建立体内和体外实验模型,对蕨菜黄酮抗宫颈癌效果进行了深入研究。 蕨菜是药食两用植物,经常食用蕨菜具有保健作用。作为药用,蕨菜具有清热滑肠、降气化痰、利水安神、降压等功效。但有关蕨菜黄酮类物质是否具有抗肿瘤作用并未见相

3、关报道,因此本文主要通过实验来研究蕨菜总黄酮对小鼠体内U14肿瘤细胞和体外人Hela细胞的抑制率及对机体免疫功能的影响。 本实验通过醇提法提取蕨菜总黄酮,后经过溶剂萃取获得蕨菜精黄酮,研究其对小鼠移植性宫颈癌的影响。结果表明,蕨菜黄酮能明显抑制实体瘤小鼠肿瘤生长,低、中、高抑制率可达38.79%、44.54%、54.02%,延长腹水瘤小鼠的存活时间,生命延长率可达49.39%、6. 英文摘要 Cervical cancer is a malignant tumor in genital system that threatened the health and the life of wome

4、n. The etiological factor of cervical cancer is not clear yet, and it might be related with many influencing factors. Because of the multiformity of the reason and the mechanism behind the cervical cancer, it is very difficult to prevention and to treatment. Furthermore, because of the side-effects

5、and the multi-drug resistance in treatment (e.g. chemotherapy), screening of anti-cervical cancer drug  摘要 5-7 ABSTRACT 7-8 第1章 绪论 14-24     1.1 宫颈癌的发病原因 14-15         1.1.1 病毒感染与宫颈癌 14-15         1.1.2 不良生活习惯与

6、宫颈癌 15         1.1.3 经济条件与宫颈癌 15     1.2 宫颈癌的表现 15-16     1.3 宫颈癌的治疗 16-22         1.3.1 手术治疗 16         1.3.2 放射治疗 16-17        

7、1.3.3 化学治疗 17         1.3.4 生物技术与肿瘤治疗 17-19         1.3.5 天然植物治疗 19-22     1.4 问题与展望 22-23     1.5 本文的主要研究内容和意义 23-24         1.5.1 研究内容 23     &

8、#160;   1.5.2 研究意义 23-24 第2章 药物诱导肿瘤细胞凋亡研究进展 24-34     2.1 细胞调亡 24-28         2.1.1 细胞凋亡的概念、形态学和生化特征 24-25         2.1.2 细胞凋亡的机制 25-28     2.2 肿瘤与细胞凋亡 28-31      

9、0;  2.2.1 细胞凋亡在肿瘤治疗方面应用 29         2.2.2 天然植物诱导细胞凋亡 29-31     2.3 检测细胞凋亡的方法 31-33     2.4 本章小结 33-34 第3章 蕨菜与黄酮类化合物的研究进展 34-46     3.1 蕨菜植物介绍 34-38         3.1.1 蕨菜的食用价值 35-36  

10、;       3.1.2 蕨菜的药用价值 36-38         3.1.3 蕨菜的化学成分研究 38     3.2 黄酮类化合物抗肿瘤研究进展 38-43         3.2.1 黄酮类化合物介绍 38-39         3.2.2 黄酮抗肿瘤作用机制的研究进展 39-43

11、60;   3.3 本章小结 43-46 第4章 蕨菜总黄酮的提取及其含量测定 46-52     4.1 材料 46     4.2 方法 46-48         4.2.1 蕨菜黄酮的提取 46-47         4.2.2 蕨菜总黄酮含量测定 47         4.2.3 蕨菜总黄酮显色定性

12、实验 47-48     4.3 结果与分析 48-50         4.3.1 蕨菜中总粗黄酮和精黄酮提取率 48         4.3.2 蕨菜中总黄酮含量测定 48-50         4.3.3 蕨菜总黄酮显色结果 50     4.4 本章小结 50-52 第5章 蕨菜总黄酮体内抗宫颈癌活性的研究 52-74

13、    5.1 材料 52     5.2 方法 52-56         5.2.1 小鼠宫颈癌模型的建立 52-53         5.2.2 确定小鼠治疗剂量 53         5.2.3 实验分组和治疗方案 53-54         5.2.

