血藤总黄酮对血虚小鼠抗贫血作用及机理研究

1、血藤总黄酮对血虚小鼠抗贫血作用及机理研究    【摘要】     目的观察鸡血藤总黄酮(STF)对化学因素所致的血虚小鼠外周血象及血清白细胞介素-3（IL-3），促红细胞生成素（EPO）水平的影响。方法采用盐酸苯肼（APH）、环磷酰胺（CTX）复合造模，建立血虚小鼠模型， 检测外周血象RBC，HGB，HCT及血清IL-3，EPO水平。结果与正常对照相比，模型小鼠的外周血象RBC，HGB，HCT，血清中的IL-3降低，而EPO升高(P<0.05）、EPO水平显著低于模型对照组(P< 0.01)。

2、结论鸡血藤总黄酮具有抗贫血作用，其作用机理可能与促进机体分泌IL-3、调节EPO水平，促进红系造血有关。     【关键词】  鸡血藤总黄酮； 血虚； 白细胞介素-3； 促红细胞生成素    Study on the Blood Enriching Effect and Mechanism of Spatholobus suberect Total FlavonoidsLIANG Ning， WEI Songji， LIN Qiyun(Guangxi College of Traditional Chin

3、ese Medicine ，Nanning, 530001, China)Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Suberect spatholobus total flavonoids (STF) on the peripheral blood hemogram and serum levels of IL-3 and EPO in  hemophthisis mice .MethodsThe methods of s.c. PHH and i.p. CTX were used to induce the model of hema

4、topenia in mice. The peripheral blood hemogram and the serum levels of IL-3 and EPO were measured.ResultsSTF could obviously increase the numbers of  HGB,RBC,HCT and the level of IL-3 of hemophthisis mice and degrade the level of EPO.ConclusionAll results suggested that STF can enrich blood STF

5、 and recover  the  haematogenesis  function of  hemophthisis mice by increasing the level of IL-3 and regulating the EPO level.Key words：Suberect  spatholobus；  Total  flavonoids；  Hemophthisis；  IL-3；  EPO    鸡血藤是一种活血化瘀的壮药， 主要分布在广西、广东

6、。其性温，味苦、甘，归肝、肾经。有补血、活血、通络的功效，用于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛等。本草纲目拾遗记载鸡血藤“活血”，饮片新参记载“鸡血藤去瘀血，生新血，流利经脉”。民间常用鸡血藤治疗各种原因引起贫血，具有较好的疗效。为探讨鸡血藤治疗贫血的有效部位和抗贫血作用机理，我们用ELISA法测定小鼠血清IL-3及EPO水平。现报道如下。1  材料1.1  动物昆明种小鼠（SPF级），1822g，广西壮族自治区食品药品检验所提供（生产许可证号：SCXK桂2003-0001）。1.2  药品鸡血藤总黄酮（STF），广西中医学院中药化学教研室提供，含量为6

7、0%；盐酸苯肼（APH）（上海元越化工有限公司）批号：20051030；阿胶（山东东阿阿胶股份有限公司）批号：2004030；环磷酰胺（CTX）（上海华联制药有限公司）批号：050914。1.3  试剂Mouse IL-3试剂盒（上海船夫生物公司）批号：20060512，Mouse EPO试剂盒（上海船夫生物公司）批号：20060725。1.4  仪器血球计数仪（sysmex  KX-21型），吉尔森微量取样器（法国Pipetman公司），酶标仪（奥地利Sunrise公司）。2  方法2.1  分组与给药取小鼠60只，体重1822 g，雌雄（）

8、兼用，随机分为6组：鸡血藤总黄酮高剂量组（200 mg/kg）、中剂量组（100 mg/kg）、低剂量组（50 mg/kg），阳性对照组给予阿胶（10 g/kg），空白对照组、模型组给予等容量的蒸馏水，以上各组i.g.给药，qd×8 d，给药容量为0.2 ml/10 g。2.2  血虚小鼠造模方法1除空白对照组外，给药后第2天sc盐酸苯肼（20 mg/kg）、第4天sc盐酸苯肼（40 mg/kg），第4，5，6，7天ip环磷酰胺(100 mg/kg) ，第8天末次给药后1 h，取血进行 RBC，HGB，HCT计数。结果见表1。2.3  ELISA法测定小鼠血清IL

9、-3及EPO水平小鼠摘眼球取血至EP管，放置室温下析出血清。3 000 r/min离心，分离血清，备用。将板条平衡至室温，从密封袋中取出，除空白孔外，分别将标本或稀释好的不同浓度的标准品50 l加入相应的孔中，除空白孔外，每孔再加入已稀释好的生物素化抗体50 l，用封板胶封住反应孔，37温育90 min，取出后洗板4次，除空白孔外，各管加入稀释好的酶结合物100 l，用封板胶封住反应孔，37温育30 min，取出后洗板4次，每孔加底物A、底物B各50 l，避光，室温（2025）10 min，每孔加终止液50 l，混匀，混匀后在1020 min内测量OD450值。查标准曲线得出IL3，EPO含量

10、。观察药物对小鼠血清中IL3，EPO含量的影响。结果见表2。2.4  统计分析应用SPSS10.0分析系统，数据以±s表示，组间差异用t检验。3  结果    除阳性对照组、STF高剂量组的HGB与模型组比较有极显著差异（P<0.01），STF高剂量组的HCT与模型组比较有极显著差异外（P<0.01）外，各剂量组药物RBC，HGB，HCT与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。提示：各组剂量药物对血虚动物RBC，HGB，HCT的下降有拮抗作用，与模型组对比有显著差异。结果见表1。   

11、 阳性对照组和各剂量组对IL3的下降和EPO的上升有拮抗作用，与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。提示：各剂量组对IL3浓度的下降和EPO浓度的上升有拮抗作用，与模型组比较有显著性差异。结果见表2。表1  鸡血藤总黄酮对血虚小鼠血常规的影响（略）与空白对照组比较，P表2  鸡血藤总黄酮对血虚小鼠血清中IL3、EPO含量影响（略）与空白对照组比较， P3  讨论    IL-3(白细胞介素-3)是一种造血促进因子，从干细胞到祖细胞多个不同阶段促进造血细胞增殖分化，造血生长因子促红细胞生成素(erythmpoietin， EP

12、O)是一种主要由肾脏分泌的具有高度糖基化的多肽细胞因子，是红细胞发育过程中最重要的调节因子2。IL-3由活化的T细胞产生，作为一种造血促进因子，从多个环节部位促进造血细胞的增殖分化3。鸡血藤总黄酮对血虚小鼠IL-3水平有显著影响，推断鸡血藤总黄酮抗贫血作用是通过调节促进因子如IL-3的生成而起作用。研究表明，EPO的水平与HGB成反比关系4。本实验结果显示化学因素造成小鼠的贫血，反馈性地引起血清EPO水平升高。给药组致使EPO下降，可能是治疗后贫血症状缓解，使EPO反馈性升高的程度减轻。    【参考文献】  1 金若敏， 宁 炼， 陈长勋，等.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究J.中成药，2001，23(4):269.2 杨 成，夏