14、4 实体瘤小鼠抑瘤率的计算 54         5.2.5 腹水瘤生命延长率的计算 54         5.2.6 对荷瘤小鼠免疫器官的影响 54         5.2.7 肝肾肿瘤组织病理切片观察 54-55         5.2.8 免疫指标测定 55     

15、60;   5.2.9 对U14 肿瘤组织的免疫组化试验 55-56     5.3 数据处理 56     5.4 结果与分析 56-67         5.4.1 蕨菜总黄酮对实体瘤抑制率 56-57         5.4.2 蕨菜总黄酮对小鼠腹水瘤的生命延长率 57-58         5.4.3

16、 免疫指标测定结果 58-59         5.4.4 肝肾和肿瘤组织病理切片观察结果 59-61         5.4.5 蕨菜总黄酮对小鼠血清抗氧化能力的影响 61-62         5.4.6 蕨菜总黄酮对小鼠胸腺、脾脏抗氧化能力的影响 62-64         5.4.7 免疫组化结果 64-67

17、    5.5 讨论 67-71         5.5.1 蕨菜黄酮用药安全讨论 67-68         5.5.2 小鼠肿瘤模型建立 68-69         5.5.3 蕨菜总黄酮对免疫器官作用的影响 69         5.5.4 肝肾病理切片结果讨论 69  &

18、#160;      5.5.5 蕨菜黄酮对小鼠血清中胸腺脾脏抗氧化防御体系的影响 69-70         5.5.6 蕨菜黄酮对小鼠肿瘤中Bcl-2、Bax、突变型p53 基因表达的影响 70-71     5.6 本章小结 71-74 第6章 蕨菜总黄酮体外抗人宫颈癌 Hela 细胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75      

19、0;  6.1.1 细胞株 74         6.1.2 实验药物 74         6.1.3 试剂药品 74-75         6.1.4 主要仪器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 细胞复苏 75  

20、0;      6.2.3 Hela 细胞的传代 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75-76         6.2.4 Hela 细胞的冻存 76         6.2.5 MTT 方法检测细胞增殖作用 76         6.2.6 细胞

21、形态学观察 76-78     6.3 结果与分析 78-83         6.3.1 MTT 法检测蕨菜黄酮对Hela 细胞增殖作用结果 78-79         6.3.2 光学显微镜观察HeLa 细胞形态变化 79-80         6.3.3 Hoechst 荧光单染细胞核形态变化 80     &#

22、160;   6.3.4 蕨菜黄酮诱导HeLa 细胞DNA 片段化的观察 80-81         6.3.5 蕨菜总黄酮对Hela 细胞周期分布的影响 81-83     6.4 讨论 83-85         6.4.1 蕨菜总黄酮对Hela 细胞生长的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞凋亡的

23、形态学变化 83-84         6.4.3 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜对细胞周期的影响 84-85     6.5 本章小结 85-86 结论 86-88 参考文献 88-100         5.5.5 蕨菜黄酮对小鼠血清中胸腺脾脏抗氧化防御体系的影响 69-70  

24、0;      5.5.6 蕨菜黄酮对小鼠肿瘤中Bcl-2、Bax、突变型p53 基因表达的影响 70-71     5.6 本章小结 71-74 第6章 蕨菜总黄酮体外抗人宫颈癌 Hela 细胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 细胞株 74         6.1.2 实验药物 74 

25、0;       6.1.3 试剂药品 74-75         6.1.4 主要仪器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 细胞复苏 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75      

26、   6.2.3 Hela 细胞的传代 75-76         6.2.4 Hela 细胞的冻存 76         6.2.5 MTT 方法检测细胞增殖作用 76         6.2.6 细胞形态学观察 76-78     6.3 结果与分析 78-83       

27、  6.3.1 MTT 法检测蕨菜黄酮对Hela 细胞增殖作用结果 78-79         6.3.2 光学显微镜观察HeLa 细胞形态变化 79-80         6.3.3 Hoechst 荧光单染细胞核形态变化 80         6.3.4 蕨菜黄酮诱导HeLa 细胞DNA 片段化的观察 80-81      

28、   6.3.5 蕨菜总黄酮对Hela 细胞周期分布的影响 81-83     6.4 讨论 83-85         6.4.1 蕨菜总黄酮对Hela 细胞生长的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞凋亡的形态学变化 83-84         6.4.3 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞DNA 片段化的

29、作用 84         6.4.4 蕨菜对细胞周期的影响 84-85     6.5 本章小结 85-86 结论 86-88 参考文献 88-100         5.5.5 蕨菜黄酮对小鼠血清中胸腺脾脏抗氧化防御体系的影响 69-70         5.5.6 蕨菜黄酮对小鼠肿瘤中Bcl-2、Bax、突变型p53 基因表达的影响 70-71

30、60;   5.6 本章小结 71-74 第6章 蕨菜总黄酮体外抗人宫颈癌 Hela 细胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 细胞株 74         6.1.2 实验药物 74         6.1.3 试剂药品 74-75     

31、60;   6.1.4 主要仪器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 细胞复苏 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75-76         6.2.

32、4 Hela 细胞的冻存 76         6.2.5 MTT 方法检测细胞增殖作用 76         6.2.6 细胞形态学观察 76-78     6.3 结果与分析 78-83         6.3.1 MTT 法检测蕨菜黄酮对Hela 细胞增殖作用结果 78-79       &#

33、160; 6.3.2 光学显微镜观察HeLa 细胞形态变化 79-80         6.3.3 Hoechst 荧光单染细胞核形态变化 80         6.3.4 蕨菜黄酮诱导HeLa 细胞DNA 片段化的观察 80-81         6.3.5 蕨菜总黄酮对Hela 细胞周期分布的影响 81-83     6.4 讨论 83-85  

34、;       6.4.1 蕨菜总黄酮对Hela 细胞生长的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞凋亡的形态学变化 83-84         6.4.3 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜对细胞周期的影响 84-85   

35、;  6.5 本章小结 85-86 结论 86-88 参考文献 88-100         5.5.5 蕨菜黄酮对小鼠血清中胸腺脾脏抗氧化防御体系的影响 69-70         5.5.6 蕨菜黄酮对小鼠肿瘤中Bcl-2、Bax、突变型p53 基因表达的影响 70-71     5.6 本章小结 71-74 第6章 蕨菜总黄酮体外抗人宫颈癌 Hela 细胞活 性的研究 74-86   

36、60; 6.1 材料 74-75         6.1.1 细胞株 74         6.1.2 实验药物 74         6.1.3 试剂药品 74-75         6.1.4 主要仪器 75     6.2 方法 75-78    

37、60;    6.2.1 Hela 细胞复苏 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75         6.2.3 Hela 细胞的传代 75-76         6.2.4 Hela 细胞的冻存 76         6.2.5 MTT 方法检测细胞增殖作用 76

38、        6.2.6 细胞形态学观察 76-78     6.3 结果与分析 78-83         6.3.1 MTT 法检测蕨菜黄酮对Hela 细胞增殖作用结果 78-79         6.3.2 光学显微镜观察HeLa 细胞形态变化 79-80         6.3.

39、3 Hoechst 荧光单染细胞核形态变化 80         6.3.4 蕨菜黄酮诱导HeLa 细胞DNA 片段化的观察 80-81         6.3.5 蕨菜总黄酮对Hela 细胞周期分布的影响 81-83     6.4 讨论 83-85         6.4.1 蕨菜总黄酮对Hela 细胞生长的抑制作用 83   

40、60;     6.4.2 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞凋亡的形态学变化 83-84         6.4.3 蕨菜总黄酮诱导Hela 细胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜对细胞周期的影响 84-85     6.5 本章小结 85-86 结论 86-88 参考文献 88-100       

41、60; 5.5.5 蕨菜黄酮对小鼠血清中胸腺脾脏抗氧化防御体系的影响 69-70         5.5.6 蕨菜黄酮对小鼠肿瘤中Bcl-2、Bax、突变型p53 基因表达的影响 70-71     5.6 本章小结 71-74 第6章 蕨菜总黄酮体外抗人宫颈癌 Hela 细胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 细胞株 74